군부에서 분리한 한천 분해 균주의 최적 효소 생산 조건은 질소원으로 nutrient broth, yeast extract를 각각 0.3%, 0.2%였고, 탄소원으로는 agar 0.5%가 가장 적절한 조건이었다. NaCI 농도는 2.0 % %, pH 7.0, 온도는 $30{\pm}2^{\circ}C$, 의 조건에서 약 96시간 배양하는 것이 가장 적절한 효소 생산 조건이었다. 분리균주의 생리, 생화학 특성을 조사한 결과, 그랑 음성 간균으로 gold-yellow colony를 형성하는 균 으로 oxidase, catalase 생성의 호기성균이었다. 각종 유기산류, 아미노산류 및 당류의 이용성 시험에 서 citrate, lactate, salicine, histidine, glucose, melibiose, sucrose에 대해 양성을 나타내었고, chitin, casein, gelatin을 분해하고, indole 및 H2S 를 생성하지 않았다. 이상의 결과로부터 본 균주는 Cytophaga sp.로 동정되었다.
해양으로부터 한천분해능이 뛰어난 균주를 한국의 서해(전남, 여천)으로부터 분리하여 Cytophaga sp.인 것으로 동정되었으며, 이 균주를 Cytophaga sp. AYK301이라 명명하였다. 균체성장과 효소 생산성 향상을 위한 탄소원의 영향을 단당 및 복합당류를 이용하여 살펴본 결과 본 균주는 agar기질을 사용하여 배양하였을 때 효소생산량이 가장 높은 것으로 확인되었으며, agar를 0.0~0.6%(w/v) 농도별로 첨가하여 효소생산능의 최적조건을 살펴보았다. 그 결과 0.2%(w/v) agar에서 최대효소활성을 나타내었다. 질소원의 영향은 유기질소원과 무기질소원으로 나누어 실험을 행하였는데 beef extract 0.3% (w/v), $NH_4NO_3$ 0.05%(w/v)에서 각각 최고의 효소활성을 나타내었다. 또한, 초기 pH의 영향에서 pH 7.5에서 효소활성이 가장 높게 나타났고, NaCl 농도의 영향에서는 7%(w/v)에서 가장 높은 효소활성을 나타내었으며, 각종 금속이온에 대한 효소활성은 거의 영향이 없는 것으로 확인되었다. 따라서, 본 연구에서는 최적배양조건하에서 플라스크로 배양한 결과, 231 units/L를 생한하여 기본배지를 이용하였을 때보다 약 4배 정도 효소활성이 증가하였음을 확인하였다.
Agar degrading enzyme-agarase-was purified from the culture fluid of Cytophaga so/ ACLJ-18, by acetone precipitation, DEAE-Cellulose, Sephadex G-100 and CM-Sephadex C25 column chromatographies. The molecular weight of purified agarase was estimated to be 24,700 dalton by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum pH and temperature for agarase activity were 7.0 and 40$^{\circ}C$, respectively. this agarase was stable in the pH range of 6.5 - 8.0 and 40$^{\circ}C$, and required 0.35M NaCl for optimum activity. And this agarase was inhibited by metal ions such as Ba2+, Cu2+, Co2+, Mn2+, Hg2+, Zn2+, and showed specificity on agar.
지느러미 부식과 체색변화를 나타내는 틸라피아 병어로부터 분리한 병원균의 성상은 다음과 같다. 1. 병어로부터 분리한 병원균은 Flexibacter clumnaris로 동정되었다. 2. 분리한 병원균액으로 인위감염시켰을 때 전형적인 columnaris병 증상을 나타냈다. 3. 병원균은 kanamycin, tetracycline, amikacin 등에서 높은 감수성을 나타냈으나, sulfa제에서는 거의 감수성을 나타내지 않았다. 4. $2\%$ 이상 식염이나 $50\%$이상 해수를 함유한 cytophaga배지에서 병원균은 자라지 못했다. 5. 증류수 대신 $50\%$ 이상 해수를 함유한 Cytophaga배지에 병원균을 접종시킨 후 1시간만에 약 11에서 $10^6/ml$에서 $10^4ml$로 균수가 감소했는 데 반하여, $5\%$ 이상 식염을 함유한 cytophaga 배지에서는 접종 후 1시간만에 균수가 약 $10^5/ml$에서 10/ml 이하로 급격히 감소했다.
An extracellular chitinase-producing bacterial strain induced by colloidal chitin was isolated from sea sand and was identified to be a member of the genus Cytophaga. The chitinase was purified successively by 30-60% ammonium sulfate fractionation, and DEAE-Bio gel A column, Octyl-Sepharose CL-4B column, and DEAE-Bio gel A column chromatographies. The enzyme had a molecular mass of 59.75 kDa, and the amino terminal amino acid sequence was ATPNAPVISW MPTDXXLQNXS. The enzyme acted better on colloidal chitin as a substrate than on chitosan. For colloidal chitin and chitosan (Degree of Acetylation, 15-25%), $K_{cat}$ values were 0.60U/mg and 0.08U/mg, respectively. HPLC analysis of the enzymatic reaction products showed that the chitinase produced mostly N-acetyl-D-glucosarnine and di-N-acetylchitobiose. The optimum temperature and pH for the enzyme were $50^{\circ}C$ and 4.0, respectively. N-Bromosuccinimide and $Hg^{2+}$ inhibited the chitinase activity as much as 90%, and $Sb^{3+}$, diethylpyrocarbonate, and $Ag^{+}$ inhibited it by 50-70%.
봄철 cyanobarteria가 우점하는 천호지에서 fluorescent in situ hybridization (FISH) 방법을 이용하여 세균군집구조를 조사하였다. 조사기간동안 총세균수는 0.6~$1.3{\times}10^7 \cells{\cdot}ml^-1$ 의 범위로 매우 높게 나타났다. 또, 총세균수에 대한 eubacterial group이 차지하는 비율의 경우 29.8~45.8%로 작은 분포를 차지하였다. 세균군집구조를 분석한 결과, $\alpha$-group은 1.4~l2.5%, $\beta$-group은 0.9~4.9%, $\gamma$-group은 0.6~8.3%, $\circledcirc$Cytophaga-Flavobacteruim group은 1.0~8.3%를 나타내어 본 연구에서 조사된 각 group이 차지하는 비율은 낮고 상대적으로 unknown eubacteria의 비율이 높았다. 이러한 군집구조는 일반적으로 다른 담수호에서 나타나는 세균의 군집구조와는 다른 군집구조 이며 특히, aggregates에 부착한 세균 군집구조와 비슷한 양상이었다. 또, cyanobacteria의 조성 이 Anabaena속에서 Microcystis속으로 천이가 일어난 시기에 Cytophaga-Flavobacteruim group이 크게 증가하는 것으로 나타나 세균군집의 크기는 식물플랑크톤의 영향을 받는 것으로 확인되었다.
Kim, Young-Ho;Kim, Youn-Sook;Lee, Jae-Ran;Lee, Eun-Kyung
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제3권1호
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pp.31-38
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1993
A bacterial strain KY-l isolated from sewage was able to produce an extracellular agarase(agarose 4-glycanohydrolase. EC 3.2.1.81). The strain KY-1 was identified as Cytophaga fermentans subsp. agarovorans based on its morphological and physiological characteristics. The agarase was purified by ammonium sulfate precipitation followed by DEAE-Sephadex A-50. Bio-Gel P-100. and CM-Cellulose column chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was 24 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum temperature and pH for the enzyme activity were 30^{circ}C and 7.5, respectively. The enzyme activity was significantly inhibited in the presence of 0.1 mM $HgCl_2$. whereas it was elevated 3 times by $MnSO_4$ at 1 mM concentration. The Km value and Vmax were 16.67 mg/ml and 3.77 unit/ml.min. The agarase gene was cloned into Escherichia coli MC1061 using the plasmid vector pBR322. A 1.4 Kb DNA fragment of PstI-digested chromosomal DNA of C. fermentans KY-l was inserted into the PstI site of pBR322. expressed in the E. coli. and up to 60% of the total enzyme was extracellularly secreted. Enzymatic properties of the extracellular agarases produced by both the transformant and the donor were very similar in terms of optimal pH and temperature.
초음파가 식물플랑크톤에 미치는 영향을 조사할 목적으로, 이화학적 그리고 생물학적으로 유사한 두 군데의 부영양화 연못에서 2003년 8월 18일부터 9월 30일까지 약 4일 간격으로 시료를 채취하여 실험을 실시하였다. 실험기간 동안 출현한 식물플랑크톤 군집은 규조류(Bacillariophyceae)가 거의 대부분을 차지하였으며, 남세균(Cyanophyceae)은 상대적으로 적은 비중을 차지하였다. 분자생물학적 기법중의 하나인 DGGE(denaturing gradient gel electrophoresis)를 이용하여 식물플랑크톤 군집 구조를 비교분석하였다. 16S rDNA의 DGGE profile 분석에 의하여 처리구 연못에서는 Oscillatoria acuminata를 비롯하여 CFB (Cytophaga-Flavobacterium-Bacteroides) group bacterium 등이 나타나는 것으로 확인되었으며, 초음파가 정지된 시기에 특이적으로 Pseudanabaena sp.가 나타나는 것을 확인하였다. 대조구 연못에서는 Synechococcus sp.와 Aphanizomenon flos-aquae가 출현하는 것을 확인하였다. 18S rDNA의 DGGE profile분석결과 처리구 연못에서는 Chlamydomonas rein. hardtii가 우점하는 것으로 확인되었으며, 초음파 처리에 크게 반응하지 않는 것으로 판단된다. 대조구 연못에서는 처리구 연못에서 나타난 C. reinhardtii를 포함하여 Pteromonas protracta가 출현하였다. 결과적으로 초음파는 진핵성 식물플랑크톤 보다는 원핵성 식물플랑크톤의 다양성에 더 큰 영향을 주는 것으로 판단되며, 일부 남세균(Pseudanabaena sp.)의 생장에 저해를 주는 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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