Glycosyl hydrolase family 26에 속하는 Bacillus subtilis WL-7 mannanase를 코드하는 유전자를 대장균에서 과잉 발현하였다. 아미노 말단의 signal peptide를 포함하거나 포함하지 않은 mannanase 유전자를 각각 pET24a(+)에 도입하여 재조합 플라스미드 pETMAN과 pENS7를 제조하였다. 이들 플라스미드를 함유하는 Escherichia coli BL21(DE3)에서 mannanase를 발현시킨 결과 signal peptide가 제거된 mannanase유전자의 발현량이 매우 높았다. 그러나 배양온도 $37^{\circ}C$에서 pENS7를 함유한 재조합 대장균에서 과잉 발현된 mannanase는 대부분이 불활성 형태로 존재하였으며, 배양온도를 $31^{\circ}C$이하로 하였을 때 수용화 형태의 효소량이 증가하면서 효소활성이 높아졌다. IPTG에 의해 발현된 재조합 대장균의 균체파쇄 상등액 중에 존재하는 mannanase 활성은 배양온도 $25^{\circ}C$~28$^{\circ}C$에서 가장 높았으며, 전체 단백질량을 기준으로 볼 때는 배양온도 $31^{\circ}C$에서 비활성이 가장 높은 것으로 확인되었다.
A model system for the immnunochemical detection of Escherichia coli O157:H7 using a combined immunomagnetic separation (IMS) and test-strip liposome immunoassay (LIA) procedure was developed. Immunomagnetic beads coated with anti-E. coli O157 IgG antibodies were used to separate the E. coli O157 (including the H7 serotype) from culture. Immunoliposomes, whose surface was conjugated to goat anti-E. coli O157:H7 IgG and which encapsulated the marker dye, sulforhodamine B, were used as a detection label. The test strip, onto which antibodies to goat IgG were immobilized, was the immunosensor capturing immunoliposomes that did not bind to E. coli O157:H7 on the immunomagnetic bead-E. coli O157:H7 complexes. In experiments, pure cell culture suspensions of $10^5 E.$ coli O157:H7 organisms per ml produced a measurable signal inhibition, whereas a weak yet detectable signal inhibition occurred with $10^3CFU/ml$. The inhibition signals increased, when the incubation time for IMS was extended to 90 min and higher IgG-tag density (0.4mol%) was used on the liposomes. With 0.2 and 0.4mol% IgG-tagged liposomes, the IMS-LIA procedure showed more improved signal inhibitions than those of a direct (no IMS) LIA. The combined assay, which measures the instantaneous signal from immunoliposomes, can be completed within 90 min, making it significantly faster than conventional plating methods and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Accordingly, it is quite feasible to use the combined immunoassay format of IMS and dye-loaded immunoliposomes for the detection of E. coli O157:H7.
Monascus anka Y7이 생성하는 황색소의 항균활성 특성을 규명하였다. Y7의 조황색소는 그람 양성균보다 그람 음성균에 대한 항균 활성이 더 크게 나타났으며 Candida 등과 같은 효모에 대해서도 항균활성을 나타냈다. 특히 황색소의 항균성분 중 TLC로 분리한 E2 분획은 E. coli에 대한 항균활성이 크며 373 nm에서 주된 흡광 특성을 보이고 있고 흡수 파장 범위가 장파장 부위로 넓어져 있어 외관상 진한 밝은 황색을 나타내는 형광색소이다. Y7의 조색소 및 각 TLC 분획의 HPLC분석 결과 citrinin이 검출되지 않았다. 이는 Y7의 항균 특성이 최근 Monascus 색소에서 안전성의 논란이 되고 있는 citrinin과는 무관한 것을 의미한다. 한편 E2 분획을 주로하는 조황색소는 식품에 일반적으로 사용되고 있는 천연황색소인 치자황색소, 아나토색소, 홍화색소보다 황색도(b/a)가 매우 높고 이들 색소와 유사한 색조를 나타내므로 항균성을 보유한 대체 황색소로서의 가치가 높을 것으로 사료된다.
The present study was carried out to investigate the biochemical characteristics, antibiotic susceptibility and toxin(ST, LT, VT1.2 type) production test of 60 Escherichia coli isolated from diseased domestic animals in southern area of Kyungbuk province from April to December 1997. 1. The biochemical and cultural reaction were consistent with the classification criteria of Edwards and Ewing. 2. In antibiotic susceptibility test, 60 E coli showed highly susceptible to CL(96.7%), XNL(86.7%), AN(81.7%), SXT(61.7%), Lin(55%), GM(53.3%), KM(41.7%), N(41.7%), ENR(40%), AM(40%), CF(30%), 5(13.3%) and Te(11.7%), in order. 3. Sixty E coli isolates were multiful resistant to seven or more antibiotics incombination. 4. Three strains for 60 E coli were detected heat-labile enterotoxin(LT) and that's titers were 2, 8 and 16, respectively.
Characteristics, pathogenicity and control of the causative organisms isolated front diseased cultured flounder, Paralichthys olivaceus were studied. The causative organisms were identified as E tarda by biochemical and biophysical characteristics. Also, it strains were named as E tarda KBF-1 and E tarda KMF-1, and optimal pH of E tarda KBF-1 and E tarda KMF-1 were 8.0, and optimal concentration of NaCl. E tarda KBF-1 was 0% and E tarda KMF-1 was 1%. In the pathogenicity test, 0~10 of the flounders of artificially infected group(E tarda KBF-1) with $1.0{\times}10^7$ cfu/fish were died within 60 hrs, but 0~9 flounders infected group with 41.0{\times}10^6$ cfu/fish were died within 60 hrs. Also, 0~10 flounders infected group(E tarda KMF-1) with $1.0{\times}10^7$ cfu/fish were died within 36 hrs, while 0~7 flounders infected with $1.0{\times}10^6$ cfu/fish were died within 60 hrs. Drug sensitivity of E tarda KBF-1 strain was resistant to AM, CF and N, and intermediate to E, K and S, and sensitivity to C, G, SxT and FF. But E tarda KMF-1 strain was resistant to CF, E and V, and intermediate to AM, C, N and SxT, and sensitivity to GM and FF.
포도가공 시 발생되는 부산물인 포도씨로부터 유용성분인 vitamin E 및 tocotrienol을 초임계 유체추출방법으로 최적화 하였다. 추출 온도(30-$50^{\circ}C$, $X_1$), 추출압력(17-25MPa, $X_2$) 및 추출시간(1-5 hr, $X_3$)을 변수로 반응표면 분석법으로 vitamin E 및 tocotrienol 함량을 측정하였다. 초임계 이산화탄소상에서 vitamin E 및 tocotrienol 함량은 추출온도, 압력 및 시간이 증가함에 따라 증가하였다 (plt;0.001). 각각의 추출조건 가운데 $40^{\circ}C$, 20 MPa 및 5 hr에서 vitamin E는 8.65 mg/100 g 그리고 tocotrienol은 7.88 mg/100 g으로 가장 높은 함량을 나타내었다. 반응표면분석에 의한 최적추출조건은 $40^{\circ}C$, 20.7MPa 및 3.8 hr으로 나타났으며, 이 때의 vitamin E 및 tocotrienol 함량은 각각 8.20 mg/100 g 및 7.42 mg/100 g으로 나타났다. Vitamin E 및 tocotrienol 함량에 대한 실측값은 통계적 예측값의 각각 99.27-106.10% 및 96.09-106.60%로 나타나 추출조건의 유효성이 인정되었다. 또한 유기용매 추출시 vitamin E 및 tocotrienol 함량은 각각 8.18 mg/100 g 및 7.24 mg/100 g이었다. 따라서 용매추출법과 초임계 이산화탄소 추출법을 비교했을 때 초임계 이산화탄소 추출법을 이용하는 것이 더 효과적으로 vitamin E 및 tocotrienol을 추출할 수 있을 것으로 판단되었다.
Imaging ellipsometry (IE) for detection of binding of Escherichia coli O157:H7 (E. coli O157:H7) to an immunosensor is reported. A protein G layer, chemically bound to a self-assembled layer of 11-mercaptoundecanoic acid (11-MUA), was adopted for immobilization of monoclonal antibody against E. coli O157:H7 (Mab). The immobilization of antibody was investigated using surface plasmon resonance. To fabricate antibody spots on a gold surface, protein G solution was spotted onto the gold surface modified with an 11-MUA layer, followed by immobilizing Mab on the protein G spot. Ellipsometric images of the protein G spot, the Mab spot, and Mab spots with binding of E. coli O157:H7 in various concentrations were acquired using the IE system. The change of mean optical intensity of the Mab spots in the ellipsometric images indicated that the lowest detection limit was $10^3$CFU/ml for E. coli O157:H7. Thus, IE can be applied to an immunosensor for detection of E. coli O157:H7 as a detection method with the advantages of allowing label-free detection, high sensitivity, and operational simplicity.
Effects of benzoate (0~0.6 g/$\ell$ ) and sorbate (0~2.0 g/$\ell$) on the growth of Escherichia coli O157:H7 in tryptic soy broth at various pH levels (4~8) and temperatures (4$^{\circ}C$, 37$^{\circ}C$) were investigated. Benzoate and sorbate were inhibited the growth of E. coli O157:H7 up to 12 hours cultivation at 4$^{\circ}C$, and 2.0 g/$\ell$ sorbate was only inhibited during 48 hours cultivation at 37$^{\circ}C$. Among the pH levels tested, pH 4 showed significant inhibitory effect against the E. coli O157:H7 on 4$^{\circ}C$ and at 37$^{\circ}C$, respectively. When used in combination 0.2 g/$\ell$ benzoate and sorbate were completely inhibited the growth of E. coli O157:H7 on pH 4 and at 37$^{\circ}C$. While on pH 5 at 4$^{\circ}C$, all of the concentration tested did not exert any inhibitory effect. The combined effects were retarded more than single treatment of E. coli O157:H7.
현재 우리나라에서 자생하거나 식재하고 있는 오갈피나무속 식물의 7종에 대한 개화와 결실의 특성을 연구하여 재배체계 확립과 육종에 관한 기초자료를 얻고자 삽목재배 7년생을 대상으로 연구를 수행하였다. 개화시는 당오갈피가 5월 9일로 가장 빠르고 개오갈피가 8월 23일로 가장 늦었으며, 개화기간은 당오갈피가 12일로 제일 짧고 오갈피가 42일로 제일 길었다. 주당소화수는 오갈피와 지리오갈피가 각각 4677.7, 4634.0으로 높았고 개오갈피와 당오갈피가 저조했다. 화방당착과수는 오갈피가 가장 많았고 착과율은 당오갈피가 95%로 제일 수치가 높았다. 결실율은 오갈피, 지리오갈피, 섬오갈피, 개오갈피 및 서울오갈피가 ${92{\sim}95%}$로 높은 반면, 가시오갈피와 당오갈피는 ${11{\sim}37%}$로 낮았다. 100립당 건과중은 오갈피가 6.7g으로 가장 무거웠고 섬오갈피가 3.2g으로 가장 가벼웠으며 주당건과중은 오갈피와 지리 오갈피 에서 높은 수량을 보였고 가시오갈피, 개오갈피 및 당오갈피는 저조하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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