rbcL 유전자 발현조절에 관한 연구의 일환으로 Cp DNA로부터 분리한 rbcL 유전자를 클로닝하였다. 옥수수의 엽록체로부터 DNA를 분리한 후 제한효소 BamHI으로 절단하여 rbcL 유전자가 포함된 BamHI 9 절편을 pUC19에 클로닝하여 재조합 플라스미드 pRLYS1을 만들었다. 쌀의 rbcL 유전자 일부를 probe로 사용하여 pRLYS1과 Southern hybridization한 결과와 제한효소 BamHI, HindIII, 그리고 PstI으로 절단된 pRLYS1 절편의 전기영동 결과로부터 재조합 플라스미드의 내부에 완전한 rbcL 유전자의 존재를 확인하였고 삽입방향을 결정하였다.
p53 유전자의 변화는 인간의 여러 암에서 가장 흔하게 발견되며 종양세포내에서는 이러한 변형된 p53 단백질의 양의 증가가 초래된다. 세포내에 축적된 p53 단백질의 발견은 인간의 암증세를 판단할 유용한 기중이 되기도 한다. 본 연구에서는 이러한 면역조직화학 검사에 쓰일 수 있는 폴리클로날 항체를 만들기 위햐여 사람의 p53 유전자를 glutathione S-transferase 와의 융합 단백질의 형태로서 대장균내에서 발현시켰다. p53 의 아미노산 1-158번을 코딩하고 있는 NeoI fragment 와 아미노산 159-393 번을 코딩하는 NocI-BamHI fragment 를 BamHI linker 를 이용하여 in frame 으로 pGEX-2T 의 BamHI 자리에 삽입하여 재조합 플라스미드 pGTNS 와 pGTNL 을 각각 만들었다. 또 PCR 에 의한 증폭에 의햐여 아미노산 38-145번을 코딩하는 유전자 부위를 증폭하였으며 BamHI 과 PvuII 로 절단하여 pGEX-2T의 BamHI 과 SmaI 자리에 삽입함으로써 pGTBP 를 제조하였다. 이들 재조합 균주들을 IPTG 로 4시간 induction 한 후 세포 추출물로부터 glutathione Sepharose bead 를 이용하여 융합단백질을 분리하였다. Bead 에 결합된 단백질은 10% SDS-polyacrylamide gel 에서 전기영동하였으며, 각각의 분자량은 54 kDa, 53 kDa 와 40 kDa 였다. 이러한 방법으로 1리터 배양으로부터 약 1mg 의 단백질을 정제하였다.
본 논문에서는 복합 이벤트 처리를 적용하여 비즈니스 활동 분석(BAM)을 위한 이벤트 분석 방안을 제안한다. 이는 프로세스 관리자가 프로세스가 종료되기 이전에 발생 가능한 위험을 감지하고 모니터링하기 위하여 실시간에 진행되는 이벤트에 대하여 조기 경보를 제공하기 위하여 개발되었다. 본 연구에서는 의미 있는 위험을 가지는 이벤트를 추출하는, 프로세스 기반의 이벤트 모니터링 과정을 제시하였다. 복합 이벤트 패턴은 과거 누적된 이벤트 로그를 바탕으로 정의되며, 이벤트의 위험도는 그 패턴들에 기반하여 평가된다. 제안된 방법론은 홈쇼핑업체의 서비스 프로세스의 예를 이용하여 설명한다.
Aspergillus nidulans의 tRNA 유전자의 구성과 발현기착을 연구하기 위하여 우선 Aspergillus의 총 tRNA 유전자를 cloning 하였다. Aspergillus의 핵 DNA롱 포자로 부터 분리해 내고 본질 형성에서 분리한 BamHI과 T4 DNA ligase를 사용하여 pBR322플라스미드에 재조합시켜서 cloning하였다. 15벤의 transformation을 하여 30,000개 의 transformants 얻었고, 이 중 Aspergillus DNA를 가지고 있는 colony는 5,300켜개였다. In vivo에 서 S2p로 표지 된 total tRNA를 probe로 하여 colony hybridization 실험 결과, 105개의 total tRNA유전자 clone을 얻었다. 위의 결과와 cohybridization 실험 결과를 분석해 보면, Asprgillus의 tRNA 유전자는 yeast의 그것보다는 좀 더 밀집되어 존재한다고 생각된다.
In this paper, we consider anti-periodic solutions of the following BAM neural networks with multiple delays on time scales: $$\{{x^\Delta_i(t)=-a_i(t)e_i(x_i(t))+{\sum\limits^m_{j=1}}c_{ji}(t)f_j(y_j(t-{\tau}_{ji}))+I_i(t),\atop y^\Delta_j(t)=-b_j(t)h_j(y_j(t))+{\sum\limits^n_{i=1}}d_{ij}(t)g_i(x_i(t-{\delta}_{ij}))+J_j(t),}\$$ where i = 1, 2, ..., n,j = 1, 2, ..., m. Using some analysis skills and Lyapunov method, some sufficient conditions on the existence and exponential stability of the anti-periodic solution to the above system are established.
IMO를 중심으로 2019년 시행 예정인 e-Navigation은 전 세계적으로 관련 연구가 활발히 진행 중에 있으며, 다양한 선박용 시스템이 개발되어지고 있다. 선박 INS는 대표적으로 RADAR ECDIS, BAM 등의 시스템과 더불어 e-avigation 시스템을 지원하기 위한 다양한 서비스 시스템과 통합되어 질 것이며, 이에 대한 통합 운영 및 관리의 필요성이 매우 높아지고 있다. 본 논문에서는 다양한 선박용 시스템을 보다 효율적으로 운영하고, 확장할 수 있으며, 유지 및 보수가 쉬운 Platform 기반의 선박 항해 시스템 통합 방법에 대한 연구를 소개한다.
팽나무버섯 균사체 DNA를 대장균 프라스미드인 PBR322를 이용하여 gene library를 작성 하였다. 팽나무버섯에서 ${\beta}-isopropyl$ malate dehydrogenase 유전자 클론을 얻었으며 이 클론은 대장균 Leucine 요구성 균주를 complementation 시켰다. 이 클론의 팽나무버섯 DNA 크기는 약 lKb였으며 BamH1과 Ava 1 제한효소 절단부위를 지니고 있었다.
Cloning, sequencing and expressing in E. coli of the thymidine kinase (TK) gene of Herpes simplex virus type-1 (HSV-1) strain F was investigated. The TK gene, located in the BamHI 3.74 kb DNA fragment of the plasmid pHLA-12, was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The 1,131 kb PCR product was cloned into the BamHI and EcoRI sites of pBacPAK9 plasmid and then named pBac-TK recombinant. The TK gene was subcloned into the BamHI and BglII sites of pQE-30, and named pQE-TK recombinant. The nucleotide sequence of the 1,131 kb TK gene was determined, and the GC content was 65.13%. There were deduced 367 amino acid residues with a total molecular weight of 43 kDa. The weight was confirmed by the protein produced by E. coli M15/pQE-TK on the SDS-PAGE and Western blot. The production of the TK protein in the IPTG induced cells was measured over 4 h. At the end of 1, 2 and 3 h the level increased by 146, 204 and 242%, respectively. The amount of the protein at the highest fraction purified with Ni-NTA resin chromatography was $0.68\;{\mu}g$ per ml. The soluble state TK protein was present in the cytoplasm. In these results the F strain was different in base sequence and amino acid sequence from that of the CL101 strain, which caused difference in their strains.
Presence of antibody to the capsid protein p24 is the main diagnostic criterion, since this reflects reliable antibody response to HIV infection. However, it takes about 6-8 weeks for antibody production after infection and people who are infected but antibodies are not produced yet are classified as seronegative. Therefore, there is a strong need for an improved diagnostic method for better health security. As a first step for developing such an improved diagnostic system, gag protein of human immunodificiency virus type 1 was expressed in E. coli DH5$\alpha$. The gag fragment of HIV-1 (including a portion of p17 and whole p24) was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and BamH I/EcoR I sites were created during PCR. The amplified DNA fragment was cleaved with BamH I/EcoR I and was subcloned into the GEX-2T vector which had been digested with BamHI/EcoRI, resulting gene fusion with gst gene of pGEX-2T. The recombinant DNA was transferred into E. coli DH5$\alpha$. The transformed bacteria were grown at 37$^{\circ}C$ for 3h and protein expression was induced with 0.1mM IPTG at $25^{\circ}C$ for 3h. Recombinant gag protein or GST-gag fusion protein was purified with glutathione-sepharose 4B bead and migrated as a single band when analyzed by 10% polyacrylamide gel. These proteins were confirmed by immunoblotting with anti-GST goat sera or Korean AIDS patients sera. The results of this study establish the expression and single step pulification of HIV-1 gag protein which can specifically bind with Korean AIDS patients sera.
Kim, Young-Hun;Jang, Ji-Yeon;Yeehn Yeeh;Kim, Yong-Ho;Kim, Sang-Hae
Journal of Microbiology
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제33권4호
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pp.344-349
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1995
The alkalophilic bacterium, Xanthomonas sp. JK311, producing extracellular proteases, was isolated from soil. Xanthomonas sp. JK311 produced five extracellular proteases that are all metalloproteases. Four of them were resistant against 1% SDS. Chromosomal DNA of the Xanthomonas sp. JK311 was digested with BamHI and cloned into PUC19. Among E. coli strain HB101 transformants, a clone secreting the proteases was screened through halo formation on skim-milk agar plate and by Southern blot analysis. It had the recombinant plasmid pXEP-1 containing the 7.5 kb-BamHI DNA fragment and produced three extacellular proteases. Their protease properties corresponded to those of Xanthomonas sp. JK311.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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