• Applied Biological Chemistry
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• 제44권3호
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• pp.197-201
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• 2001

우슬(Achyranthis radix)중 ${\beta}-ecdysone$의 초임계추출법과 용매추출법의 비교를 위해 초임계유체추출(SFE) 및 용매추출 후 초임계유체크로마토그래피(SFC)에 의한 우슬 중 ${\beta}-ecdysone$ 분석을 실시하였다. SFE에 있어서 추출 최적압력은 300 atm이었으며, 온도는 $80^{\circ}C$, 추출량은 100 ml, 보조제인 methanol 함량비율은 20%였다. 우슬에서 ${\beta}-ecdysone$의 분석시 SFC의 최소검출량은 5 ng이었고, SFE의 회수율은 줄기에서는 $90.7{\sim}93.5%$였으며, 뿌리에서는 $77.8{\sim}81.9%$였다. 용매추출의 회수율은 줄기에서는 $76.4{\sim}93.0%$였고 뿌리에서는 $80.6{\sim}93.1%$였다. 우슬의 생육기별 조사에서 ${\beta}-ecdysone$은 주로 뿌리에서 많이 검출되었고 1년생이면서 8월에 수확한 것이 654.9 ppm으로 가장 많이 함유한 것으로 나타났다.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제12권3호
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• pp.275-281
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• 2005

우슬이 민간요법으로 관절염 치료에 우수한 한약재로 알려진 바 우슬 추출물이 cathepsin B 에 대한 저해력을 검토하기 위하여 각종 용매로 우슬 추출물을 순차 분획하고 분획 추출물에 대하여 cathepsin B에 대한 저해활성을 검토하였으며 우슬의 지표물질인 20-hydroxy ecdysone이 추출분획에 검출되는지 TLC 및 HPLC를 이용하여 분석하였으며 우슬의 지표물질이 cathepsin B에 대한 저해활성여부를 확인한바 다음과 같은 결과를 얻었다. 우슬 뿌리에 대해 methanol/water(4:1, v/v) 추출물을 ethyl acetate, chloroform, chloroform/methanol(3:1, v/v), methanol의 각 용매로 분획한 결과, 분획 F4(methanol 분획)에서 수율이 가장 높아 $8.27\%$를 나타내었다. 각 분획별에 따라 cathepsin B에 대한 저해활성을 측정한 결과 F4분획물에서 가장 저해활성이 높았으며 F1분획에서도 높은 저해활성을 나타내었다. F4분획물 중 우슬의 지표물질인 20-hydroxy ecdysone이 검출되었으며 우슬에 함유되어있는 함량은 $0.33\%$이었다. 20-hydroxy ecdysone에 대하여 cathepsin B저해활성을 보기 위하여 cathepsin B저해활성제로 알려진 leupeptin과 활성을 비교해본 결과 기질을 BANA로 사용하였을 경우 leupeptin은 저해율이 $92\%$인데 비하여 20- hydroxy ecdysone은 $88\%$이었으며 F4분획물은 $97\%$를 나타내었고 기질을 CLN으로 사용하였을 경우 leupeptin은 저해율이 $62\%$인데 비하여 20-hydroxy ecdysone은 $36\%$이었으며 F4추출물은 $67\%$를 나타내었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제26권1호
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• pp.30-34
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• 1984

가잠중장의 성충분화에 미치는 홀몬의 작용을 알기 위하여 번데기의 유리복부 및 제뇌시킨 영속용에 20-Hydroxyecdysone과 전흉선 작극홀몬(PTTH)를 투여하고, 이에 따른 중장의 형태적 변화와 중장 조직 단백질의 변화를 polyacrylamide gel 전기영동으로 조사하였다. 얻어진 결과는 다음과 같다. 1. 번데기의 유리복부에 ecdysone을 주사하면 체내의 각 조직 및 기관에는 성충분화가 일어났다. 중장의 습중량의 변동을 조사한 결과, 홀몬 주사 후 3일째부터 중량이 감소하는 등 마치 정상충에서와 같은 중장의 변태 양상을 나타냈다. 한편 중장조직에서는 용특이한 단백질(PSP)이 소실되고 새로이 성충형 단백질이 생성되었다. 이와 같은 중장 조직에서의 단백질 변화 양상은 영속용에 ecdysone과 PTTH를 투여한 경우에도 동일한 결과를 나타냈다. 2. 이상의 결과, 용일성충에의 중장변태는 PTTH의 자극에 의해 활성화된 전흉선에서 분비되는 ecdysone에 의해 유도되고 있음이 확인되었다.

• 한국환경보건학회지
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• 제28권4호
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• pp.1-5
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• 2002

Drosophila Kc cells are ecdysone-responsive : hormone treatment leads rapidly to increased synthesis of several ecdysone-inducible polypeptides (EIPs) and to commitment to eventual proloferative arrest. Later the treated cells undergo morphological transformation, cease to proliferate and to grow. These responses have proven useful as models for studying ecdysone action and environmental endocrine disrupting actions. In this study, we used 20-HE to check out the Kc cells properties to the ecdysone and this properties will be applied to the environmental chemicals to find out the endocrine disrupting action in ecosystem. The cell counts of cultures harvested after 3 days' growth in the presence of 20-hydroxyecdysone. In Kc cell cultures, there were statistically significant different from control cells at 20HE 10/sup 7/-10/sup 5/. The morphological effects of all the hormones were similar, differing only in the dose level at which they were initiated.

• 한국환경보건학회지
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• 제38권4호
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• pp.351-359
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• 2012

Objectives: This study was conducted in order to investigate the specific correlation between physicochemical properties and bioactivity in ecdysteroids found in living organisms. Methods: The examined steroidal compounds were classified into three groups according to their relevance to ecdysone activity. Each compound molecule was completely drawn to automatically calculate its physicochemical parameters and docked against 20-hydroxyecdysone to calculate the total distance. Electronic charge distribution was also observed for each molecule. All procedures were conducted using a computational chemistry program. Results: Ecdysone agonists showed different ranges of parameter values, such as log P, hydrophilic-lipophilic balance (HLB), solubility parameter (SP), hydrophilic surface (HPS), hydrogen bond (HB) and Kappa 2, when compared with antagonists and steroids without ecdysone activity. They also showed a similar electronic charge distribution that is significantly different from the electron charge distribution of antagonists and steroids without ecdysone activity. The total distance values of agonists, estimated by docking them with 20-hydroxyecdysone, were relatively small but showed no correlation with binding affinity with receptor ligand. Conclusions: These results suggest that physicochemical properties such as steric and electronic effects, hydrophobicity and hydrogen bonding may operate in combination to determine the binding activity of ecdysteroids to the receptor protein.

• Molecules and Cells
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• 제41권12호
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• pp.1024-1032
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• 2018

The central mechanisms coordinating growth and sexual maturation are well conserved across invertebrates and vertebrates. Although mutations in the gene encoding makorin RING finger protein 3 (mkrn3) are associated with central precocious puberty in humans, a causal relationship has not been elucidated. Here, we examined the role of mkrn1, a Drosophila ortholog of mammalian makorin genes, in the regulation of developmental timing. Loss of MKRN1 in $mkrn1^{exS}$ prolonged the $3^{rd}$ instar stage and delayed the onset of pupariation, resulting in bigger size pupae. MKRN1 was expressed in the prothoracic gland, where the steroid hormone ecdysone is produced. Furthermore, $mkrn1^{exS}$ larvae exhibited reduced mRNA levels of phantom, which encodes ecdysone-synthesizing enzyme and E74, which is a down-stream target of ecdysone. Collectively, these results indicate that MKRN1 fine-tunes developmental timing and sexual maturation by affecting ecdysone synthesis in Drosophila. Moreover, our study supports the notion that malfunction of makorin gene family member, mkrn3 dysregulates the timing of puberty in mammals.

• Applied Biological Chemistry
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• 제41권4호
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• pp.251-256
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• 1998

The analytical method of ${\beta}-ecdysone$, the insect moulting hormone, by high performance liquid chromatograph (HPLC) with UV detector was developed using boronic ester derivatization and applied to the extracts of Ajuga iva, Silene otites and Schistocerca egg. Derivatization of yield with methyl-, butyl-, and phenyl-boronate was completed under mild conditions with 20-hydroxyecdysone. The conversion ratios of boronate were estimated to be 70% in methylboronic acid, 89% in butylboronic acid and 93% in phenylboronic acid. Phenylboronate showed a high sensitivity and demonstrated an effective separation on HPLC. The optimum temperature and reaction time for derivative formation were $25^{\circ}C$ and 20 min. respectively. ${\beta}-Ecdysone$ was effectively identified in extracts of Ajuga iva, Silene otites and Schistocerca egg by the HPLC method.

• Applied Biological Chemistry
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• 제44권3호
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• pp.153-161
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• 2001

Ecdysteroid 생합성에 관련된 식물 유전자를 분리할 목적으로 ecdysteroid 생성능이 확인된 쇠무릎(Achyranthes japonica Nakai)으로부터 RNA를 분리하고, ecdysteroid 생합성에 관여한다고 알려진 cytochrome P45O family 유전자 4개와 곤충의 ecdysone 20-hydroxylase 유전자의 다중정렬 분석결과를 토대로 상동성이 높은 부위의 염기서열에 상응하는 degenerate primer를 사용하여 RT-PCR을 행하고, 고유한 염기서열을 가진 partical cDNA clone 14개를 선발했다. 기존에 ecdysteroid 생합성에 관여한다고 알려진 cytochrome P450 family 유전자들과의 염기 및 아미노산 서열의 상동성을 분석한 결과, 선발된 cDNA 중 6개가 cytochrome P45O fumily 유전자들과 상동성이 있는 것으로 나타났다. 이 중에서 4개의 clone은 곤충의 ecdysone 20-hydroxylase 유전자와도 상동성이 높아 ecdysteroid 생합성에 관련된 유전자로 추정되었다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제5권2호
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• pp.131-136
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• 2001

초파리 발생과정에서 세포사멸에 관여하는 유전자인 reaper(rpr), grim, dcp-1, diap1, diap1, diap2의 발현양상을 경제적 RT-PCR 방법으로 분석하였다. 세포사멸 유도 유전자인 rpr, grim의 발현양상은 발생단계에 따른 ecdysone titer 변화 양상과 매우 유사하였다. Effector caspase인 dcp-1 전사체는 초기 배와 암컷 성체에서 높은 발현을 보였다. 반면에 세포사멸 억제인자인 diap1과 diap2 전사체는 세포사멸 유도 인자인 rpr과 girm 전사체와 서로 상반적인 양상으로 발현되었다. 또한, 유주 3령 유충의 발생단계 별로 침샘조직과 성체원기조직에서 rpr, diap2, dcp-1의 전사체의 양적 변동을 분석하였다. rpr, diap2의 전사체양은 두 조직에서 서로 상반적으로 변화하였다. 이 결과는 정상 발생과정에서 세포죽음 관련유전자들의 발현이 ecdysone 신호에 의해 조절됨을 암시해 주었다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제4권2호
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• pp.137-141
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• 2002

An experimental study was undertaken to quantify the effects of insect hormones on the replication of nucleopolyhedrovirus (NPV). The results demonstrated that TCID/ sub 50/ at 72 h post-infection (hpi) rose systematically from 0.55$\times$10$^{8}$ /m1, for untreated cells, up to 1.67$\times$10$^{8}$ / ml at 3$\mu$g/ml, then dropped down to 1.45$\times$10$^{8}$ /m1 at 4 $\mu$g/ml, by adding ecdysone to the culture medium for Bm-N cells infected with a wild-type Bambyx mori. nucleopolyhedrovirus (BmNPV). The optimum enhancement of about 3 times on budded virus (BV) titer at 72 hpi was given at 3 $\mu$g/ml of ecdysone. While the polyhedra number had no obvious variation within the range of concentrations from 0 to 4 $\mu$g/ml. By addition of juvenile hormone analogue (JHA) into the media with this concentration range, the BmNPV TCID/ sub 50/ and polyhedra number at 72 hpi did not show significant changes. Also, the addition of either 3 $\mu$g/ml of ecdysone or 3 $\mu$g/ml of JHA to the culture media did not appear to affect the TCID/ sub 50/ and polyhedra number significantly in infected Sf-21 cells with the autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV).