• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권6호
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• pp.522-525
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• 1988

무혈청 배지에 생산촉진제로 30$\mu$g/m$\ell$의 Heparin 을 첨가해 정상인의 섬유 세포로부터 상업적으로 tPA를 생산할 수 있는 방법의 개발과, 효과적인 tPA 생산을 위해 대량 배양에 적합한 무혈청 배지의 조성을 확립했다. 이 방법으로 연속배양 공법하에서 매일 1.1gram의 tPA가 생산될 수 있으며, 이 생산성은 tPA 생산 단가를 크게 낮출 분만 아니라 무혈청 배지의 사용으로 tPA의 순수 정제 과정을 크게 단축시킬 수 있다. 또한 이 세포에서 생산되는 tPA 는 fibrin lysis 시험결과 섬유질 분해능력이 높음이 입증되었으며, ELISA결과와도 상충했다.

• 한국균학회지
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• 제33권2호
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• pp.69-74
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• 2005

민자주방망이버섯으로부터 분리한 혈전용해효소의 비활성은 22.78 U/mg 이었으며, fibrin를 직접 용해하는 fibrinolytic enzyme 이었다. 15번째까지 N-terminal amino acid 서열 분석 결과, Tyr-Pro-Ser-Pro-Ser-His-Gln-Thr-Ala-Val-Asn-Ala-Ile-Ile-X로 지금까지 발표되지 않은 새로운 효소였다. 분자량은 34 KDa 이고 pH 7.0 부터 pH 9.5의 넓은 영역에서 높은 활성을 나타내는 alkaline protease 였으며, $55^{\circ}C$에서 가장 큰 활성을 보이는 이 효소는 serine protease 저해제인 phenylmethylsulfonyl fluoride를 첨가한 경우 효소의 활성이 전혀 나타나지 않는 것으로 미루어 높은 혈전용해 활성을 갖는 새로운 serine protease로 생각된다. 또한 $Hg^{2+}$의 금속이온을 첨가한 경우에도 효소의 활성은 완전히 사라졌다.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제7권3호
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• pp.476-482
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• 2006

본 연구의 목적은 상업적으로 사용하기 위하여 혈전용해효소를 생성하는 세균인 MK-15를 분리하고 동정하는 것이다. 먼저 세균 MK-15는 자연 발효된 콩으로부터 농화분리하였으며, 이 세균에 대한 형태학적 및 다양한 생리학적 특성 조사를 실시하였다. MK-15의 배양 상등액으로부터 혈전용해효소 활성을 fibrin plate 방법으로 solid fibrinolytic activity를 측정하였다. 그 결과, 콩배지에서 자란 MK-15의 혈전용해활성은 대조군으로 사용된 plasmin의 혈전용해활성에 비하여 약 2.5배 높았다. 16S rRNA를 분석한 결과 균주 MK-15는 Bacillus subtilis 군과 99.9% 유사성을 나타내었다. 따라서, 이 세균은 Bacillus sp. MK-15로 명명하였으며. 균주 MK-15는 GenBank에 [DQ163021]로 등록하였다.

• KSBB Journal
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• 제9권1호
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• pp.48-54
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• 1994

HEK 세포 배양액 중에 존재하는 scu-PA와 tc-PA의 보다 정확한 측정을 위해 fibrin plate법과 기존의 amidolytic 방법을 변형시킨 측정법을 이용했다. 1%의 저혈청 배지를 이용한 T-flask 배양에서 $1.65{\times}10^6$(viable cells/ml)의 최대 세포수에 도달하여 1670(IU/ml)의 scu-PA 생산량을 보였으며 평균 10% 미만이 변환율을 보였다. 또한 Spinner vessel에서의 회분배양시 최대 세포수가 $4.43{\times}10^6(total cells/ml)$ 와 1560(IU/ml)의 scu-PA 생산량을 나타냈으며 평균 11.4%의 변환율을 보였다. 연속배양에서는 0.449(1/day)의 비생육속도와 $3.13{\times}10^{-4}(IU/cell)$의 비생산속도를 보였으며 평균 10.18% 정도의 전환율을 보였다. 이는 회분식 및 유가식 배양 결과와 큰 차이가 없으며 배양공정에 관계없이 약 90% 이상의 회수율이 가능하다는 것을 의미한다.

• 한국식품과학회지
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• 제37권2호
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• pp.255-260
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• 2005

혈전용해 활성과 면역세포 활성능이 우수한 청국장을 제조하기 위하여 청국장에서 분리된 220개의 세균으로부터 단백질 분해능과 점질물질 생성능이 우수한 13개의 Bacillus 균주를 선별하였다. 이들 13개 Bacillus 균주들의 fibrin plate 방법을 이용한 혈전용해 활성과 RAW 264.7 cell line을 이용한 cytokine 생성능력 (NO 생성능, Interlukin-1${\alpha},\;TNF-{\alpha}$) 검정에 의한 면역세포 활성능 측정실험을 수행하였는데, Bacillus 균주들을 TSB(Trypticase soy broth)에 키운 시료와 콩에 접종하여 제조한 청국장시료와 같은 두 가지 상이한 시료를 이용하여 혈전용해능과 면역세포 활성능을 측정한 결과, 혈전용해능과 면역세포 활성능이 가장 우수한 세 균주가 최종 선발되었다. 선발된 세균주의 동정결과 두 균주(CHKJ 1249, CHKJ 1326)는 Bacillus licheniformis로 그리고 CHKJ 1339 균주는 Bacillus subtilis로 동정되었다.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제9권3호
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• pp.800-806
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• 2008

자연발효된 청국장으로부터 혈전용해활성을 가지는 세균 Bacillus licheniformis HK-12를 농화분리하여, 배양기간 동안 생산된 혈전용해활성을 가지는 단백질에 대해 프로테옴 분석을 실시하였다. B. licheniformis HK-12를 액체 영양배지에 접종하여 얻어진 배양상등액을 피브린 평판법(fibrin plate method)을 사용하여 효소활성을 측정하였다. 그 결과, HK-12의 혈전용해 활성은 대조구인 plasmin보다 약 2.3배정도 높은 활성을 나타내었다. 효소는 배양상등액을 ammonium sulfate 침전, DEAE-cellulose chromatography, Sephadex chromatography 등을 수행하여 분리정제하였으며, 정제된 혈전용해효소의 분자량은 SDS-PAGE를 통해 약 23 kDa로 측정되었다. 배양시간에 따른 HK-6의 세포외 단백질의 변화를 2-D PAGE 분석을 통하여 분석하였다. 그 결과 36시간배양 후에 가장 현저하게 유도된 spot #1을 분리하였으며, MALDI-TOF MS를 이용하여 단백질 동정을 실시한 결과, 유도된 단백질의 아미노산 서열은 $^1EKKIEKYREEEORLK^{15}$으로서, serine protein kinase (PrkA) (AAU22526)로 확인되었다.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제12권6호
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• pp.643-649
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• 2005

전통발효식품인 된장으로부터 높은 활성의 fibrinolytic enzyme를 생산하는 미생물을 수십 종 분리하였다. 산업적으로 우수한 균종을 선별하기 위하여 분리된 미생물중 fibrinolytic enzyme활성과 성장 속도면에서 가장 우수한 균주를 선별하여 하였으며, 형태학적, 생화학적 및 생리학적 특성을 조사한 후 Bacillus sp.로 동정되었다. Fibrinolytic enzyme생산을 위한 최적 배양조건은 초기 pH $6\~8$일 때 상대활성도가 $80\%$이상을 나타내었고, 배양 12시간째에 가장 높은 활성도를 나타내었다. Fibrin plate를 이용한 혈전용해능을 확인한 결과 높은 혈전용해능을 가지고 있었다. 탄소원으로 galactose를 $4\%$ 첨가 하였을 때 가장 우수하였으며, 질소원은 malt extract를 $4\%$ 첨가 하였을 때 가장 우수하였다. 무기염은 $K_2HPO_4$를 첨가하였을 때 가장 우수한 활성을 나타내었다.

• BMB Reports
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• 제38권2호
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• pp.177-181
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• 2005

Effects of common electrophoretic reagents, reducing agents ($\beta$-mercaptoethanol [BME] and DTT), denaturants (SDS and urea), and non-ionic detergent (Triton X-100), on the activity and stability of bovine plasmin (b-pln) and human plasmin (h-pln) were compared. In the presence of 0.1% SDS (w/v), all reagents completely inhibited two plns, whereas SDS (1%) and urea (1 M) denatured plns recovered their activities after removal of SDS by treatment of 2.5% Triton X-100 (v/v). However, reducing agents (0.1 M of BME and DTT) treated plns did not restore their activities. Based on a fibrin zymogram gel, five (from b-pln) and four (from h-pln) active fragments were resolved. Two plns exhibited unusual stability in concentrated SDS and Triton X-100 (final 10%) and urea (final 6 M) solutions. Two bands, heavy chain-2 (HC-2) and cleaved heavy chain-2 (CHC-2), of b-pln were completely inhibited in 0.5% SDS or 3 M urea, whereas no significant difference was found in h-pln. Interestingly, 50 kDa (cleaved heavy chain-1, CHC-1) of b-pln and two fragments, 26 kDa (light chain, LC) and 29 kDa (microplasmin, MP), of h-pln were increased by SDS in a concentration dependent manner. We also found that the inhibition of SDS against both plns was reversible.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권9호
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• pp.1449-1459
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• 2015

A novel proteolytic enzyme with fibrinolytic activity, FSP3, was purified from the recently isolated Streptomyces sp. P3, which is a novel bacterial strain isolated from soil. FSP3 was purified to electrophoretic homogeneity by ammonium sulfate precipitation, anion exchange, and gel filtration. FSP3 is considered to be a single peptide chain with a molecular mass of 44 kDa. The maximum activity of the enzyme was observed at 50℃ and pH 6.5, and the enzyme was stable between pH 6 and 8 and below 40℃. In a fibrin plate assay, FSP3 showed more potent fibrinolytic activity than urokinase, which is a clinical thrombolytic agent acting as a plasminogen activitor. The activity was strongly inhibited by the serine protease inhibitor PMSF, indicating that it is a serine protease. Additionally, metal ions showed different effects on the activity. It was significantly suppressed by Mg²⁺ and Ca²⁺ and completely inhibited by Cu²⁺, but slightly enhanced by Fe²⁺. According to LC-MS/MS results, its partial amino acid sequences are significantly dissimilar from those of previously reported fibrinolytic enzymes. The sequence of a DNA fragment encoding FSP3 contained an open reading frame of 1287 base pairs encoding 428 amino acids. FSP3 is a bifunctional enzyme in nature. It hydrolyzes the fibrin directly and activates plasminogen, which may reduce the occurrence of side effects. These results suggest that FSP3 is a novel serine protease with potential applications in thrombolytic therapy.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제13권2호
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• pp.241-245
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• 2006

국산 한약계 추출물을 첨가하여 제조한 전통 콩된장의 아질산염 소거작용, 수소공여능, 항균활성 및 혈전용해능 등을 검토하였다. 한약재 추출물을 첨가하여 제조한 된장은 대조구 된장에 비하여 대부분이 높은 아질산염 소거능을 나타내었다. 한약재 추출물 첨가 농도가 높을수록 아질산염 소거능은 증가되었으며, III군과 IV군의 된장이 다른 I군과 II군의 된장보다 약간 높은 아질산염 소거능을 나타내었다. 수소공여능은 한약재 추출물 첨가 된장이 대조구 된장보다 약간 높은 경향을 나타내었으나 각 된장군 사이에는 큰 차이가 나타나지 않았다. 된장의 추출물을 사용하여 Str. mutans 및 Sal. enteritidis 등의 병원성 미생물에 대한 항균활성 및 fibrin배지 상에서의 혈전용해능은 대조구보다 모든 시험구에서 높게 나타났다. 이상의 결과로 한약재 추출물을 첨가하여 제조한 III군과 군은 색깔이 대조구와 유사하고, 기호도, 생리활성 및 항균활성 등이 우수하여 기능성이 강화된 새로운 전통된장의 개발 가능성이 높은 것으로 판단된다.