• 생명과학회지
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• 제30권7호
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• pp.651-659
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• 2020

허혈성 심혈관질환은 전 세계적으로 치사율이 높은 질병 중 하나이다. 이를 치료하기 위해 수술적 방법이 시행되고 있으나, 손상된 심근조직 회복의 어려움과 수술 후 부작용의 한계가 남아있다. 이러한 한계점을 극복하기 위해, 최근 줄기세포를 기반으로 한 심혈관질환의 세포치료제가 각광받고 있는데 그 중에서도 특히 혈관내피전구세포(EPC)는 높은 증식능과 분화능을 기반으로 손상된 혈관을 재생하고, 주변 조직의 재생을 돕는다는 장점이 있다. 또, EPC는 임상적으로 안전하며, 환자의 심근 기능을 회복시켜주기에 잠재적인 심혈관질환 치료제로서의 가능성이 대두되었다. 하지만, 환자 유래 EPC를 이용한 치료법은, 고령, 흡연 여부, 기저질환 등의 이유로 환자의 EPC 기능이 저하되어 있어, 그 치료 효능을 기대하기 어렵다. 따라서, 최근에는 세포 프라이밍 기법, 오가노이드 배양법과 같이 EPC의 생리학적 활성도를 올리는 체외 배양법의 개발과 3D 바이오프린팅 기법을 이용한 EPC의 이식 효율을 높여 치료 효능을 개선시킬 수 있는 새로운 접근법이 연구되고 있다. 본 연구에서는 EPC의 특징과 세포치료제로서의 임상적용 가능성에 대해 살펴보고자 한다.

• 한국어병학회지
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• 제11권2호
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• pp.89-96
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• 1998

해양버나바이러스(MABV)는 여러 종의 해양생물에 감염되며 숙주역이 넓다. 다양한 종의 숙주에 감염되었을 때의 MABV의 감염 특성을 규명하기 위하여, 주화세포 내에서 바이러스를 10대 계대 배양하여 in vitro로 연구했다. CHSE-214, RTG-2와 RSBK-2세포에서는 전형적인 CPE를 보이며 많은 양의 바이러스가 생산되었고, 높은 바이러스 단백질의 발현도 관찰되었다. 이에 반하여, EPC, FHM과 BF-2세포에서는 형광항체법에 의하여 바이러스단백질은 검출되었으나 CPE는 나타나지 않았다. EPC와 FHM 세포에서는 계대를 할수록 바이러스의 역가가 높아져, 바이러스의 숙주세포에의 적응이 일어난 것으로 보인다. 플라크의 크기는 CHSE-214, RTG-2와 RSBK-2세포에서 계대한 것이 다른 세포에서 계대한 것보다 커, 숙주세포의 종류에 따른 변이가 바이러스에 일어난 것으로 추측되었다. 게놈분절 A에 존재하는 VP2/NS 경계영역의 염기배열에서는 195번째의 염기에 특이적인 변이가 보였다. 숙주세포의 종류에 따라 다른 MABV의 감염특성은 자연계에서 다양한 숙주종에서 일어나는 in vivo에서의 감염특성을 반영하는 것으로 생각된다.

• 농약과학회지
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• 제18권1호
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• pp.8-13
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• 2014

본 연구는 5가지 제품농약을 이용하여 어류 급성독성시험 결과 (반수치사농도)와 잉어의 표피에서 유래된 EPC 세포를 이용한 neutral red uptake 결과 (반수저해농도)를 비교함으로써 동물 실험의 대체 가능성을 평가하기 위하여 수행되었다. 어류 급성 독성시험은 왜몰개 (Aphyocypris chinensis)를 포함하여 OECD와 농촌진흥청의 농약에 대한 독성시험기준에서 추천하는 어종인 송사리 (Oryzias latipes)와 잉어 (Cyprinus carpio)를 이용하여 수행하였다. 5가지 제품 농약에 대한 민감도는 어류에 비하여 세포에서 약 10배 더 낮게 확인되었지만, 독성을 서열화 하였을 때 나타나는 순서는 두 가지 방식에서 모두 비슷하게 나타났다. 5가지 제품 농약에 대한 세포와 어류 독성값의 상관성을 분석한 결과는 A. chinensis, O. latipes와 C. carpio에서 각각 $r^2=0.38$ (p = 0.26), $r^2=0.76$ (p = 0.05), $r^2=0.90$ (p = 0.01)을 나타내었다. 본 시험의 결과, EPC 세포를 이용한 NRU 시험은 O. latipes와C. carpio에 대한 어류 독성시험 결과와 상관성이 높으므로 향후 더 많은 약제시험을 통해 어류 급성독성시험의 대체시험법으로서의 가능성이 기대된다.

• 한국어병학회지
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• 제11권2호
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• pp.129-136
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• 1998

1997년 3월 전라남도 및 경상남도의 해산어 육상 및 가두리 양식장에서 양성 중이던 넙치가 HRV(hirame rhabdovirus, Rhabdovirus olivaceus) 감염증과 유사한 증상을 나타내어 그 원인을 조사한 결과 새로운 rhabdovirus가 분리 되었다. 분리 바이러스(DF-9708)는 RTG-2 및 EPC 세포주에서 $15^{\circ}C$로 배양하였을 때 랩도바이러스 특유의 세포변성효과(CPE)를 나타내었으나 CHSE-214에서는 증식되지 않았다. 투과전자현미경으로 감염 세포내의 바이러스 입자 형태를 관찰해본 결과 bullet-shape의 크기 $70nm{\times}100\sim150nm$으로 인벨롭을 가진 바이러스였다. 분리바이러스는 pH 3 및 diethyl ether의 처리 조건에서는 감염성을 상실하였고, 열($50^{\circ}C$ 5 min, $60^{\circ}C$ 1 min)에도 약한 성상을 나타내었다. DNA 저해제인 IUdR $10^{-4}$M 처리에 의해서는 바이러스 감염가에 영향을 받지 않았다. 분리 바이러스는 Anti-HRV(8401-H) rabbit serum에 의해서만 중화 되었고, 전염성 조혈기 괴사증 바이러스(IHNV), 연어과 레오바이러스(CSV), 바이러스성 선회병 바이러스(RVS) 및 전염성 췌장괴사증 바이러스(IPNV) 등의 국내에서 분리되어지는 바이러스 항체로는 중화되지 않았다. 초원심법으로 정제한 분리 바이러스를 전기영동 한 결과 polymerase(L), glycoprotein(G), nucleoprotein(N) 및 2개의 matrix proteins(M1 및 M2)으로 구성되어져 있었으며, 각 단백질의 분자량은 L, 160 kDa; G, 55 kDa; N, 45 kDa; M1, 26 kDa; M2, 22 kDa의 크기로 계산되었다. 새롭게 분리된 바이러스는 외부증상으로는 기존의 HRV 감염과 유사한 점을 나타내었으나 그 바이러스학적 특성에 있어 약간의 차이점이 있어 본 분리바이러스를 우선 Nubchi rhabdovirus(NRV)(HRV-like)로 부르기로 한다.

• 한국어병학회지
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• 제12권1호
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• pp.56-62
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• 1999

1998년 12월에서 1999년 3월에 걸쳐 바이러스의 감염에 의한 넙치 치어의 대량 폐사가 일어났다. 감염어 샘플을 CHSE-214에 접종한 3일 후부터 세포의 구형화, 용해를 특징으로 하는 CPE가 나타났으며, 전자현미경 관찰에서는 크기가 52-56 nm의 구형의 바이러스입자가 세포질 내에서 관찰되었다. RT-PCR에 의한 버나바이러스 특이적 검출의 결과 양성이었다. 어류주화세포를 이용한 바이러스 배양 특성을 확인한 결과 분리바이러스는 MBV와 유사한 세포선택성을 나타내었으나 IPNV와는 세포내 배양특성이 다르게 나타났다. 바이러스 중화 시험에서 항MBV Y-6혈청과 완전히 중화되었으나, IPNV Ab, Sp, VR-299치 항혈청과는 중화 항체가가 낮게 나타나났다. 본 바이러스는 한국의 넙치에서 분리된 IPNV와 다른 새로운 버나바이러스로서 marine birnavirus(MBV)에 속한다.

• 폴리머
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• 제33권6호
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• pp.602-607
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• 2009

심혈관용 소재로서 혈관내피전구세포의 포획을 통해 in vivo 내피세포화가 가능한 표면을 가진 폴리우레탄 표면을 개발하였다. 혈관내피전구세포의 점착을 유도하는 CD34 단일클론항체(monoclonal antibody, mAb)를 표면에 도입하기 위해, poly (poly (ethylene glycol) acrylate-co-butyl methacrylate), poly (PEGA-co-BMA) 공중합체가 합성되었고, 이를 폴리우레탄 표면에 코팅하여 CD34 단일클론항체를 화학적으로 고정화하였다. 중합된 공중합체의 $^1H$-NMR 분석은 원하는 조성을 가진 poly(PEGA-co-BMA)의 합성이 가능함을 확인해 주었다. 이전 연구에서 개발된 PEG가 그래프트된 폴리우레탄과의 비교를 통해, 본 연구에서 제조된 poly(PEGA-co-BMA)가 코팅된 폴리우레탄 표면이 CD34 mAb의 고정화에 더 효과적인 것으로 나타났으며, 이는 CD34 mAb의 표면밀도와 활성도가 32배 이상 증가된 결과를 통해 증명되었다. 개질된 폴리우레탄 표면의 물리화학적 특성은 XPS와 물 접촉각, AFM에 의해 분석되었으며, 각각의 개질된 표면에 따른 표면의 특이적 성질을 잘 보여주었다. 본 연구에서 얻어진 결과들은 poly(PEGA-co-BMA)의 코팅을 통해 제조된 표면이 CD34 mAb의 고정화에 효과적임을 설명하였으며, 실제로 심혈관용 소재의 개발에 적용 가능성이 크다는 것을 증명해 주었다.

• 한국어병학회지
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• 제15권1호
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• pp.9-16
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• 2002

The objective of the study was to clarify the mechanism of persistent infection of marine birnavirus (MABV) in various nonpermissive cell lines. It was observed in CHSE-214, RTG-2 and RSBK-2 that the virus produced at high yield with typical cytopathic effect (CPE). On the contrary, the CPE was not produced in EPC, FHM and BF-2 cells. However amount of virus protein in both permissive and nonpermissive cell lines detected by ELISA was almost the same. Electron microscopy showed virions in permissive cells but not in nonpermissive cells. From the results, it is clear that virus protein and RNA were produced in nonpermissive cells as observed in permissive cells; however, assembly of the virus particles did not occur in nonpermissive cells.

• Molecules and Cells
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• 제41권6호
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• pp.582-590
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• 2018

Endothelial progenitor cells (EPCs) and outgrowth endothelial cells (OECs) play a pivotal role in vascular regeneration in ischemic tissues; however, their therapeutic application in clinical settings is limited due to the low quality and quantity of patient-derived circulating EPCs. To solve this problem, we evaluated whether three priming small molecules (tauroursodeoxycholic acid, fucoidan, and oleuropein) could enhance the angiogenic potential of EPCs. Such enhancement would promote the cellular bioactivities and help to develop functionally improved EPC therapeutics for ischemic diseases by accelerating the priming effect of the defined physiological molecules. We found that preconditioning of each of the three small molecules significantly induced the differentiation potential of $CD34^+$ stem cells into EPC lineage cells. Notably, long-term priming of OECs with the three chemical cocktail (OEC-3C) increased the proliferation potential of EPCs via ERK activation. The migration, invasion, and tube-forming capacities were also significantly enhanced in OEC-3Cs compared with unprimed OECs. Further, the cell survival ratio was dramatically increased in OEC-3Cs against $H_2O_2$-induced oxidative stress via the augmented expression of Bcl-2, a pro-survival protein. In conclusion, we identified three small molecules for enhancing the bioactivities of ex vivo-expanded OECs for vascular repair. Long-term 3C priming might be a promising methodology for EPC-based therapy against ischemic diseases.

• 한국어병학회지
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• 제11권2호
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• pp.97-104
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• 1998

1989년부터 남해안 일원 해상 가두리 양식장에서 사육중이던 능성어가 고수온기에 대량폐사하여 폐사율이 80%이었다. 발병한 병어는 채색흑화, 안구돌출, 평행감각 상실,회전운동과 몸통이 휘어지는 증상을 나타냈고, 조직학적으로는 뇌조직 및 안구망막의 신경세포가 공포 또는 괴사되었다. 병어로 부터 어류주화세포를 이용한 세포배양법으로 원인 바이러스는 분리되지 않았지만, 뇌 신경세포의 세포질에서 크기가 약 30 nm이며 외막(envelop)이 없는 다면체 모양의 바이러스 입자가 전가현미경적으로 관찰 되었다. 능성어로 부터 분리된 바이러스는 에테르나 열($50^{\circ}C$, 30분)처리에 의해 병원성이 실활되지 않았으나, 강산(pH 3)이나 강알카리(pH 11)에는 부분적으로 병원성이 실활되었다. 그리고 fish nodavirus인 Striped Jack Nervous Necrosis Virus(SJNNV)의 primer를 이용하여 인위감염 및 자연감염된 능성어를 대상으로 PCR을 한 결과 감염된 능성어의 뇌 및 안구조직에서 악 430 bp정도의 PCR 증폭산물이 검출되므로서 능성어를 폐사시키는 원인 바이러스는 SJNNV와 아주 유사한 nodavirus 였다.

• Molecules and Cells
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• 제37권6호
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• pp.487-496
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• 2014

Angiotensinogen (AGT), the precursor of angiotensin I, is known to be involved in tumor angiogenesis and associated with the pathogenesis of coronary atherosclerosis. This study was undertaken to determine the role played by AGT in endothelial progenitor cells (EPCs) in tumor progression and metastasis. It was found that the number of EPC colonies formed by AGT heterozygous knockout ($AGT^{+/-}$) cells was less than that formed by wild-type (WT) cells, and that the migration and tube formation abilities of $AGT^{+/-}$ EPCs were significantly lower than those of WT EPCs. In addition, the gene expressions of vascular endothelial growth factor (VEGF), Flk1, angiopoietin (Ang)-1, Ang-2, Tie-2, stromal derived factor (SDF)-1, C-X-C chemokine receptor type 4 (CXCR4), and of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) were suppressed in $AGT^{+/-}$ EPCs. Furthermore, the expressions of hypoxia-inducible factor (HIF)-$1{\alpha}$and $-2{\alpha}$ were downregulated in $AGT^{+/-}$ early EPCs under hypoxic conditions, suggesting a blunting of response to hypoxia. Moreover, the activation of Akt/eNOS signaling pathways induced by VEGF, epithelial growth factor (EGF), or SDF-$1{\alpha}$ were suppressed in $AGT^{+/-}$ EPCs. In $AGT^{+/-}$ mice, the incorporation of EPCs into the tumor vasculature was significantly reduced, and lung tumor growth and melanoma metastasis were attenuated. In conclusion, AGT is required for hypoxia-induced vasculogenesis.