본 연구는 참깨 종자로부터 추출, 분리된 세사몰린의 백혈병 HL-60 세포의 생장억제에 미치는 영향을 조사하였다. 세사몰린은 농도와 시간 의존적으로 HL-60 세포의 생합성을 억제하였다. $60{\sim}100\;{\mu}g/ml$ 농도의 세사몰린 범위에서 사포증식이 억제적이었다. $200\;{\mu}g/ml$ 이상의 세사몰린 농도에서 HL-60 세포에 세포파괴성으로 나타났다. 그리고 $60\;{\mu}g/ml$에서 HL-60 세포의 DNA, RNA, 단백질의 합성억제 정도는 35.1%, 6.1% 5.3%였다. 반면에 $200\;{\mu}g/ml$에서의 억제 정도는 각각 86.8%, 81.5%, 96.7%였다. DNA 합성에 대한 세사몰린의 억제효과는 비가역적이었다.
After single fraction of 2, 5, 10 Gy irradiation on submandibular gland of 40 male rats, weighing 150gm, respectively, these animal were sacrificed two hours after 0.1㎎/g bromodeoxyuridine (Sigma) peritoneal injection in 1, 3, 7, 15 hours, 1, 3, 7 days after irradiation. And excised submandibular gland were fixed in Carnoy's and Bouin's solution for 2 hours. Paraffin sections were stained with H&E, and PAS for the observation of the change of salivary gland tissue, and with Feulgen for the study of the DNA distribution, and immunohistochemically stained with anti-bromodeoxyuridine (Sanbyo Co.) for detection of DNA synthetic cells in order to study the distribution of DNA synthetic cells of salivary gland tissue and endothelium after irradiation in 5 different sites of 6 slides on X 200 high power field. The results were as followings. 1. In PAS staining 3 days after 5Gy irradiation, decreased mucine secretion of serous cells were found, and 7 days after l0Gy irradiation, decreased mucine secretion of mucous cells were found. 2. In histopathologic features, degeneration of serous cells were found in 3 days after 2 Gy irradiation and there was little change in mucous cells and excretory duct cells. 3. In Feugen staining, 3 days after 2 Gy, 5 Gy irradiation, more high percentage of DNA synthetic cells were found in intercalated duct cells, striated duct cells and excretory duct cells than in BrdU staining. 4. In immunohistochemical features, DNA synethsis of serous cells and granular convoluted tubular cells abruptly decreased in early period after irradiation and showed no recovery in 7 days after irradiation but there was an increase in DNA synthesis of intercalated duct cells, striated duct cells and excretory duct cells, which have less S-phase cells comparatively, in 7 days after 2 Gy, 5 Gy irradiation. 5. In immunohistochemical features, the DNA synthesis of endothelial cells was continuously decreased after irradiation but showed slight increase in 7 days after 2 Gy and S Gy irradiation.
Transposon Tn5의 단백질 합성을 E. coli 내에서 증폭 합성시키기 위하여 Bacteriophage의 Pt 촉진유전자가 Tn5의 두 개 module인 IS50L 과 IS50R을 전사시킬 수 있도록 plasmid를 재구성하였다. P1 촉진유전자로부터의 전사를 탈억제시켰을 경우, IS50R으로부터 합성되는 두 개의 단백질은 모두 그 세포내 축적량이 SDS-polyacrylamid gel에서 확인 될 정도로 증폭합성되었으나 IS501L의 두 개 단백질들은 동일 gel 상에서 확인되지 않았다. Minicell system에서 합성양상과 각 단백질들의 안정성을 조사한 결과, IS50R 단백질은 모두 안정하게 유지되었으나 IS501, 단백질은 모두 불안정하여 생분해 되어 진다는 사실을 밝혔다. 이러한 Is50L 단백질의 불안정성은 IS50L이 transposition에 있어서 불활성을 나타내는 원인이라 추정된다. 또한 IS50L고 IS50R의 단백질은 모두 동일한 open reading frame에 의하여 합성되어짐을 tryptic peptide 양상을 통하여 알 수 있었다.
작물의 수량과 품질은 저온 및 고온 스트레스에 영향을 받는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 배추에서의 스트레스 저항성과 연관된 분자마커를 개발하기 위하여 저온에서의 스트레스 저항성에 영향을 미치는 것으로 알려져 있는 alternative oxidase (AOX) 합성 유전자 관련 분자 마커를 개발하였다. 총 15개의 AOX 합성 유전자와 관련된 Brassica rapa ESTs를 arabidopsis AOX 합성 유전자 염기서열을 이용하여 찾을 수 있었다. 이를 이용하여 고온에서 상대적으로 약한 '지부'품종과 상대적으로 강한 '권심' 사이에서 DNA 염기서열을 조사하여 4개의 ESTs에서 insertion 또는 deletion을 찾았고 PCR로 확인 가능한 4개의 공동우성 마커를 개발하였다. 본 연구에서 개발된 분자마커는 배추 작물에서 환경스트레스 저항성과 유전적 연관성을 확인하는데 유용하게 사용될 수 있다고 기대된다.
카테콜아민 생합성에 관여하는 마지막 효소인 phenylethanolamine Nmethyltransferase는 norepinephrine 을 epinephrine으로 전환시키는 중요한 효소이다. PNMT효소의 발현은 epinephrine 신경세표의 발현에 필수적이다.따라서 PNMT 유전자를 크로닝하여 그 구조를 결정하고,유전자 발현연구를 하는 것은 상당히 중요한 일이다.그러나 최근에 저자가 bovine 및 human cDA 를 처음으로 분리하여 그 구조를 보고한 것 외에는 아직까지 인간과 백서 전체 genomic DNA 의 분리 보고는 없다.이에 저자들은 인간과 백서 PNMT유전자의 전체구조와 여러종(species)사이의 진화적인 관계를 규명하기 위해서 human 과 Rat genomic library 를 만들고,이 library 를 이용하여 bovine cDNA 를 probe로 13.1kb와 13.2kb길이의 인간과 백서의 genomic clone 을 분리 크리닝하는데 성공하여 유전자의 구조적 규명하였다.
이 연구는 약용버섯 번데기 동충하초로부터 특이적 자실체 형성 유전자를 선별하기 위하여 수행하였다. cDNA는 버섯의 분화 4단계 균사체, 원기, 미성숙 자실체, 성숙한 자실체로부터 분리한 각각의 total RNA를 이용하여 합성하였다. 특이적으로 발현된 유전자의 선별은 cDNA와 랜덤한 primer set을 이용한 DD-PCR에 의해 수행되었고, pGEM 클로닝 벡터를 이용하여 6개의 partial 유전자 서열을 확인하였다. 6개의 DD-PCR product는 보고된 유전자와 유사도를 확인하기 위해 NCBI BLAST search를 사용하여 GenBank에서 비교하였고, 6개의 유전자는 보고되지 않은 유전자임을 확인하였다.
Nocardioides sp. J-326TK의 adenosine deaminase gene을 분리하기 위하여 genomic DNA를 제한효소로 무작위적으로 절단하여 pBluscript KS에 ligation시켰다. 또한 hu-man과 mouse, E. cali 등의 adenosine deaminase gene의 보존적인 부위를 primer로 합성을 하여 PCR reaction을 행하였다. Genomic DNA를 cloning시킨 pKSN60은 5kb정도의 DNA를 포함하고 있으며 sourthern hybridization 등의 여러 확인 실험을 통하여 adenosine deaminase gene을 포함하고 있다는 알았다. PCR product를 cloning시켜 형성된 recombinant plasmid를 PCR reaction의 primer로서 pTBN20를 sequencing을 행하였다. 그 결과를 다른 ade-nosine deaminase gene의 서열과 비교를 하였는데 미생물인 E. coli와는 nucleotide sequence는 99.5%, amino acid sequence는 98.9%의 homology를 나타내고 human과는 각각 59.5%, 46.8%의 homolosy를 나타내었다.
골수에서 DNA, RNA 및 단백질에 대한 인삼의 효능을 조사하였던 바 $\alpha$-naphthyl-isothio-cyanate로 유도된 간담즙성 상해에도 좋은 효과가 있을 것으로 사료 되었다. 본 연구결과 몇가지 인삼성분이 배양한 간세포에서 DNA합성과 세포증식에 촉진효과를 나타내었다. 또한 전통적인 치료제와 관련하여 간질환에 대한 인삼의 임상적 효과에 대해서 논의하고자 한다.
마이크로 어레이 기술은 유전자 네트워크의 순서 와 게놈의 통합과 같은 많은 업적을 기여하고 있으며, 이러한 기술은 유전자 발현의 패턴을 조사하기 위한 수단 등으로 잘 확립 되어있다. DNA 마이크로배열은 Affymetric 칩을 이용하여 대량의 DNA 서열을 합성 할 수 있는데 기존의 DNA 어레이 스포팅에는 일반적으로 접촉방식과 압전전자 방법등 두가지 유형이 있다. 접촉방법은 유리 슬라이드 표면과 접촉하도록 스포팅핀을 사용하는데 이 방법은 표면 매트릭스의 손상이나 상처가 발생할 수 있어 단백질이 오염 되거나 특정 결합을 방해할 위험이 있다. 반면에 압전전자 방법은 대량 생산이 가능함에도 불구하고 결과를 인쇄할 분석기가 필요하므로 현재 실험실 내에서만 수행 가능한 실정이다. 본 논문에서 유리 슬라이드 표면에 닿지 않고 지속적으로 일관성 있게 스포팅이 가능하도록 하는 진보된 방법을 제시한다.
Bacteria have been regarded as a one of major etiologic factors in root canal infections. In endodontic treatment the effective removal of pathogenic microorganisms in the root canal is the key to successful outcome. Bacterial cell wall components may play an important role in the development of pulpal and periapical disease. The purpose of this study was to evaluate the effect of sonic extracts of Streptococcus spp. on cultured L929 cells and to characterize cell wall protein profiles of Streptococcus spp. Streptococcus spp. were isolated from infected root canals and identified with Vitek Systems(Biomeriux, USA). Five streptococci, namely S. sanguis, S. mitis, S uberis, S. mutans (ATCC 10449) and S. faecalis (ATCC 19433) weere enriched in brain heart infusion broth. Cell pellets were sonicated and cell wall extracts were dialyzed and membrane filtered. Prepared cell wall proteins were applied to cultured L929 cell. The cell reaction were evaluated by monitoring DNA synthesis, cell numbers and the change of cell morphology. The total cell wall protein profiles of microorganisms were characterized by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide-gel eledruphoresis(SDS-PAGE). DNA synthesis of L929 cells were reduced by the increasing concentration of sonic extracts. DNA synthesis was significantly suppressed in more than $50{\mu}g$/ml of sonic extract conentration in five streptococci. S. nutans (ATCC 10449) showed stronger suppression on DNA synthesis than remaining four streptococci, which had the similar effect on DNA synthesis. Analysis of DNA synthesis measured by [$^3H$]-thymidine uptake was more sensitvie method than cell counting. Sonic extracts affected the microscopic findings of L929 cells. The protein profiles indicated that all five strains shared two major proteins with molecular masses of 70.8 and 57.5 kD respectively. S. uberis and S. mutans shared common minor proteins of which molecular weights were 147.9 and 112.2 kD respectively. However some minor proteins were unique for S. mitis, S. uberis and S. faecalis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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