• Applied Biological Chemistry
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• 제25권3호
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• pp.155-160
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• 1982

Claviceps spp.는 tryptophan함유배지에서 적갈색 색소를 형성한다. D.L.-tryptophan$[side\;chain-3^{14}C]$를 배지에 첨가하였을 때 $^{14}C-labeled$ pigment와 constant specific radioactivity를 갖는 5-hydroxytryptophan을 재결정 분리하였다. 동시에 $^{14}C-labeled$ 5-hydroxytryptophan으로 같은 실험을 행한 결과, tryptophan 보다 4배 이상, 색소물질로 주입되는 것을 관찰할 수 있었다. 한편, UV-spectrum 및 fluorometric analysis등에 의하여 배지중 5-hydroxytryptophan이 생합성되는 것을 확인할 수 있었다. tryptophan에서 출발하는 또 하나의 ergot pigment 생합성경로는 곰팡이 생육배지중에서 40pmde/mg protein 농도의 cytochrome p-450을 분리 정제할 수 있어 tryptophan이 hydroxylation되어 5-hydroytryptophan으로 전환하는 효소학적 반응으로 검정되어 hydroxylation반응이 우선하는 기작에 의한 것임을 알 수 있다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제32권9호
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• pp.3367-3371
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• 2011

An easy and convenient synthetic route to (S)-2-hydroxy-2'-(3-phenyluryl-benzyl)-1,1'-binaphthyl-3-carboxaldehyde (1), capable of recognizing tryptophan by fluorescence has been developed. The binol carboxaldehyde 1 exhibited a high selectivity to L-tryptophan over other examined L-${\alpha}$-amino acids such as alanine, phenylalanine, glutamine, arginine, lysine, serine, threonine, aspartat, valine, histidine and cysteine, with a fluorescence "turn-on" signal. In addition, 1 displayed chiral discrimination with good enantioselectivity toward L-tryptophan over D-tryptophan through different fluorescence enhancement factors.

• 한국응용과학기술학회지
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• 제32권3호
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• pp.451-460
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• 2015

An enantioselective recognition of D- and L-tryptophan (Trp)-b-cyclodextrin (CD) inclusion complex was performed using electrochemical and FT-Raman spectroscopic analysis. From the electrochemical analysis, the selectivity coefficient ($K_{DL}$) of b-CD inclusion complexes was found higher than that of the D- and L-Trp in phosphate buffered saline (PBS, pH=7.0) solution. The percentage of enantioselectivity ($I_{%{ee}}$) for peak current of D-Trp-b-CD inclusion complexes was observed higher than that of L-Trp-b-CD inclusion complexes in PBS solution. From Raman spectroscopy, chemical shift difference (D, $cm^{-1}$) for the C=C stretch, ring vibration, and ring breathing of D-Try-b-CD inclusion complex were observed higher than that of L-Trp-b-CD inclusion complex. The electrochemical and Raman spectroscopic analyses were found very useful for chiral detection of racemic amino acid in the presence of b-CD.

• 미생물학회지
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• 제28권2호
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• pp.174-179
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• 1990

L-Phenylalanine을 대량생산하는 균주를 얻기 위하여 Escherichia coli K-12로부터 여러대사조절 변이주를 분리하였다. MWEC 83은 L-phenylalanine을 7.4 g/l 생산하는 tyrosine, tryptophan 이중 영양요구성 변이주이다. Tyrosine과 tryptop phan의 첨가없이 L-phenylalanine을 생산하기 위하여 MWEC 83으로부터 복기변이주 MWEC 101을 분리하였다. 또한 MWEC 101 균주로부터 여러 analog와 valine 내성주를 분리하였다. MWEC 101-5는 포도당 15%로 배양 54시간에 17.9 g/l의 L-phenylalanine을 생산하는 최고 우량균주이다. MWEC 101-5의 chorismate mutase와 prephenate dehydratase 효소환성은, 효소반응 혼합액 속에 2mM phenylalanine에 대하여 효소활성이 저해되지 않았다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제10권6호
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• pp.789-796
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• 2000

In order to analyze the effects of tktA, $aroF^{FBR}$, and aroL expression in a tryptophan-producing Escherichia coli, a series of plasmids carrying the genes were constructed. Introduction of tktA, $aroF^{FBR}$, and aroL into the E. coli strain resulted in approximately 10-20 fold increase in the activities of transketolase, the feedback inhibition-resistant 3-deoxy-D-arabinoheptulsonate-7-phosphate synthase, and shikimate kinase. Expression of $aroF^{FBR}$ in the aroB mutant strain of E. coli resulted in the accumulation of 10 mM of 3-deoxy-D-arabinoheptulsonate-7-phosphate (DAHP) in the medium. Simultaneous expression of tktA and $aroF^{FBR}$ in the strain further increased the amount of excreted DAHP to 20 mM. In contrast, the mutant strain which has no gene introduced accumulated 0.5 mM of DAHP. However, the expression of tktA and $aroF^{FBR}$ in a tryptophan-producing E. coli strain did not lead to the increased production of tryptophan, but instead, a significant amount of shikimate, which is an intermediate in the tryptophan biosynthetic pathway, was excreted to the growth medium. Despite the fact that additional expression of shikimate kinase in the strain could possibly remove 90% of excreted shikimate to 0.1 mM, the amount of tryptophan produced was still unchanged. Removing shikimate using a cloned aroL gene caused the excretion of glutamate, which suggests disturbed central carbon metabolism. However, when cultivated in a complex medium, the strain expressing tktA, $aroF^{FBR}$, and aroL produced more tryptophan than the parental strain. These data indicate that additional rate-limiting steps are present in the tryptophan biosynthetic pathway, and the carbon flow to the terminal pathway is strictly regulated. Expressing tktA in E. coli cells appeared to impose a great metabolic burden to the cells as evidenced by retarded cell growth in the defined medium. Recombinant E. coli strains harboring plasmids which carry the tktA gene showed a tendency to segregate their plasmids almost completely within 24h.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제44권5호
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• pp.453-459
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• 2006

두 개의 D-아미노산 물질을 분리함에 있어서 이온성 액체의 영향을 고찰하였다. 아미노산 물질로서 D-tryptophan과 N-CBZ-D-phenylalanine을 사용하였으며, 이온성 액체로서 1-butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate(${[BMIm]}^+{[BF_4]}^-$)을 사용하였고, 역상 액체 크로마토그래피로 분석하였다. 이동상은 각각 65％, 70％, 80％ 메탄올을 주성분으로 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0, 12.0과 15.0 mmol/L의 농도의 이온성 액체를 첨가하였고, 칼럼($3.9{\times}300mm$)에 $15{\mu}m$의 입자 크기를 가진 $C_{18}$ 실리카 겔을 충진하여 사용하였다. 이온성 액체를 첨가함으로써 D-tryptophan의 체류인자는 거의 변화가 없었지만, N-CBZ- D-phenylalanine의 체류인자는 감소하였다. 두 물질의 분리도는 메탄올의 함량과 이온성 액체의 농도에 따라 변화하였다. 메탄올의 함량이 낮을수록, 이온성 액체의 농도의 증가에 따라서 분리도는 증가하는 경향을 나타내었다

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제48권4호
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• pp.515-518
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• 2010

$Chirobiotic^{(R)}$ T HPLC 컬럼을 이용하여 D, L-트립토판을 분리하였다. 이동상으로 메탄올과 증류수를 각각 70/30, 80/20, 90/10의 비율로 사용하고 체류시간을 비교하기 위해 온도를 25, 40, $55^{\circ}C$로 변화시켰다. 이동상 조성비를 변화시켜 D-트립토판과 L-트립토판의 체류시간 차이를 조사하였다. 선택도와 분리도, 컬럼의 효율성을 체류시간 관점에서 계산하여 최적의 분리 조건을 찾는 실험을 하였다. 이동상에서 메탄올의 양이 감소함에 따라 트립토판 체류시간이 짧아지고, 컬럼의 온도가 증가함에 따라 체류시간도 감소한다. 메탄올과 증류수의 비가 70/30일 때와 온도가 $25^{\circ}C$일 때 가장 좋은 선택도와 분리도를 얻었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제42권3호
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• pp.186-195
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• 2015

Anthranilate synthase (AS)는 트립토판(Trp)과 indole-3-acetic acid, indole alkaloids의 생합성 경로에서 중요한 효소로 작용한다. 트립토판 생합성 상에서 feedback inhibition에 민감하게 반응하는 AS alpha-subunit 관련 OASA2 유전자 영역의 single (F124V) 및 double (S126F/L530D) 점돌연변이로 변형된 유전자의 재조합운반체를 작성하고 이들 유전자들을 Agrobacterium 방법으로 동진벼에 도입하여 형질전환체를 육성하였다. Single 및 double 돌연변이 OsASA2 유전자가 도입된 형질전환 벼 계통들은 nos gene probe를 이용한 TaqMan PCR 방법으로 single copy를 선발하였고, intergenic 계통을 선발하기 위해서 Bfa I 제한효소를 이용하여 RB와 LB 인접서열로부터 IPCR을 통한 FST 분석을 수행하여 4 개의 intergenic 계통을 선발하였다. 도입된 유전자의 발현으로 형질전환 벼는 Trp, IAN 및 IAA가 잎에 가장 많이 축적되었고, 종자의 트립토판 함량도 증가되었다. 후대에서 tryptophan 함량이 높은 S-TG와 D-TG의 두 호모 이벤트 계통을 육성하여 트립토판 함량을 분석한 결과 대조구에 비하여 13~30배 이상 높게 나타났으며, 유리아미노산의 함량도 증가하였다. 이벤트 계통을 이용하여 microarray 분석을 수행한 결과 세포 내 이온 수송, 영양분 공급 등에 영향을 주는 유전자군들이 up-regulation 되었고, 세포 내 기능유전자의 역할을 담당하는 조효소 등이 down-regulation 된 것을 확인 할 수 있었다. 이러한 결과는 선발된 두개의 상동성 이벤트 계통들이 고함량의 유리 트립토판 생산 벼의 육종에 효과적으로 이용될 수 있음을 보여준 결과로 생각된다.

• Korean Membrane Journal
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• 제5권1호
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• pp.25-30
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• 2003

Chitosan membranes crosslinked with glutaraldehayde that contained chiral environment were prepared. The chitosan membranes were characterized using FTIR and swelling index measurements. Their swelling index in water ranged from 100 to 70%, depending on the crosslinking time. The separation of D- and L-isomers of tryptophan was achieved through a pressure driven membrane separation process, using the self-supporting crosslinked chitosan membranes. The chiral separation performance of the membranes depended strongly on the swelling index of the membranes and the separation conditions such as concentration of feed solutions and different operating pressures. Especially when a chitosan membrane with a swelling index of 70% was used, almost complete optical resolution of D- and L-tryptophan was obtained ; enantiomeric excess (ee %) of 97.92% and flux of 2.26 g/㎡$.$h.

• 멤브레인
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• 제16권2호
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• pp.133-143
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• 2006

방사선 그라프트 중합법을 적용하여, 폴리에틸렌 다공성 중공사막에 전자선을 조사시킨 후, glycidyl methacrylate(GMA)를 그라프트 중합하였다. 그 후, 음이온 교환기로서 diethylamine (DEA), triethylamine (TEA)를 도입시켜 2종류의 음이온 교환막을 합성하였다. DEA막과 TEA막의 이온교환 밀도는 3.4 mmol/g, 1.74 mmol/g으로 DEA막이 TEA막보다 높은 이온교환기를 얻을 수 있었다. 이 2종류의 음이온교환막에 단백질(bovine serum albumin, BSA)을 투과법에 의해 고정시켜 BSA 고정막을 만들었다. DEA-BSA막의 경우, 그라프트 체인에 BSA가 8층 이상으로 다층 흡착하였으나, TEA-BSA막의 경우, 강한 음이온에 의해 다층 흡착이 이루어지지 않았다. DEA-BSA막의 경우, BSA 다층 흡착성 고정을 나타내기 때문에 L-Trp가 D-Trp보다 더 강한 흡착 특성을 나타내었다. L, D-Trp 이성질체 혼합물을 투과시킨 BTC에 있어서, DEA-BSA 막의 경우, BSA에 대한 L-Trp와 D-Trp의 키랄 인식이 다르기 때문에 2단계의 BTC곡선을 얻을 수 있었다.