Effects of 4-nonylphenol (4-NP) on mixed function oxygenase (MFO) in the kidneies of rockfish (Sebastes schlegeli) were investigated. The cytochrome P45O (CYP) contents and NADPH cytochrome P450 reductase, NADH cytochrome b5 reductase and 7-ethoxyredorufin-O-deethylase (EROD) activities of microsome, glutathione S-transferase (GST) activity of cytosol in rockfish exposed to 4-NP for 7 days using an intraperitoneal injection (25 mg/kg) were quantitatively determined. The GST activity of rockfish exposed to 4-NP were higher, up to 5.2 times higher, than those in the control fish. The activities of NADPH-and NADH-dependent reductases were inhibited. On the other hand, CYP contents and EROD activity of the 4-NP exposed fish demonstrated neither an increasing or decreasing trend.
A difference in ethanol metabolism between premature and young adult rats was examined. Female SD rats, either 4wk or 12wk old, were injected with a single dose of ethanol (1.5g /kg) through jugular vein and the blood ethanol level was monitored for 300 min using a gas chromatographic method. Reduction of blood ethanol level per unit of time was less and the area under the blood concentration-time curve (AUC) was significantly greater in young adults compared to premature rats. Activity of hepatic alcohol dehydrogenase was not influenced by the age increase. Total cytochrome P-450, cytochrome $b_5$. or aminopyrine N-demethylation was not different between premature rats and young adult rats. However, p-nitrophenol hydroxylation and p-nitroanisole O-demethylation activities were significantly higher in premature rats. The relative liver weight was 45% greater in premature rats leading to an overall increase in ethanol metabolizing activity in these animals. The results indicate that the reduction in ethanol elimination in young adult rats appears to be mostly associated with the decrease in relative liver weight as the age of animals increases.
The present study was designed to investigate aging-related effects on the activities of xenobiotic metabolizing enzymes of rat liver by dietary supplementation of Korean red ginseng water-extract. Rat did not show any discernible signs of the rejection symptoms, and blood GOT and GPT levels were not influenced by ginseng water extracts, Cytochrome 450 levels and NADPH cytochrome P45O reductase, p-450 dependent ethoxycoumarin O-deethylase, and benzphetamine N-demethylase activities were decreased with aging, however, these phase I system enzymes activities in the ginseng group of24 months were well maintained compared with normal group. But, Levels of cytochrome bs and NADH-cytochrome b$_5$ reductase activities were also decreased with aging and were not found a clear difference between two groups. Glutathione-s-transferase activity, phase II enzyme system, in liver cytosols was also decreased in old ages, but the degree of decrease was higher in normal group than in giuseng supplemented group. These results indicate that long-term supplementation of red ginseng water extracts from weaning to 24 months do not show any side effects to rats, and retard age-related deteriorations of xenobiotic metabolizing enzymes activities in old ages.
강원 북부 연안에 많은 명주조개 (Coelomactra antiquata)의 중장선으로 미크로좀을 만들고, cytochrome P45O (CYP)의 유도제로 알려진 phenobarbital (PB), 3-methylcholanthrene (MC) 및 $\beta$-naphthoflavone (BNF)을 DMSO에 녹여 함께 30$^{\circ}C$의 수조 상에서 in vitro로 배양하면서 약물대사효소계의 CYP 함량과 7-othoxyresorufin-O-deethylase (EROD) 활성의 변화를 경시적으로 조사하였다. 그리고 비교를 위한 sham구는 미크로좀에 DMSO만을 첨가하여 같은 조건으로 배양하였다. 그 결과, sham구의 CYP 함량은 배양 6시간이 지나서는 처음 수준의 $91\%$로 줄었으며, 0.1 mM과 0.2mM, 0.4mM 및 1.0 mM BNF 배양구는 배양 4$\~$6시간 후에 최대값이 되었는데 각각 처음 보다 $116\%$, $114\%$, $126\%$ 및 $132\%$로 되었다. PB와의 배양에서는 0.1 mM과 0.4 mM 및 1.0 mM 배양구는 배양 4$\~$6시간 후에 최대 값이 되었고 각각 처음의 $112\%$, $114\%$ 및 $114\%$로 되었으며, MC와의 배양에서도 0.1 mM과 0.4 mM 및 1.0 mM 배양구는 배양 4시간 후에 최대값이 되어 각각 $116\%$, $130\%$ 및 $132\%$로 증가하였다. 그리고 EROD 활성의 변화도 sham구는 배양 7시간 후에도 변화가 거의 없었으나, BNF의 0.1 mM과 0.4 mM 및 0.8 mM 배양구는 배양 7시간 후에 각각 처음의 $120\%$, $123\%$ 및 $115\%$로 되었고, PB의 0.1 mM과 1.0 mM 배양구는 배양 3시간 후에 최대로 되어 각각 $121\%$ 및 $136\%$로 증가하였으며, MC와의 배양에서는 0.1 mM과 0.4 mM 및 0.8 mM 배양구는 배양 5시간 후에 최대값이 되어 각각 $204\%$, $198\%$ 및 $191\%$로 증가하였다. 이처럼 BNF나 PB, MC는 명주조개에서도 미크로좀의 CYP 함량과 EROD 활성을 증가시키는 유도효과를 나타내었으며, 특히 MC에 의한 유도효과가 가장 강했고 BNF, PB의 순이었고, 대체로 약물의 농도가 높을수록 유도 효과도 큰 경향을 보였다.
동해 해양심층수의 유방암예방 효능과 전이에 미치는 영향을 알아보기 위해 cytochrome P450 1A1 활성과 aromatase 활성 및 유방암세포의 침윤성, 이와 관련된 MMP-9 의 활성과 그 단백질 발현에 미치는 영향을 조사하였다. 해양심층수는 체내외의 여러 화학물질을 체내에서 활성화시켜 발암이나 돌연변이 등을 유발시키는 것으로 알려진 cytochrome P450 1A1을 경도의존적으로 저해시켰다. 또한 호르몬 의존성 유방암의 진행에 관여하는 aromatase의 활성도 경도의존적으로 저해시켰다($5.6{\sim}51.9%$). 해양심층수 처리에 의해 사람유방암세포인 MDA-MB-231 세포의 침윤성은 $73.7{\sim}29.4%$로 감소하였으며, 세포의 침윤시 작용하는 단백질 분해 효소인 MMP-9의 활성과 단백질 발현도 경도의존적으로 억제되었다. 따라서 해양심층수는 유방암 예방과 전이관련의 더 많은 연구에 의해 유방암 예방과 전이 억제작용을 증명할 수 있을 것으로 보인다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제4권2호
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pp.155-162
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2002
Cytochrome P45O (CYP) gene has been known to play one of the most important roles in metabolizing the exogenous materials. In insect, CYP is particularly known to detoxify toxic materials by adding oxygen molecule to the hydrophobic region of the materials. Thus, CYP-dependent metabolism is associated with the adaptation of insect to host plant chemicals. This in turn is known to be one of the driving forces for CYP diversification. In the present study, we cloned seven gene fragments of CYP 4 (CYP4) family from the midgut of the beet armyworm, Spodoptera exigua, through RT.PCT, Sequence analysis of the product showed the gene fragment to contain an open reading frame of ~150 amino acids, consisted of ~450 bp. The cloned gene fragments contained typical, conserved regions found in CYP4 family. Pairwise comparison of the deduced amino acid sequences among seven clones ranged in divergence from 0% to 52.86% and resulted in five distinct clones. The other two clones were identical or differ by one amino acid respectively to the corresponding clone, although each differed by ten nucleotides. Analysis of correlation between GenBank-registered, full length CYP4 and the cloned fragments resulted in statistically significant relationship ($r^{2}$ = 0.96085; p < 0.001), suggesting utility of the partial sequences as such full-length sequences. Phylogenetic analysis of the clones with GenBank-registered insect and mammal CYP4 family sequences by parsimony and several distance methods subdivided the clones into two groups: tones belonging to CYP4S and the others to CYP4M families.
Previously, we showed that acetone enhanced aryl hydrocarbon hydroxylase (AHH) activity in only 3-methylcholanthrene (MC)- or $\beta$-naphtoflavone (BNF)-inducible microsomes of rat liver. In the present study, the possible mechanism underlying acetone action on AHH was investigated in the liver microsomes from MC-pretreated rats. Other n-alkylketones except acetone did not increase AHH activity, which rather decreased significantly with the length of alkyl side chain. Acetone had no effect on the activity of NADPH-cytochrome P450 reductase or inhibited the formation of 3-OH benzo(a)pyrene (B(a)P) in nonenzymatic model ascorbic acid system. However, in cumene hydroperoxide (CuOOH)-supported B(a)P hydroxylation, acetone enhanced its velocity remarkably by 30% at the optimal concentration (30 $\mu$M CuOOH and 1.0% acetone). From these results, we conclude that acetone may facilitate the formation of an activated oxygen species or the insertion of oxygen into B(a)P molecule in CYP1A rich microsomes.
본 논문에서는 cytochrome P450 LA1 유전자의 5'-upsteam 조절부위의 클로닝을 실시하였다. pUC19 vector에 연결시킨 3.4 Kb 크기의 Pstl DNA조각을 Sst1, Nco1 제한 효소로 자른 뒤, Exonuclease III 를 처리하여 약 200bp 씩의 차이를 갖는 여러 크기의 plasmid들을 얻었다. 이 plasmid 의 핵산서열을 알아보기 위해 dideoxy nucletide를 이용한 sequencing방법으로 그 핵산서열의 결정 실험을 시도하였다. 또한, 다환상 방향족 탄화수소 화합물에 반응성을 갖는 C57BL/6N 생쥐와 반응성을 갖지않는 DBA/2N 생쥐에 있어 phase II 대사 효소인UDP-glucuronosyltransferase 효소활성에 대한 3-methylcholanthrene의 영향을 알아보기 위해 C57BL/6N 생쥐와 DBA/2N 생쥐에 각각 다른 농도의 3-methylcholanthrene을 처리하거나 각기 다른 시간에 3-methylcholanthrene를 처리하였다. 그 결과 UDP-glucuronosyl-transferase의 mRNA가 3-methylcholanthrene양의 증가에 따라, 처치시간이 길어짐에 따라 증가되어지며 그 mRNA위 크기는 약 2.2Kb 정도임을 알았다. 이로부터 UDP-ghucuronosyltransferase 또한 cytochrome P45O와 함께 다환상 방향족 탄화수소 화합물 조절인자를 통한 조절을 받을 것이며 phase I phase II 약물 대사 효소가 조절상 밀접한 관련을 가짐을 예측할 수 있었다.
Cytochrome P45O is an oxidase involved in oxidation of alcohol and is known to be an activator of carcinogen. The present study was performed to study the effect of alcohol and cold stress on the expression of Cytochrome P450 IIEl (CYPIIE1) In the liver and salivary glands in rats by an immunoblot analysis. Sixteen rats were divided into 4 groups; 1)rats belonging to group I were allowed to take 15%(v/v) ethyl alcohol as a drink ad libitum: 2)rats of group II were bathed in cold water for 30 sec twice a day (during the one-week experiment); 3)rats comprising group III were received alcohol and cold stress as described above; 4)rats of group IV were selected as a control. The rat were sacrificed at the end of the one-week experiment. The livers and parotid and submandibular salivary glands were removed and stored at -2$0^{\circ}C$ until use. The stored organs were homogenized for 10 sec and the supernatants were obtained by centrifugation. The proteins of the supernatants were separated by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and subjected to Western blotting. The blotted membranes were incubated with polyclonal antibodies to CYPIIEI . The obtained results were as follows : 1. The expression of CYPIIEl was apparently negative in the liver and salivary glands of group IV, wheras its expression was marked in the experiment groups I, II. and III. 2. No difference in the expression of CYPIIEl in the liver and salivary glands was observed between the experiment groups I, II, and III. 3. Among the experiment groups, the expression of CYPIIE1 in the liver was much greater than in the salivary glands. The expression of CYPIIE1 in the submandibular gland was weakly positive but was greater than in the carotid gland.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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