본 연구는 포장두부에서 부패 세균을 분리.동정하고, 부패균주의 생육 특성과 내열성을 조사하여 두부 제조공정의 위생관리를 위한 기초 자료로 제시할 목적으로 수행되었다. 포장두부의 부패에 관여하는 세균을 분리하여 Vitek system을 이용하여 동정한 결과, Strain No. T1은 Enterobacter amnigenus일 확률이 92%, Strain No T2는 Flavobacterium indologenes일 확률이 96%이었다. 이들 균주는 $35^{\circ}C$와 pH6.5일 때 가장 생육이 왕성하였다. Enterobacter amnigenus T1의 내열성을 검토한 결과, $60^{\circ}C$에서 2분 처리하였을 경우 초기보다 56.3%, $70^{\circ}C$에서는 37.8%, $80^{\circ}C$에서는 34.0%, $90^{\circ}C$에서 처리했을 때는 22.2%가 잔존하였고, Flavobacterium indologenes T2 경우는 $60^{\circ}C$에서 2분 동안 처리하였을 때 74.8%, $70^{\circ}C$에서는 65.7%, $80^{\circ}C$에서는 37.3%, $90^{\circ}C$에서 처리했을 경우는 9.3%가 잔존하였다.
질소비료의 과량 시용에 따른 시설원예지 토양 중 염류집적은 다양한 직물에 염류장애를 유발하여 국내농업에 심각한 문제가 되고 있다. 염류의 주성분은 질산염으로 필요이상의 질산이온을 제거하기 위하여 질산이온 흡수력이 크며, Enterobacter amnigenus GG0461로 동정된 토양세균을 시설원예 토양에서 분리하였다. 이 균주의 최적 생육 및 질산이온 흡수력을 조사하였을 때, GG0461 균주는 질산이온이 없는 조건에서 생육이 가능하나, 질산이온이 존재할 때 생육이 크게 촉진되었다. 또한, 염기성 조건에서 질산이온 흡수율이 증가하였으며, 성장과 질산이온 흡수 모두 pH 8-9에서 최대로 나타났다. 배지의 초기 pH를 8과 9로 조정하였을 때, 균주에 의하여 질산이온이 흡수됨에 따라 배지의 pH는 중성으로 감소하였다. 이러한 결과는 질산이온 흡수를 위한 주된 인자가 nitrate/proton antiporter임을 의미한다. 이것은 질산이온이 없는 조건에서 질산이온의 첨가 효과인 질산이온 흡수의 급격한 증가와 빠른 배지의 pH 감소 사실로도 확인되었다.
농업 환경 중에 과잉으로 축적한 질산이온의 제거를 위하여, 질산이온 흡수력이 우수한 Enterobacter amnigenus GG0461 균주를 분리하였다. 이 균주는 Pseudomonas agar F (PAF) 배지에 배양하였을 때, 3,000 ppm (50 mM) 이상의 질산이온 흡수가 가능하므로, 농업용 토양, 축산폐수, 산업폐수를 포함한 오염된 환경의 질산이온 제거를 위한 좋은 후보 균주가 될 수 있다. GG0461 균주의 대량생산을 위한 상업용 배지를 개발하기 위하여 PAF 배지 성분을 상업용 재료로 대체하고, 균주의 성장과 질산이온 흡수 활력을 측정하였다. 탄소원인 글리세롤은 상업용 제품으로 대체하였고, 질소원으로 tryptone과 효모추출물, 대두박, 생선발효액을 배양실험에 사용하였다. 균주의 성장과 질산이온 흡수활력은 2% tryptone을 첨가한 배지에서 가장 우수하였고, 효모추출물, 대두박, 생선발효액의 순으로 효과가 나타났다. Tryptone을 2% 첨가한 배지에서 균주의 질산이온 흡수는 배지의 pH를 낮추었으며, 이것은 질산이온의 흡수가 nitrate/proton antiporter의 활성으로 나타남을 의미한다. 이상의 결과에서 상업용 tryptone을 사용한 배지는 균주의 생리활성에 적합하였으며, peptone을 제외한 PAF 배지의 각 성분은 그것에 해당하는 상업용 재료로 대체할 수 있었다. 결론적으로, GG0461 균주의 배양을 위한 상업용 배지성분 조성은 2% tryptone과 1% glycerol, PAF 배지를 위한 무기이온들로 결정하였다.
Bacterial arylsulfate sulfotransferase (ASST) catalyzes the transfer of sulfate group from a phenyl sulfate ester to a phenolic acceptor. The promoter region and the transcripti on start sites of Enterobacter amnigenus astA have been determined by primer extension analysis. Northern blot analysis resolved two mRNA species with lengths of 3.3 and 2.0 kb, which correspond to the distances between the transcriptional initiation sites and the two inverted repeat sequences (IRSs). By length, the 3.3 kb RNA could comprise the three-gene (astA with dsbA and dsbB) operon. ASST has three highly conserved cysteine residues. Reducing and non-reducing SDS-PAGE and activity staining showed that disulfide bond is needed for the activity of the enzyme. To identify the cysteine residues responsible for the disulfide bond formation, a series of Cys to Ser mutants has been constructed and the enzymatic activity was measured. Based on the results, we assumed that the first cysteine (Cys349) might be involved in disulfide bond mainly with the second cysteine (Cys445) and result in active conformation.
To develop eco-friendly microbial inoculants, siderophore-producing bacteria were isolated and identified, and their production characteristics and plant growth-promoting abilities were investigated. A strain S21 was isolated from rhizosphere of Korean perilla (Perilla frutescens) and identified as Enterobacter amnigenus by phenotypic properties and 16S rRNA gene sequencing. The highest siderophore production was obtained in a medium containing 0.5% fructose, 0.1% urea, 0.5% K2HPO4 and 0.1% succinic acid. By using this improved medium, siderophore production increased by 2.5 times compared to that of basal medium. The strain S21 showed insoluble phosphate solubilizing, ammonification and antifungal activities, and also produced hydrolytic enzymes (protease and lipase), indoleacetic acid and 1-aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase. Our data suggest that E. amnigenus S21 is a potential candidate that can be used as eco-friendly biocontrol agent and biofertilizer.
In this study, 50 rump samples of raw beef obtained from local Korean supermarkets were analyzed to survey microbial distributions. As results, mesophilic microorganisms ranged from $(1.4{\pm}0.01){\times}10^2$ to $(1.6{\pm}0.05){\times}10^5\;CFU/g$, and total coliforms ranged from 0 to $(1.3{\pm}0.04){\times}10^4\;CFU/g$. Major foodborne pathogens, including Listeria monocytogenes, Escherichia coli O157:H7, and Salmonella spp., were not found among the samples. However, Staphylococcus aureus was isolated with 4% frequency. Other isolated microorganisms included Enterobacter amnigenus (4%), Enterobacter cloacae (24%), E. coli (24%), Listeria innocua (8%), Staphylococcus saprophyticus (56%), Staphylococcus xylosus (10%), and Staphylococcus warneri (8%).
생활용수로 사용하는 영남지역 지하수의 세균학적 수질을 평가하기 위해, 여름 123개 지점, 겨울 117개 지점에서 지하수 시료를 채수하였다. 일반세균 수의 중앙간은 여름 30 CFU/ml, 겨울 40 CFU/ml이었고, 25% 이상의 조사지점에서 일반세균 수는 먹는물 수질기준 100 CFU/ml을 초과하였다. 전체 조사지점 중 여름 46%, 겨울 30%의 지점에서는 대장균군이 검출되었으며, 이들 지점에서 대장균군 수의 중앙간은 여름 20 CFU/ml, 겨울 4 CFU/ml로 여름이 겨울보다 높았다. 분리한 대장균군 세균은 Citrobacter속, Enterobacter속, Eschericitia속, Klebsiella속, Pantoea속, Rahnella속, 그리고 Serratia속으로 동정되었으며, Enterobacter속이 48%를 차지하여 가장 많았다. 종별로는 E. cloacae, E. amnigenus, K. pneumoniae등이 빈도가 높게 분리되었으며, 반면 E. coli는 1개 조사지점에서만 분리되었다. 대장균군 수는 일반세균 수와 양의 상관관계를 보였으며, 일반세균 수는 수온과도 양의 상관관계가 있었다. 본 연구의 결과는 지하수에서 대장균군의 오염에 대한 보다 자세한 정보를 제공해 주며, 영남지역의 지하수에서 병원성 미생물의 오염 가능성이 여전히 높음을 시사한다.
김치 소비가 증가하면서 공장에서 큰 규모로 만들어지게 되었다. 그래서 상업용 김치의 위생 상태는 주 관심사가 되었다. 충분히 발효되지 않은 상업용 김치로부터 17종의 대장균유사세균(coliform bacteria)을 분리하였다. 16S rDNA 분석에 의하여 Enterobacter intermedius, Ent. cloacae, Ent. amnigenus, Klebsiella terrigena, K. ornithinolytica, K. oxytoca, Hafnia alvei 등의 3속 7종으로 부분 동정되었다. 한편, 오래된 배추김치로부터 Lactobacillus paraplantarum KNUC25라고 부분 동정된 젖산균이 분리되어 그의 항미생물 활성이 보고되었다. 이 균주는 spot-on the lawn test와 세포생존실험을 통하여 본 연구에서 분리한 대장균유사세균과 몇몇 유해한 대장균유사세균에 대하여 항세균 활성을 보여 주었다. 상업용 김치에 있는 대장균유사세균은 L. paraplantarum KNUC25균주 배양 상층액의 첨가에 의하여 효과적으로 억제되었다.
본 연구는 원유의 내냉성 미생물의 계절별 분포에 관해 조사하기 위해서 수행하였다. 내냉성 미생물은 최적 생장온도가 $30^{\circ}C$ 근처이지만, $7^{\circ}C$ 이하에서도 생존가능한 균으로 Pseudomonas, Achromobacter, Aeromonas 속 등이 있다. 원유로부터 분리한 총 내냉성 미생물 균수는 다른 계절에 비해 겨울철 원유에서 $3.0{\times}10^4$ CFU/mL로 가장 높은 수준으로 검출되었고, 다른 지역에 비해 B 지역에서 $2.4{\times}10^5$ CFU/mL로 유의적으로 높은 균수가 측정되었다(p<0.05). 분리한 총 706개의 균을 동정한 결과는 Gamma-proteobacteria 강이 전체의 81.02%로 가장 우세하였고, 그 중 Pseudomonas 속이 32.34%로 가장 높은 검출 빈도수를 나타내었으며, 특히 Pseudomonas fluorescens가 39.46%로 가장 우세하였다. 동정된 내냉성 미생물의 지역별 분포는 A 지역은 12개의 Acinetobacter johnsonii, B 지역은 21개의 Pseudomonas fluorescens, C 지역은 13개의 Enterobacter amnigenus, D 지역은 19개의 Psychrobacter maritimus, E 지역은 19개의 Acinetobacter johnsonii, F 지역은 8개의 Acinetobacter haemolyticus, G 지역은 20개의 Pseudomonas fluorescens, H 지역은 9개의 Acinetobacter johnsonii, I 지역은 17개의 Pseudomonas mucidolens가 높은 검출 빈도수를 나타내었다.
Arylsulfate sulfotransferase (ASST) transfers a sulfate group from a phenolic sulfate ester to a phenolic acceptor substrate. In the present study, the gene encoding ASST was cloned from a genomic library copy of Citrobacter freundii, subcloned into the vector pGEM3Zf(-) and sequenced. Sequencing revealed two contiguous open reading frames (ORF1 and ORF2) on the same strand and based on amino acid sequence homologyl they were designated as astA and dsbA, respectively. The amino acid sequence of astA deduced from C. freundii was highly similar to that of the Salmonella typhimurium, Enterobacter amnigenus, Klebsiella, Pseudomonas putida, and Campylobacter jejuni, encoded by the astA genes. However, the ASST activity assay revealed different acceptor specificities. Using p-nitrophenyl sulfate (PNS) as a donor substrate, $\alpha$-naphthol was found to be the best acceptor substrate, followed by phenol, resorcinol, p-acetaminophen, tyramine and tyrosine.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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