Five phenylpropanoids (1-5), a benzofuran neolignan (6), two 8-O-4'-neolignans (7-8), and five tetrahydrofuran lignans (9-13) were isolated from a methanol extract of Myristica fragrans seeds. The structures of 1-13 were determined by $^1H$- and $^{13}C$-NMR spectroscopic data analyses and a comparison with the literature data. Compound 3 was isolated for the first time from this plant. All the isolated compounds were evaluated for their inhibitory activity against tyrosinase. Among them, safrole (1) showed significant inhibitions against both the monophenolase ($IC_{50}=32.11{\mu}M$) and diphenolase ($IC_{50}=27.32{\mu}M$) activities of tyrosinase. The kinetic analysis shows that safrole (1) is competitive inhibitors for both monophenolase and diphenolase. The apparent inhibition constant ($K_i$) for safrole (1) binding with free enzyme was determined to be 16.05 and $13.66{\mu}M$ for monophenolase and diphenolase, respectively.
Salicylamide, a non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID), is used as an analgesic and antipyretic agent. We have previously shown that several NSAIDs have anti-melanogenic properties in B16F1 melanoma cells. In contrast, we have found that salicylamide enhances melanin contents in B16F1 melanoma cells; however, the underlying mechanism is not known. Therefore, we investigated the mechanism through which salicylamide stimulates melanogenesis. Interestingly, salicylamide enhanced diphenolase activity in a cell-free assay. Western blotting and real-time RT-PCR revealed that salicylamide increased tyrosinase expression via transcriptional activation of the Mitf gene. Together, our results indicate that salicylamide could be used as an anti-hypopigmentation agent for skin and/or hair.
본 연구에서는, 저온 및 약산성 조건에서 높은 활성을 보이는 티로시나아제인 tyrosinase-CNK의 반응 안정성을 조사하였다. Tyrosinase-CNK는 지금까지 알려진 중온성(mesophilic) 및 호열성(thermophilic) 환경 유래의 티로시나아제 보다는 열 안정성이 낮았으나 0 ℃에서 효소 안정성이 매우 뛰어났고, 반복적인 동결-해동(freeze-thaw) 과정에서도 효소 활성을 안정적으로 유지하였다. 또한, 물과 ethanol 및 acetonitrile이 혼합된 유기용매 환경에서 초기 상대 활성 값의 변화가 관찰되었으나 유기용매 농도의 증가로 인한 추가적인 활성 저하를 유발하지 않고 활성을 일정하게 유지하였다. 한편, 효소 반응의 염(salt)에 대한 저해는 chaotropic 특성이 많이 나타나는 염일수록 적게 나타났다. 결과적으로, tyrosinase-CNK는 통상의 티로시나아제를 이용하여 반응을 수행하기 어려운 환경에서도 원하지 않는 반응을 억제하고 효소 불활성화를 최소화면서 반응을 촉매할 것으로 기대된다.
Tyrosinases catalyze the hydroxylation of monophenolic compounds and the conversion of o-diphenols to oquinones. The enzymes are mainly involved in the modification of tyrosine into L-3,4-dihydroxyphenyl-alanine (L-DOPA) and DOPA/DOPAquinone-drived intermolecular cross-linking, which play the key roles of pigmentation to the cells. It is ubiquitously distributed in microorganisms, plants, and animals all around the nature world. They are classified as copper- containing dioxygen activating enzymes; two copper ions are coordinated with six histidine residues in their active sites and they are distinguished as met-, deoxy-, and oxy-form depending on their oxidative states. Natural extraction and recombinant protein approaches have been tried to obtain practical amounts of the enzymes for industrial application. Tyrosinases have been widely applied to industrial and biomedical usages such as detoxification of waste water containing phenolic compounds, L-DOPA as a drug of Parkinson's disease, biomaterials preparation based on the cross-linking ability and biosensors for the detection of phenolic compounds. Therefore, this review reports the mechanism of tyrosinase, biochemical and structural features and potential applications in industrial field.
Kim, Chowon;Park, Jumin;Lee, Hyeyoung;Hwang, Dae-Youn;Park, So Hae;Lee, Heeseob
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제32권5호
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pp.594-601
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2022
This study evaluated the biological properties of lemongrass (Cymbopogon citratus) extracts. The EtOAc extract of lemongrass had DPPH, TEAC, and nitric oxide-scavenging activity assay results of 58.06, 44.14, and 41.08% at the concentration of 50, 10, and 50 ㎍/ml, respectively. The EtOAc extract had higher elastase and collagenase inhibitory activities than the 80% MeOH, n-hexane, BuOH, and water extracts and comparable whitening activity toward monophenolase or diphenolase. Also, the EtOAc fraction had higher lipase inhibitory and antimicrobial activities against Cutibacterium acnes among extracts which is known to an important contributor to the progression of inflammatory acne vulgaris, and an opportunistic pathogen present in human skin. Total phenolic and flavonoid concentrations in the EtOAc extract were 132.31 mg CAE/g extract and 104.50 mg NE/g extract, respectively. Biologically active compounds in lemongrass extracts were analyzed by LC-MS. This study confirms that lemongrass extracts have potential use as cosmetic skincare ingredients. Thus, lemongrass can be considered a promising natural source of readily available, low-cost extracts rich in antioxidant, skincare, and antimicrobial compounds that might be suitable for replacing synthetic compounds in the cosmeceutical industry.
The purpose of this study was to investigate the antioxidant activity and tyrosinase inhibitory activity of Codonopsis lanceolata 50% ethanol extract, and its solvent fractions (n-hexane, ethyl acetate (EA), n-butanol, water). The main components of the EA fraction were qualitatively analyzed using UPLC Q-ToF/MS. Additionally, a quantitative analysis was performed using UPLC. As a result, the total polyphenol content was 113.36 mg gallic acid/g in the EA fraction, which contained the largest amount of the C. lancolata solvent fractions. Also EA showed the highest antioxidant activity than other fractions. The IC50 of DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) radical scavenging activity was 0.03 mg/mL and the IC50 of ABTS [2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate)] radical scavenging activity was 0.049 mg/mL. The EA fraction showed tyrosinase inhibitory activity than other fractions and especially inhibited monophenolase oxidase reaction higher than diphenolase oxidase reaction. The monophenolase oxidase inhibited 55% when the concentration of the EA fraction was 0.25 mg/mL. As a result of Q-ToF/MS analysis, it was confirmed that tangshenoside I and lobetyolin were the main components of EA fraction. Thus, these results suggest that C. lanceolata may be used as a potent source of cosmetic agents.
갈변반응에 관여하는 polyphenol oxidase(PPO : EC 1.10.3.1)를 한국산 고구마(Ipomoea batatas, val : Hong-mi)로부터 추출하여 ammoniun sulfate 분획 및 DEAE-cellulose column chromatography법에 의하여 정제한 결과, 효소활동도는 23.1배였으며 enzyme activity 수율은 41.5%이었다. 이 효소는 일반 전기 영동법에 의하여 8개의 isozymes 으로, 또한 isolectric focusing에 의하여 pI가 각각 다른 12개의 isozymes으로 분리되었고 그 pI의 범위는 3.2-9.6이었으며, Isoelectric focusing에 의하여 분리된 각 isozyme의 specific activity는 6,000-46,700U/mg protein의 범위에 있었다. 고구마 중의 PPO는 $65^{\circ}C$이하에서는 안정하였으며 $65^{\circ}C$ 에서는 1분 가열에 의하여 약 50%의 효소활성이 상실되었고, pH optimum은 6.0-6.5이었다. o-diphenol이 이 효소의 가장 좋은 기질로서, 이 효소는 o-diphenolase임이 확인되었고, catechol에 대한 Km치는 6.7mM로 나타났다. 또한 이 효소에 대한 저해작용은 dithiothreitol, cysteine 및 ascorbic acid 순으로 크게 나타났다.
녹엽단백질 조제 원료 목초중 diphenol 및 polyphenolase의 측정결과 alfalfa에는 존재 하지 않고, Italian ryegrass, red clover, sorghum 에는 존재가 확인 되었다. 이러한 목초로부터 단백질 추출은 용매를 물만으로 한것과 물에 환원제를 첨가한 것을 사용하여 갈변단백질과 갈변방지단백질을 조제하여Wistar계 숫컷 흰쥐에 14일간 급여하여 체중증가량, 소화율, PER에 대하여 조사하였다. 그 결과 alfalfa 녹엽단백질의 경우 갈변단백질과 갈변방지단백질 간에 증체량, 소화율, PER은 차가 인정되지 않았다. Italian ryegrass 녹엽단백질의 경우 갈변단백질과 갈변방지단백질의 경우 소화율에서 유의차가 인정 되었다. 그러나, 체중증가량, PER은 차가 인정되지 않았다. red clover 녹엽단백질의 경우 갈변단백질이 소화율, 증체량, PER은 갈변단백질 보다 유의하게 저하 하였다. 이러한 것은 녹엽단백질의 영양가가 갈변반응에 의해 손상 되어 지고 원료 목초중의 diphenolase 활성이 높을수록 갈변반응에 의해 영양가의 저하가 현저하였다. 녹엽단백질의 아미노산 조성은 갈변에 의해 거의 손상 되지 않았지만, red clover 녹엽단백질의 경우 lysine, histidine 이 조금 감소 하였다. 녹엽단백질의 아미노산 손실은 갈변에 의한 것이 아닌 것으로 생각되어지고 유효성 아미노산에 대하여 금후 검토를 요하는 과제이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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