The strain which produces agar degrading enzyme was isolated from chiton(Liolophura japonica). The strain was identified as Cytophaga sp. through its morphological, physiological, and biological characteristics. For the production of agar degrading enzyme, 0.3% nutrient broth, 0.2% yeast extract and 0.5% agar was used as nitrogen and carbon source, respectively. The optimal initial pH, NaCl and temperature for the agar degrading activity of Cytophaga sp. were 7.0, 2.0% and $30{\pm}2^{\circ}C$, respectively. Agar degrading activity of enzyme obtained from Cytophaga sp. was increased until the incubation of 96hrs, but after 96hrs, the activity was decreased.
A marine bacterium with highly effective agar degrading activity was ioslated from the southern sea of Korea (Chonnam, YoChon) and identified as Cytophaga sp. and named as Cytophaga sp. AYK301. This strain produced an extracellular agarase which had a high activity with agar. The optimum culture conditions for the production of agarase have been determined. For the increase of agarase productivity, 0.2% agar, 0.3% beef extract, and 0.05% NH$_4$NO$_3$ were used as carbon, organic and inorganic nitrogen source, respectively. The optimal initial pH, NaCl, culture time and temperature for the agar degrading activity were 7.5, 7.0%, 36 hr and $25^{\circ}C$, respectively. In the optimal conditions, the agarase production was increased up to more than 4.0 folds as compared to that by the basal medium.
Agar degrading enzyme-agarase-was purified from the culture fluid of Cytophaga so/ ACLJ-18, by acetone precipitation, DEAE-Cellulose, Sephadex G-100 and CM-Sephadex C25 column chromatographies. The molecular weight of purified agarase was estimated to be 24,700 dalton by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum pH and temperature for agarase activity were 7.0 and 40$^{\circ}C$, respectively. this agarase was stable in the pH range of 6.5 - 8.0 and 40$^{\circ}C$, and required 0.35M NaCl for optimum activity. And this agarase was inhibited by metal ions such as Ba2+, Cu2+, Co2+, Mn2+, Hg2+, Zn2+, and showed specificity on agar.
The characteristics of a pathogen isolated from infected tilapia, which showed the external symptoms of fin erosion and body deceleration, were examined. The strain of isolated pathogen was identified as Flexibactor columnaris, The normal tilapia dipped into suspensions of the isolated pathogens has developed the infective symptoms. The strain of Flexibactor columnaris was sensitive to kanamycin, tetracycline, and amikacine, but resistant against sulfa drugs. This strain could not grow in the cytophaga media containing over $2\%$ NaCl or over $50\%$ sea water. In cytophaga broth containing more than $50\%$ or sea water instead of distilled water, the number of Flexibacter columnaris decreased from about $10^6/ml\;to\;10^4ml$ within one hour after inoculation. On the other hand, in cytorhaga broth containing more than $5\%$ of NaCl, the number rapidely reached less than 10/ml from about $10^5/ml$ within one hour after inoculation.
An extracellular chitinase-producing bacterial strain induced by colloidal chitin was isolated from sea sand and was identified to be a member of the genus Cytophaga. The chitinase was purified successively by 30-60% ammonium sulfate fractionation, and DEAE-Bio gel A column, Octyl-Sepharose CL-4B column, and DEAE-Bio gel A column chromatographies. The enzyme had a molecular mass of 59.75 kDa, and the amino terminal amino acid sequence was ATPNAPVISW MPTDXXLQNXS. The enzyme acted better on colloidal chitin as a substrate than on chitosan. For colloidal chitin and chitosan (Degree of Acetylation, 15-25%), $K_{cat}$ values were 0.60U/mg and 0.08U/mg, respectively. HPLC analysis of the enzymatic reaction products showed that the chitinase produced mostly N-acetyl-D-glucosarnine and di-N-acetylchitobiose. The optimum temperature and pH for the enzyme were $50^{\circ}C$ and 4.0, respectively. N-Bromosuccinimide and $Hg^{2+}$ inhibited the chitinase activity as much as 90%, and $Sb^{3+}$, diethylpyrocarbonate, and $Ag^{+}$ inhibited it by 50-70%.
The composition of bacterial communities was detected in surface water of Cheonho Reservoir dominated by cyanobacteria, using fluorescent in situ hybridization (FISH) method. Total bacterial numbers were very high ranging from 0.6~$1.3{\times}10^7 \cells{\cdot}ml^-1$, whereas the ratio of Eubacteria to total bacteria was 29.8~45.8%, which was lower than that in other freshwater ecosystems. On average only 2.1% of DAPI-stained bacteria were detected by FISH with probes for $\alpha$, $\beta$, and $\gamma$-groups, respectively. Unknown eubacteria which was not bound to any probes except EUB 338, was relatively high. On the other hand, the Cytophaga-Flavobacterium group increased following the change of dominant species from Anabaena sp. to Microcystis sp. This result showed that bacterial communities could be affected by phytoplanktons, especially cyanobacteria.
Kim, Young-Ho;Kim, Youn-Sook;Lee, Jae-Ran;Lee, Eun-Kyung
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.3
no.1
/
pp.31-38
/
1993
A bacterial strain KY-l isolated from sewage was able to produce an extracellular agarase(agarose 4-glycanohydrolase. EC 3.2.1.81). The strain KY-1 was identified as Cytophaga fermentans subsp. agarovorans based on its morphological and physiological characteristics. The agarase was purified by ammonium sulfate precipitation followed by DEAE-Sephadex A-50. Bio-Gel P-100. and CM-Cellulose column chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was 24 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum temperature and pH for the enzyme activity were 30^{circ}C and 7.5, respectively. The enzyme activity was significantly inhibited in the presence of 0.1 mM $HgCl_2$. whereas it was elevated 3 times by $MnSO_4$ at 1 mM concentration. The Km value and Vmax were 16.67 mg/ml and 3.77 unit/ml.min. The agarase gene was cloned into Escherichia coli MC1061 using the plasmid vector pBR322. A 1.4 Kb DNA fragment of PstI-digested chromosomal DNA of C. fermentans KY-l was inserted into the PstI site of pBR322. expressed in the E. coli. and up to 60% of the total enzyme was extracellularly secreted. Enzymatic properties of the extracellular agarases produced by both the transformant and the donor were very similar in terms of optimal pH and temperature.
The effects of ultrasonication on phytoplankton were investigated in two ponds in which physicochemical and biological water quality was similar, one as a treatment and the other as a control. The samples were collected from August 18 to September 30 in 2003. Traditional morphological analysis showed that Bacillariophyceae dominated phytoplankton community in both ponds. The abundance of Cyanophyceae was lower in the phytoplankton community of the sonicated pond than that of control pond. We used DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) to analyze the diversity and change of phytoplankton community in two ponds. The DGGE banding patterns of 16S rRNA gene and sequence analysis demonstrated that Oscillatoria acuminata and CFB (Cytophaga-Flavobacterium-Bacteroides) group bacterium appeared in the treated pond, and the control pond was dominated by Synechococcus sp. and Aphanizomenon flos-aquae. Especially, Pseudanabaena sp. dominated during the ultrasonic cessation in the treated pond. The DGGE profiles of 18S rRNA gene and sequence analysis showed that the treated pond was dominated by Chlamydomonas reinhardtii and the control pond by C. reinhardtii and Pteromonas protracta. In conclusion, the ultrasonication affected the reduced growth of cyanobacteria, particularly Pseudanabaena.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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