We tested the in vivo ability of a DNA chip to detect virus-specific genes from virus-infected olive flounder Paralichthys olivaceus and rainbow trout Oncorhynchus mykiss. Target cDNA was obtained from total RNA of virus infected cell lines by reverse transcription (RT) and was labeled with fluorescent dye (Cy5-dUTP). The results show the successful detection of infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) and viral hemorrhagic septicaemia virus (VHSV) genes in the virus-infected fishes.
This research aims to develop a multiple channel electrochemical DNA chip using micro-fabrication technology. At first, we fabricated a high integrated type DNA chip array by lithography technology. Several probe DNAs consisting of thiol group at their 5-end were immobilized on the sold electrodes. Then target DNAs were hybridized by an electrical force. Redox peak of cyclic-voltammogram showed a difference between target DNA and mismatched DNA in the anodic peak current. Therefore, it is able to detect a various genes electrochemically after immobilization of a various probe DNA and hybridization of label-free DNA on the electrodes simultaneously. It suggested that this DNA chip could recognize the sequence specific genes.
The genome sequencing project has generated and will contitute to generate enormous amounts of sequence data. Since the first complete genome sequence of bacterium Haemophilus in fluenzae was published in 1995, the complete genome sequences of 2 eukaryotic and about 22 prokaryotic organisms have detemined. Given this everincreasing amounts of sequence information, new strategies are necessary to efficiently pursue the phase of the geome project- the elucidation of gene expression patterns and gene product function on a whole genome scale. In order to assign functional information to the genome sequence, DNA chip technology was developed to efficienfly identify the differential expression pattern of indepondent biogical samples. DNA chip provides a new tool for genome expreesion analysis that may revolutionize revolutionize many aspects of human kife including mew surg discovery and human disease diagnostics.
We have used the secondary-step immobilization methods based on the chip pattern of hydrophobic self-assembly layers to assemble microfabricated particles onto the chip pattern. Immobilization of DNA, fabrication of the particles and the chip pattern, arrangement of the particles on the chip pattern, and recognition of each using DNA fluorescence measurement were carried out. Establishing the walls, the arrangement stability of the particles was improved. Each DNA is able to distinguish by using the lithography process on the particles. Advantages of this method are process simplicity, wide applicability and stability. It is thought that this method can be applicable as a new fabrication technology to develop a minute integration type biosensor microarray.
In recent, injection molding process for features in sub-micron scale is under active development as patterning nano-scale features, which can provide the master or stamp for molding, and becomes available around the world. Injection molding has been one of the most efficient processes for mass production of the plastic product, and this process is already applied to nano-technology products successfully such as optical storage media like DVD or BD which is a large area plastic thin substrate with nano-scale features on its surface. Bio chip for like DNA sequencing may be another application of this plastic substrate. The DNA can be sequenced using order of 100 nm pore structure when making the DNA flow through the pore structure. Agarose gel and silicon based chip have been used to sequence the DNA, but injection molded plastic chip may have benefit in terms of cost. This plastic DNA sequencing chip has plenty of pillars in order of 100 nm in diameter on the substrate. When the usual features in case of DVD or BD have very low aspect ratio, even less than 0.5, but the DNA chip will have relatively high aspect ratio of about 2. It is not easy to injection mold the large area thin substrate with sub-micron features on its surface due to the characteristics of the molding process and it becomes much more difficult when the aspect ratio of the features becomes high. We investigated the effect of the molding parameters for injection molding with high aspect ratio nano-scale features and injection molded some plastic DNA sequencing chips. We also fabricated PR masters and Ni stamps of the DNA chip to be used for molding
Aromatic compounds are of major concern among environmental pollutants due to their toxicity and persistence. To monitor aromatic compounds in a real time with a better sensitivity, a new method of SPR (surface plasmon resonance) based on DNA chip (Biacore 3000) was developed here. It is thought that CapR regulatory protein as a complex with phenol, could bind to their corresponding promoter, Po. Biotinylated DNA oligomers for the promoter was synthesized by PCR and coupled onto streptoavidin-linked CM5-chip. CapR regulatory proteins were purified after cloning their genes in pET21a (+) vector and expressing proteins. The interaction was assessed by the system where the regulatory proteins flowed with or without phenol through the cells of DNA chip. CapR regulatory protein even in the presence of phenol had no response to its promoter, Po, suggesting that other factor(s) might be required for the activation of Po promoter. The present work reveals a promising possibility of the SPR-based DNA chip in monitoring specific environmental pollutants in a real time.
In this study we propose an automatic reading system for diagnostic DNA chips. We define a general specification for an automatic reading system and propose a possible implementation method. The proposed system performs the whole reading process automatically without any user intervention, covering image acquisition, image analysis, and report generation. We applied the system for the automatic report generation of a commercialized DNA chip for cervical cancer detection. The fluorescence image of the hybridization result was acquired with a $GenePix^{TM}$ scanner using its library running in HTML pages. The processing of the acquired image and the report generation were executed by a component object module programmed with Microsoft Visual C++ 6.0. To generate the report document, we made an HWP 2002 document template with marker strings that were supposed to be searched and replaced with the corresponding information such as patient information and diagnosis results. The proposed system generates the report document by reading the template and changing the marker strings with the resultant contents. The system is expected to facilitate the usage of a diagnostic DNA chip for mass screening by the automation of a conventional manual reading process, shortening its processing time, and quantifying the reading criteria.
Kim, Pil-Ho;Park, Jisoo;Kim, Yeong Shik;Suh, Youngbae
Natural Product Sciences
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제21권3호
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pp.185-191
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2015
Comparative molecular analysis has been frequently adopted for the authentication of herbal medicines as well as the identification of botanical origins. Roots and rhizomes of the family Umbelliferae have been used as traditional herbal medicines to relieve various symptoms such as inflammation, neuralgia and paralysis in countries of East Asia. Since most herbal medicines of the Umbelliferae roots or rhizomes are generally supplied in the form of dried slices, morphological examination does not often provide sufficient evidence to identify the botanical origin. Using species-specific probes developed by the comparative analysis of nrDNA ITS sequences, a DNA chip was developed to identify herbal medicines for 13 species in the Umbelliferae. The developed DNA Chip proves its potential as a rapid, sensitive and effective tool for authenticating herbal medicines in future.
DNA칩의 유전자 발현 데이터의 통합적 분석을 위하여 매트랩을 기반으로 한 통합분석 프로그램을 구축하였다. 이 프로그램은 유전자 발현 분석을 위해 일반적으로 많이 쓰는 방법인 Hierarchical clustering(HC), K-means, Self-organizing map(SOM), Principal component analysis(PCA)를 지원하며, 이외에 Fuzzy c-means방법과 최근에 발표된 Singular value decomposition(SVD) 분석 방법도 지원하고 있다. 통합분석프로그램의 성능을 알아보기 위하여 효모의 포자형성(sporulation)과 정의 유전자발현 데이터를 사용하였으며, 각 분석 방법에 따른 분석 결과를 제시하였으며, 이 프로그램이 유전자 발현데이타의 통합적인 분석을 위해 효과적으로 사용될 수 있음을 제시하였다.
본 논문은 여성 자궁경부암의 원인이 되는 인두유종 바이러스(papillomavirus)를 진단하기 위한 HPY-DNA 칩의 영상으로부터 탐촉자(probe)의 위치를 찾아내고 각 탐촉자에서의 교잡반응(hybridization) 여부를 결정하기 위한영상리 방법의 구현에 관한 것이다. HPV-DNA 칩은 22종의 HPV를 알아내기 위한 탐촉자들과 환자 샘플과 항상 반응하는 마커들로 구성되어 있다. 침 영상에서 탐촉자 들의 위치는 마커와 상대적으로 고정되어 있어서 도터(dotter)와 스캐너(scanner)의 정밀도에 따른 오차만을 갖는다. 한편 각 탐촉자는 진단신뢰도를 높이기 위하여 4번 씩 인쇄된다. 본 논문은 마커들간의 상대거리와 탐촉자의 중복 인쇄라는 사전정보를 템플릿 정합방법과 결합하여 안정적으로 마커를 찾고, 교잡반응 여부를 정확히 분류하는 방법을 제시한다. 정규화된 상관도를 정합도(matching measure)로 채택하여, 마커들의 상대적 위치에 대하여 평균을 취하면 안정적으로 마커를 찾을 수 있다는 것을 실험을 통하여 보인다. 또한 이미 계산된 정합도를 특징(feature) 값으로 사용하여 4개의 중복 탐촉자에 대한 평균 특징 값을 분류(classification)하면 탐촉자의 교잡반응 여부를 정확히 알아낼 수 있다는 실험 결과를 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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