작약에서 분리된 Cylindrocarpon destructans KACC44663 균주의 인삼에 대한 병원성 여부를 밝혀내고자 병원성 검정을 실시하였고 새로운 분류체계에 따른 균의 재분류를 위해 계통학적 유연관계를 분석하였다. 작약으로부터 분리된 KACC44663 균주가 인삼에 병을 일으키는 것을 확인하였고, 새로운 분류체계에 의해 I. radicicola species complex 내 위치하는 Ilyonectria robusta로 동정하였다. 이는 국내에서 타 기주로부터 분리된 병원균이 인삼에 뿌리썩음병을 일으키는 것을 증명한 첫 사례이다.
The disease development of root-rot [pathogen:Cylindrocarpon destruction (Zinssm.) Scholten] occurred in 2-year old ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) was investigated in the continuous (the first cultivation: 1978∼1982, 2nd cultivation: 1990∼1993 and abolished in 1993 due to replanting problem) and replanted cultivation (period of cultivation: 1980∼1984). In the continuous cultivation, incidences of root-rot were 0.7% on May 3, 48.6% on May 24, and 95.8% on June 14, respectively. In the replanted cultivation, no symptom was observed on May 3 and disease incidence was generally lower compared with the continuous cultivation. On the aerial part of the ginseng infected by C. desiccates, the end and/or margin of leaves were changed to dark reddish color that appeared for behind the root-rot symptom. In this field, the longitudinal growth of lateral root was more inhibited than in the case of the replanted cultivation by C. destmctans. The inhibition rate of rootlet growth was 37.3% in the continuous cultivation as compared with that of replanted cultivation at June 14. Though lesions of root-rot were formed all over the roots, 61.2% of the lesions was positioned within 6 cm under the rhizome. Key words Panax ginseng, Cylindrocarpon destmtan, root-rot of ginseng, replanting problem of ginseng.
1982년부터 1885년 동안, 인삼뿌리썩음병 및 근권 토양에서 분리한 Fusarium균(115균주)을 Snyder-Hansen 방식(주로 F. solani 및 F. oxysporum의 동정에 적용) 및 Gerlach-Nirenberg 방식(주로 F. moniliforme[Liseola section]의 균주 동정 및 F. roseum[Snyder-Hansen 분류개념에 의한]에 속하는 균주 동정에 적용), 그리고 Cylindrocarpon균은 Booth 방식으로 분류 동정한 결과, 11개의 종으로 나눌 수 있었다. 가장 많이 분리된 균은 Fusarium solani(55균주), F. oxysporum(35균주), 그리고 F. moniliforme(10균주) 등이었다. Snyder와 Hansen(1945) 분류방식에 의해 F. roseum으로 불리우는 나머지 균주들(15균주)은 매우 드물게 분리되었으며, 8개의 종으로 다시 분류할 수 있었다. 이들은 F. equiseti, F. avenaceum, F. graminum, F. arthrosporioides, F. sambucinum, F. reticulatum, F. semitectum and F. poa 등이었다. 1985년 6월 이들 Fusarium 균주들과 Cylindrocarpon destructans 균주들 및 주요 인삼의 토양전염성 병원균 균주들을 증평인삼시험장 3년생 격리포장에서 균총 절편으로 뿌리 상부에 접종시켜 그 병원성을 검정한 결과, Phytophthora cactorum과 Pythium ultimum은 접종 12일 만에 지상부 위조 및 뿌리의 물렁썩음을 일으키는 높은 병원성을 나타내었다. 접종 후 77일경에 뿌리를 채굴하여 뿌리의 마른 썩음을 조사한 결과, Fusarium solani 균은 34 균주 중 1개 균주만이 병원성을 보였으나, Cylindrocarpon destructans는 12개 접종 균주 모두 인삼의 뿌리썩음에 높은 병원성을 나타내었다 . Fusarium solani 및 Cylindrocarpon destructans는 전형적인 기주-위주의 인삼 토양병원균으로 추정할 수 있었다.
The effects of carbon and nitrogen sources on the mycelial growth and sporulation of microconidia and chlamydospores of five isolates of Cylindrocarpon destructans (Zinssm.) Scholten causing root rot of Panax ginseng were studied. For the carbon sources, fructose, glucose, maltose, and sucrose in Czapek-Dox broth showed good mycelial growth of 178∼201 mg in dry weight compared with 64 mg of the control. The best carbon sources tested for conidial formation were sucrose and maltose with 2.75 and 3.03 log conidia/ml, respectively. For the nitrogen sources, aspartic acid, NaNO3, KNO3, arginine, threonine, and leucine increased mycelial growth of the fungi to 208∼231 mg in dry weight without significant difference (p=0.05) among them. Meanwhile the growth with cystine was poor (26.3 mg dry weight), and no conidium and chlamydospore were formed. Maximum microconidial formation was observed in the media with NaNO3 and KNO3 as 3.37 and 3.35 log conidia/ml, and for the chlamydospore formation the (NH4)2SO4-containing medium and the nitrogen-absent medium were the best as 3.40 and 3.57 log chlamydospores/ml, respectively. No conidium was found in the medium without nitrogen sources, in which chlamydospore formation increased 6 times more than in the nitrogen-amended medium. However, deletion of carbon source in the medium did not affect on the formation of conidia and chlamydospores of C. destructans.
Influence of the moisture content in soils was examined on population variations of soil microbes, including Cylindrocarpon destructans causing root rot of ginseng, in vivo and under the field condition. Fungal populations decreased in soils treated with various moisture contents in vivo as days after the treatment in creased, but there was not a significant difference in the population among other treatments except 135% moisture content (flooding) at 15 weeks after the treatment. In flooded soils populations of total fungi and C. destructans were reduced to 1/10 and 1/50 of initial populations, respectively. There was, however, a little difference in the population of total bacteria or Actinomycetes between before and at 15 weeks after flooding. On the other hand, population variations of bacteria and Actinomycetes were much greater than those of fungi at different intervals after the moisture treatment. Variations of microbial populations in flooded soils under the field condition were similar to those in vivo. Especially, populations of Fusarium and pectolytic bacteria in flooded soils were reduced to 1/100 of populations in nonflooded soils at 170 days after treatment.
인삼뿌리썩음병균(Cylindrocarpon destructans)후막 포자의 형성은 CD(Czapek`s dox broth)와 SNY(Spezieller Nahrtoffarmer yeast extract broth)배지에서 진탕배양(2$0^{\circ}C$, 120 rpm)하면 양호하였다. 특히 CD배지에서 2$0^{\circ}C$로 30일간 진탕배양하면 5.99 log 후막포자/ml로 형성되었다. 후막포자의 발아율은 12.9~23.3%로 CD배지와 SNY배지에서 좋았으며 발아적온은 5~1$0^{\circ}C$였고, 최적 pH는 6이었다. 그러나 2$0^{\circ}C$이상에서는 전혀 발아하지 않았으며 pH 7.0이상에서는 발아율이 급속히 저하되었다. 인삼추출물 3%, GA 10 ppm, IAA 10 ppm, NOVOZYM\ulcorner234 20 ppm을 처리 할 경우 대조구에 비해 발아율이 증가하였다. 특히 NOVOZYM\ulcorner234 20 ppm 처리구는 발아율이 무처리에 비해 2배 증가하였다. CD배지(pH5)에 NOVOZYM\ulcorner234 20 ppm과 GA 10 ppm을 조합처리하고 5$^{\circ}C$로 정치배양 할 때 후막포자의 발아율은 49.4%로 가장 높았다.
인삼 뿌리썩음병균 Cylindrocarpon destructans의 후막포자형태에 대해서 광학현미경 및 전자현미경을 사용하여 조사하였다. 전형적인 C. destructans의 후막포자는 균사로부터 형성되었으나 분생포자에서는 생성되지 않았다. 그러나 pH 4로 조절된 Czapek Dox broth에서 2$0^{\circ}C$, 12일간 배양하였을 때는 소형분생포자가 미성숙한 후막포자 유사세포로 변형되었다. 후막포자는 potato dextrose agar 및 V-8 Juice agar 그리고 질소원이 결제된 Czapek Dox broth배지에서 2$0^{\circ}C$, 16∼20일 배양으로 생성되었고, 생성된 후막포자는 황갈색 혹은 적갈색을 띄었으며 균사의 중간이나 말단 부위에서 한 개 혹은 사슬형태로 존재하였다. 후막포자는 직경이 11.3∼11.9 $\mu\textrm{m}$이었으며 외부에 1.5∼1.8 $\mu\textrm{m}$ 길이의 혹 같은 돌기가 여러 개 형성되어 표면이 울퉁불퉁 하였다.
The soil-borne ascomycete fungus Cylindrocarpon destructans causes ginseng root rot disease and produces various secondary metabolites such as brefeldin A and radicicol. The slow growth of this fungus compared with other plant pathogenic and saprophytic fungi in soil disturbs isolation of this fungus from soil and infected ginseng. In this study, we developed a selective medium for C. destructans using radicicol produced by this fungus. Supplementing 50 mg/L of radicicol to medium inhibited the mycelia growth of other fungi including Botrytis cinerea, Rhizoctonia solani and Alternaria panax, but did not affect the growth of C. destructans. In addition, conidia germination of other fungal species except for C. destructans was inhibited in submerged culture supplemented with radicicol. This medium provides a very efficient tool for isolating C. destructans and also can be used as an enrichment medium for this fungus.
Kang, Yunhee;Kim, Mi Ran;Kim, Ki Hong;Lee, Jungkwan;Lee, Seung-Ho
Mycobiology
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제44권1호
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pp.63-65
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2016
Cylindrocarpon destructans causes root rot disease in ginseng and can survive for a long time, producing chlamydospores. We optimized conditions to induce chlamydospore production from the conidia of C. destructans, isolated from Korean ginseng. This will provide the basis for testing the efficacy of control agents targeting these chlamydospores.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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