표고버섯(Lentinula edodes)의 생장이 매우 좋았던 일본잎갈나무재의 수용성 추출물(water-soluble fraction, WSF)을 분리하여 구성당을 분석한 결과, rhamnose 및 mannose는 거의 없고, glucose도 2.2%로 매우 낮았으며, arabinose가 18.3%, galactose가 75.3%로서 가장 많이 함유되어 있었다. 정제된 추출물의 arabinose와 galactose의 함량비는 1 : 3.4였다. 정제된 WSF를 완전메틸화·가수분해·가스크로마토그래피에 의하여 분석한 결과, β-1,3 결합한 D- galactopyranose가 주쇄를 이루며, 이에 galactose의 C6위에 측쇄로서 β-1,6 결합한 D-galactose와, β-1,6 결합한 L-arabinose가 존재하며, 전자는 2-3개의 D-galactopyranose가 결합을 하고 있고, 후자는 L-arabinofuranose가 1-2개 중간의 측쇄구조를 이루고, 말단은 L-arabinopyranose로 구성되어 있었다. PDA배지에 WSF첨가로 표고의 균사 생장이 매우 증진되었으며, 2 - 4% 첨가수준에서 균사 생장이 최대였고, 첨가량이 더 많으면 균사의 생장이 오히려 감소되었다. 톱밥배지에서도 PDA 배지에서의 결과와 마찬가지로 WSF첨가로 균사 생장이 증진되었으며, 산림 6호 및 Mok-H의 경우 모두 4% 첨가에서 균사의 생장이 최대로 나타났다. 톱밥배지에 WSF 첨가가 버섯생산량을 증가시켰는바, Mok-H의 경우 무첨가에 비해 약 1.3배, 산림 6호의 경우 1.2배 증수되었다. 버섯균 세포벽의 주성분인 ergosterol 함량변화를 측정한 결과, WSF첨가로 미첨가에 비하여 ergosterol의 함량이 증가하였으며, 균사가 콜로니를 형성하는 초기단계에서는 낮은 ergosterol함량을 나타냈으나 자실체가 형성되는 시기에 급격히 높아지는 결과를 나타냈다. 따라서 배지내의 ergosterol함량이 자실체형성의 주요 예측수단으로 이용될 수 있을 것으로 판단된다.
겨우살이가 가지고 있는 lectin의 약리작용의 가능성에 대한 연구의 일환으로, lectin을 분리 . 정제하였으며, 분자량, subunit수, 탄수화물의 조성, 단백질의 아미노산 조성, 적혈구 응집력, 탄수화물 특이성, pH 및 열 안정성등의 생화학적 특성을 연구하였다. Lectin의 분리는 0.15 M NaCl에 의한 추출, $(NH_4)_2SO_4$ 침전, sepharose 4B affinity chromatography 및 sephadex G-150 gel filtration에 의해 11.64배 정제에 0.14%의 수율을 획득하였으며, HPLC와 전기영동을 이용하여 순도를 검정하였다. Gel filtration에 의해 분석된 lectin의 분자량은 124,000 Da이였고, SDS-PAGE에 의해 분자량이 30,000과 32,000 Da인 2개의 band로 나타나서 각각 2개의 subunit를 갖는 tetramer로 확인되었다. 겨우살이 lectin의 탄수화물은 glucose, fructose, arabinose 및 xylose를 함유하고 있다. 또한 phenlylalanine, lysine, tyrosine, aspartic acid가 비교적 풍부하였고 methionine, alanine, arginine은 비교적 적었다. Lectin은 적혈구에 종 특이성을 나타내는데 겨우살이의 혈구응집반응에서는 사람혈액형간의 차이는 없었으며, 쥐에서 가장 높았고 소에서 가장 낮았으므로 동물 종간에 대한 특이성은 뚜렸하였다. Lectin은 당 특이성을 가지는데, D-galactose, D-mannose, D-lactose 및 D-raffinose에 대해 특이성을 나타내었다. 겨우살이 lectin은 pH4~7에서 안정하였으며, 5$0^{\circ}C$까지는 10~30분 열처리해도 활성이 유지되는 열 안정성 단백질이었다.
두릅나무 순의 saponin을 추출하여 그 구조를 밝혀 본 결과는 다음과 같다. 1. 자연산 날 것 식용적기의 crude saponin에서 aglycon으로 oleanolic acid와 hederagenin외에 1,3-methylenedioxy-3-dehydroxyoleanolic acid를 동정하였으며 당으로 ${\alpha},\;{\beta}-glucose$와 arabinose, rhamnose를 확인하였다. 2. 자연산 날 것 식용적기에 가장 많은 ‘b’ saponin(elatoside $Fh_2$)을 분리하여 동정한 결과 그 구조는 3-0-$[{\alpha}-L-arabinopyranosyl(1{\rightarrow}2)-{\beta}-D-glucopyranosyl]$-28-O-${\beta}-D-glucopyranosyl$ oleanolic acid라 추정된다.
We observed that an inclusion body (IB) of recombinant ${\beta}$-galactosidase that was produced by the araBAD promoter system in Escherichia coli (E. coil) showed enzyme activity. In order to improve its activity, the lowering of the transcription rate of the ${\beta}$-galactosidase structural gene was attempted through competition between an inducer (L-arabinose) and an inducer analog (D-fucose). In the deep-well microtiter plate culture and lab-scale fermentor culture, it was demonstrated that the addition of D-fucose caused an improvement in specific ${\beta}$-galactosidase production, although ${\beta}$-galactosidase was produced as an IB. In particular, the addition of D-fucose after induction led to an increase in the specific activity of ${\beta}$-galactosidase IB. Finally, we confirmed that the addition of D-fucose after induction caused changes in the structure of ${\beta}$-galactosidase IB, with higher enzyme activity. Based on these results, we expect that an improved enzyme IB will be used as a biocatalyst of the enzyme bioprocess, because an enzyme IB can be purified easily and has physical durability.
Candida sp. L-16 균주가 생산하는 D-xylulokinase는 배양균체를 초음파 파쇄한 조효소액으로 하여 황산암모늄 염석, DEAE-cellulose, chromatography, Sephadex G-100과 Sephadex G-200 gel filtration 과정으로 정제하여 최종 수율 11.2%로 약 23.2배 정제하였다. 정제 효소의 분자량은 SDS-PAGE로 분석한 결과 분자량은 75,000 dalton으로, Sephadex G-200겔 여과에 의해 150,000 dalton으로 나타나 dimer로 확인되었다. 효소 활성에 미치는 최적 반응 온도는 4$0^{\circ}C$로 나타났고, 온도안정성은 비교적 불안정하여 3$0^{\circ}C$이상에서는 빠르게 실활되었다. 정제 효소의 최적 반응 pH는 pH 8.0이었고, pH 7.0에서 pH 9.0 사이에서 비교적 효소활성이 높았다. 본 효소는 D-xylulose, D-arabinose, D-ribose등에서는 높은 기질특이성을 가지고 있었으나 D-xylose, D-glucose, L-arabinose 등은 기질로서 작용하지 못하였다. 정제 효소의 활성화 에너지값(Ea)은 $25^{\circ}C$ 내지 4$0^{\circ}C$$^{\circ}C$의 온도 범위에서 4.75kcal/mol이었다. 효소의 활성화제로는 EDTA, cysteine-HCl, DTT, glutathione 등이 존재하며 억제제로는 6-phosphogluconic acid, 2-koeto-gluconic acid 등으로 나타났다.
Antitumor and antimicrobial activities of water soluble fractions of Duchesnea indica (Andr.) and Focke (Rosaceae), have been studied. The contents of total polysaccharide were 22% and its composition was identified by G.C.: L-arabinose(Rt: 7.71), D-xylose (Rt. 9.91), D-glucuronic acid (Rt. 12.77), D-fructose (Rt. 13.63), D-galactose (Rt. 14.68), D-glucose (Rt. 15.42). The antimicrobial activity of Duchesnea indica against four bacterial species, S. aureus, S. paratyphi, S. dysenteriae and Ps. aeruginosa was observed.
A crude polysaccharide fraction (GU-3) from the roots of Glycyrrhiza uralensis (licorice root), a screened herbal plant used in the preparation of herbal kimchi, enhanced Peyer's patch mediated bone marrow cell proliferation and NK cell-mediated tumor cytotoxicity against Yac-1 cells. GU-3 was further purified by DEAE-Sepharose CL-6B yielding fractions designated as GU-3I, and 3IIa∼3IIe. GU-3IIa is mainly composed of arabinose, galactose and galacturonic acid, and showed the highest bone marrow cell proliferation activity. In addition, GU-3IIb had arabinose, galactose, rhamnose and galacturonic acid as the component sugars with a small quantity of protein; GU-3IIb also enhanced activity of NK cell-mediated tumor cytotoxicity. After these fractions were further fractionated via gel filtration on Sepharose CL-6B or Sephacryl S-300, two immunological active polysaccharides, GU-3IIa-2 and 3IIb-1 were purified from the respective fractions. GU-3IIa-2 mostly contained neutral sugars (75%) such as arabinose and galactose (molar ratio; 1.0 : 0.7) in addition to a considerable amount of galacturonic acid (20%), whereas GU-3IIb-1 was composed of arabinose, galactose, rhamnose and galacturonic acid (molar ratio; 0.3 : 0.5 : 0.1 : 1.0). Methylation analysis indicated that GU-3IIa-2 was composed mainly of terminal, 4- or 5-linked and 3,4- or 3,5-branched arabinose, 3-linked, 4-linked and 3,6-branched galactose, and terminal and 4-linked galacturonic acid whereas GU-3IIb-1 contained various glycosidic linkages such as terminal and 4- or 5-linked arabinose, 2,4-branched rhamnose, terminal and 4-linked galactose, and terminal and 4-galacturonic arid. Single radial gel diffusion indicated that only GU-3IIa-2 strongly reacted with β-D-glucosyl-Yariv antigen. These results suggest that bone marrow cell proliferating activity and enhancement of NK cell-mediated tumor cytotoxicity of GU-3 are caused by polysaccharides containing a pectic arabinogalactan (GU-3IIa-2) and pectic polysaccharide (GU-3IIb-1).
This experiment was conducted to evaluate the effect of supplementing enzyme cocktail on growth performance, digestibility of nutrients, and monosaccharide concentration in ileum and ceca of broiler chickens fed wheat-based diets. A total of 600 male broilers (42.26 ± 1.76 g, 0 day old) were used for 35 days of feeding trial consisting of 2 phases (starter phase from d 0 to 21 and finisher phase from d 21 to 35). Four dietary treatments were prepared based on wheat diets containing four levels of enzyme cocktail supplementation at 0, 0.2, 0.3, and 20 g/kg. Overall, dietary enzyme cocktail supplementation decreased feed conversion ratio (linear p = 0.007; quadratic p = 0.013) and improved (linear p < 0.05) the apparent ileal digestibility of dry matter (DM), crude protein, and soluble and insoluble non-starch polysaccharides. The apparent total tract digestibility of DM and gross energy were increased (linear p < 0.01) with increasing supplementation levels of the dietary enzyme cocktail. The concentrations of arabinose, xylose, mannose, and glucose in ileal digesta were linearly increased (p < 0.01) with increasing enzyme cocktail supplementation levels. In addition, the quadratic effect was observed (quadratic p = 0.046) in mannose concentration of ileal digesta. The concentration of arabinose, xylose, mannose, and galactose in cecal digesta was increased (linear p < 0.05) with increasing dietary enzyme cocktail supplementation levels. The supplementation of enzyme cocktail efficiently increased the utilization of nutrients in broiler and there was no adverse effects of high dosage supplementation level.
본 연구에서는 Aspergillus niger KG79에서 두종류의 D-xylanase를 분리.정제하여 그 특성을 규명하였다. 이 두 종류의 D-xylanase의 물리화학적 및 동력학적 특성은 큰 차이가 없었다. 이들 Xylanase는 D-Xylan으로부터 Xylose, Xylobiose와 Xylotriose를 분해 생성하였다. 그러나 보리짚 Xylan을 기질로 사용했을 경우에는 Xylanase I 은 II보다 측쇄 arabinose를 상당히 빨리 분해하였다. 이들 효소에 의한 Xylan의 분해도는 기질의 종류에 따라 차이가 나서 보리짚 Xylan과 larchwood Xylan의 분해도는 각각 10%와 25%(환원당량) 정도로 나타났다. 순수정제된 Xylanase와 $\beta$-Xylosidase를 사용하여 재조합한 Xylanase계의 기질분해력을 비교한 결과 최적조건에서 보리짚과 larchwood Xylan은 각각 28%와 54%씩 분해 전환되었다. 이러한 결과는 Xylan의 효소분해도의 제한요소는 기질의 물리적 특성의 차이에 기인함을 추정할 수 있었다.
국내에 자생하는 지렁이로(붉은줄지렁이)의 장에서 야생효모를 분리, 동정하고자 하였다. 지렁이는 고양시 난지 물 재생 센터에서 분양 받았으며, 지렁이 5마리에서 19개의 야생효모를 분리하였다. 효모의 D1/D2 영역으로 동정하여 국내에 보고되지 않은 효모 3균주를 선별하였다. 국내 미기록종 효모인 Yarrowia deformans YP242 (=KACC48778), Sporidiobolus pararoseus YP66(=KCTC27963), Naganishia liquefaciens YI9 (=KACC48948) 균주는 위상차현미경, API 20C AUX kit를 통해 균학적 특성을 조사하였다. YP242, YI9, YP66 균주의 세포 모양은 타원형이며, 집락은 볼록하고, 부드러운 재질을 가지는 것으로 관찰되었다. 탄소원 활성 측정 결과, YP242는 glycerol, L-arabinose, N-acetyl-D-glucosamine을, YP66는 N-acetyl-D-glucosamine을, liquefaciens YI9는 2-keto-D-gluconate을 탄소원으로 사용할 수 있음을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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