Microcystin, stable compounds with circular heptapeptides, is presented inside cyanobacterial cell. So far, over 30 types have been known to exist and microcystin-LR, RR among them are the most potent toxin compound. By this reason, a strong oxidant, ozone was used in this study to remove the microcystins produced by cyanobacteria. Removal efficiency of microcystin at M water treatment plant was also evaluated. Microcystin concentration was determined by protein phosphatase inhibition assay. The results showed that dissolved microcystin in raw water detected in the range of 0.011-0.028 ㎍ Microcystin-RR equivalent/l. Above 98% of microcystin was removed through overall treatment system. Therefore, the water treatability of M treatment plant seemed to be excellent. Removal efficiency of microcystin according to unit process varied as characteristics of raw water such as DOC, UV/sub 254/ and turbidity. Removal efficiency of microcystin by ozonation was investigated in laboratory according to contact time and ozone dose. Dissolved microcystin was increased by twice fold according to ozone contact time, but increased by fifth fold according to ozone dose. So, changing of ozone dose more affected microcystin release than changing of ozone contact time. Behavior of microcystin by ozonation was similar to that of DOC, and residual ozone concentration gave influence to removal ratio of microcystin. In conclusion, single ozone treatment wasn't effective on microcystin removal in case of water containing a lot of cells. Therefore, it's more effective to use ozonation process after the removal of cyanobacterial cells in advance.
Microcystin-LR(MC-LR), a cyanobacterial toxin produced by Microcystis aeruginosa, causes severe hepatotoxicity. Here we investigated the morphologic changes of rat hepatocyte spheroid induced by exposure of MC-LR($10^{-6}M$) in vitro. In addition, to determine the effects of such toxin in the process of hepatocyte spheroid formation, primarily isolated hepatocytes were incubated with MC-LR and the process of spheroid formation was observed. In both hepatocyte spheroid and suspension culture systems, the morphologic changes caused by MC-LR were noticible at 5 min post exposure and were characterized by the loss of microvilli, cytoplasmic vacuolation, the accumulation of lipid droplets, and blob formation. Especially, the size and numbers of blob on the cell surface were increased as the incubation time prolonged and the appearance of electron dense bodies were observed in the cytoplasm of hepatocyte at 20 min post exposure. Furthermore, bile canaliculi-like structures in the hepatocyte spheroids were slightly widened and the process of spheroids formation was inhibited in the isolated hepatocytes incubated with MC-LR. These results indicate that morphologic changes in. the hepatocyte membrane and organelles seem to be typical events in showing the MC-LR induced hepatotoxic effects and the spheroid culture method might be a useful experimental tool to evaluate hepatoxicity since it reflects the in vivo status of hepatocytes.
본 연구는 수도권 지역에 위치한 주요 공원 연못의 연중 식물플랑크톤 변동과 수질을 파악하고자, 공원 연못 7개소를 선정하여 2004년 10월부터 2005년 8월까지 매 2개월 간격으로 수중 내 기초환경 요인 및 식물플랑크톤에 대한 조사를 각각 실시하였다. 조사기간 동안 수온$(0.4\sim26.0^{\circ}C)$을 비롯한 대부분의 환경요인들은 계절성과 지역성이 뚜렷하였다. 식물플랑크톤 총 현존량은 남조류 총 현존량과 매우 밀접한 관계를 보였다(r=0.99). 그러나 식물플랑크톤 총 현존량과 남조류 총 현존량은 다른 여러가지 환경요인들간에 유의한 상관성을 나타내지 않았다. 수도권 주요 공원 연못은 높은 인 농도로 인한 부영양상태가 나타났으며, 계절에 상관없이 남조류가 우점하였다. TN/TP비는 대부분의 연못에서 10 이하이고, 공원 연못에 주로 출현한 남조류는 Anasoena sp., Aphanocapsa elachista, Lyngbya contorta, Merismopedia elegans, Microcystis aeruginosa, M. wesenbergii, Microcystis sp., Oscillatoria sp., Phormidium tenue, Plectonema sp. 등 10종으로 조사되었다. 이들 남조류는 대부분 독성을 나타내는 조류로서, 공원 연못 등에 대한 조류 독소기준 설정 및 지속적인 모니터링이 필요하다고 판단된다.
Different detection characteristics of fluorescence immunochromatography method and high performance liquid chromatography (HPLC) method for the analysis of cyanobacterial toxins were studied. In particular, low and high limits of detection, detection time and reproducibility and detectable microcystin species were compared when fluorescence immunochromatography method and high performance liquid chromatography method were applied for the detection of microcystin (MC), a cyclic peptide toxin of the freshwater cyanobacterium Microcystis aeruginosa. A Fluorescence immunochromatography assay system has the unique advantages of short detection time and low detection limit, and high performance liquid chromatography detection method has the strong advantage of individual quantifications of several species of microcystins.
본 연구에서는 남조류의 독성물질 배출 및 분해양상을 밝히고자 대청댐 지류인 옥천천의 스컴을 채취, 실험대상으로 하였다. Light와 dark 상태로 분리${\cdot}$배양한 배지에는 조사를 하는 동안 다른 영양염류는 첨가하지 않았다. 그 결과 세포내에서 microcystins의 총량은 세포수가 감소함에 따라 감소하였으며 Microcystis aeruginosa의 현존량과 비교하였을 때 light와 dark 상태의 경우 $r^{2}$값이 각각 0.96과 0.97로 높은 상관관계를 보였고 dark 상태에서 보다 더 빠른 감소추세를 보였다. 또한 세포에서 수체로 용존되는 microcystins의 량은 세포내에 존재하는 양의 극히 일부임을 확인 할 수 있었고 세포내에 분포하는 microcystins의 농도는 종류에 따라 차이를 보여 microcystin-RR>-LR>-YR의 순으로 존재하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 옥정호과 제천천을 대상으로 한 수심별 조사에서도 동일한 양상을 보였다. 수체에서 검출된 microcystins의 양은 점성물질의 양과 함께 light와 dark 상태에 따라 뚜렷한 차이를 보였으며 light의 경우 $r^{2}$값이 -0.75의 역의 상관관계를 보였다. 남조류 세포 및 microcystins에 대한 light와 dark 상태에서의 서로 다른 농도 결과는 배양 상태에 따른 미생물의 분해양상의 차이와 미생물에 대한 점성물질의 영향으로 추정된다.
This study was purposed to develop an effective LC/MS/MS method for simultaneously determining five pre-treated cyanotoxins (anatoxin-a, microcystins-RR, -YR, -LR and -LA) of cyanobacteria blooms. Cyanobacterial bloom samples were collected from 11 major lakes and three downstream areas of river around Korea during 2005~2009. Cyanotoxins were identified in 38 samples from the lakes. The validity of the method was evaluated and the recovery rates were found ranging from 83~87%. The MDL turned out to be $0.046\;{\mu}g\;L^{-1}$ for anatoxin-a and $0.066\;{\mu}g\;L^{-1}$ for microcystins (RR, YR, LR and LA), which indicates that the method has high sensitivity and accuracy. The most dominant genus of the cyanobacterial blooms was Microcystis, which accounted for 71% of the analysed samples. Microcystis also contained the largest amount of microcystins ($398.5\;{\mu}g\;gDW^{-1}$) among the analyzed cyanobacteria. The analysis of the five cyanotoxins showed that anatoxin-a ranged between $0{\sim}41.833\;{\mu}g\;gDW^{-1}$ and microcystins ranged between $6.311{\sim}2,148.786\;{\mu}g\;gDW^{-1}$. Among the microcystins, micocystin-RR took up 58.3%, the largest portion. Anatoxin-a was found to account for 77.8% of the samples. This study has its significance in that it allowed the establishment of toxin criteria appropriate for the Korean water systems. Further studies may be necessary to conduct for improving water treatment methods.
방류수내 남조류 세포의 밀포와 종조성 및 독소의 계절별, 일일 변화를 일본 중심에 위치하고 있는 Suwa호의 수문에서 1998년 5월부터 10월까지 조사하였다. Microcystis의 높은 세포밀도가 M. ichthyoblabe가 우점했던 7월과 M. viridis가 우점종으로 나타난 9월에 관찰되었다. Microcystis의 종조성과 총 세포밀도는 3종류의 microcystin의 정성${\cdot}$정량적인 변화와 관련이 있었다. M. ichthyoblabe가 우점했던 7월 동안에는 MC-RR과MC-LR만이 검출되었으나 M. aeruginosa의 개체수 증가와 함께 M. viridis가 우점종으로 나타난 8월부터 10월까지는 MC-YR을 포함한 3종류의 microcystin 모두 검출되었다. 방류수내 Microcystis의 세포밀포와 microcystin의 함량의 일 변화는 바람의 일 변화에 큰 영향을 받았다. 아침에 비해 오후에 바람이 강하게 부는 풍속주기의 조건에서 Microcystis의 세포밀도와 독소의 함량은 아침에 증가하고 오후에 감소하는 경향을 나타냈다. 본 연구의 결과들은 수문이나 취수탑에서 방류시기의 조절은 부영양 호수에서 물을 취수하여 이용함에 있어 원수내 조류의 생물량을 저감할 수 있는 유효한 방법임을 제시한다.
잡식성 어류 붕어(Carassius auratus)의 섭식활동에 퇴적물과 독성남조 Microcystis aeruginosa의 영향을 파악하기 위하여 실내 및 현장 mesocosm실험을 실시하고 어류에 의한 식물플랑크톤과 수질변화를 각각 조사하였다. 퇴적물 실험은 실내 수조(7 L)에서 남조발생 저수지(일감호, 서울)의 현장수와 퇴적물을 이용하였고, 독성남조 실험은 독성(NIES-298) 및 비독성(NIES-101) 남조 M. aeruginosa를 이용하였다. 현장 mesocosm실험은 남조 발생이 극심하였던 2005년 7월에 저수지 연안에 총 9개 mesocosm를 설치하고 어류를 밀도별 처리한 다음 식물플랑크톤 밀도와 수질변화를 조사하였다. 모든 실험은 3회씩 반복으로 실시하였다. 실험결과, 퇴적물이 없는 수조에서는 Chl-a의 감소를 보였으나 퇴적물 수조에서는 오히려 Chl-a의 증가를 보였으며, 독성에 상관없이 뚜렷한 M. aeruginosa 제어능을 나타냈다. 현장 mesocosm 실험에서는 비교적 세포크기가 큰 macrophytoplankton (>$50{\mu}m$)를 선호한 반면 나머지 플랑크톤(<$2{\mu}m,\;2{\sim}20{\mu}m,\;20{\sim}50{\mu}m$)은 오히려 성장을 촉진하였다. 영양염은 조류밀도가 높은 조건에서 어류 도입 이후 암모니아의 급격한 증가를 보였다. 따라서 잡식성 어류인 붕어는 남조독성에 상관없이 도입초기 일시적으로 조류제어능을 보이지만 퇴적물 교란 및 영양염 배출로 인하여 현장 조건보다 퇴적물이 적은 정수장이나 생물관리가 가능한 조건에서 제한적으로 적용하는 것이 타당할 것으로 판단되었다.
The effective removal of microcystins by chlorination was investigated on a laboratory scale. With an initial chl.a concentration of more than 1,000 $\mu\textrm{g}$/ℓ, the required chlorine dose for the effective removal of microcystins from the raw water was more than 8.0 mg/ℓ. Whereas, a chlorine dose of 3.0 mg/ℓcould effectively remove microcystins from raw water containing a chl.a concentration of less than 1,000 $\mu\textrm{g}$/ℓ. The microcystin removal was more effective below pH 8.0, plus the optimum pH range was unrelated to the concentration of toxic algal material. Although chlorination is one of the most effective methods for reducing the toxin from blue-green algae, it causes cell lysis and toxin release. However, it was demonstrated that the released cell lysates and toxins could be effectively removed by a higher dose of the oxidant. The highest removal efficiency of dissolved microcystins(initial concentration: 280 $\mu\textrm{g}$ L$\^$-1/) was with a chlorine dose of 5.0 mg/ℓ.
For the detection of cyanobacterial toxin, an Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was integrated into a PDMS microchip. The conjugates of microcystin-LR (MCLR) and keyhole limpet hemocyanin (KLH) were adsorbed on the surface of polystyrene beads and these MCLR-KLH polystyrene beads were introduced into a microchamber. MCLR on the surface of polystyrene beads reacted with horseradish peroxides (HRP) conjugated anti-MCLR monoclonal antibody (mAb) which had a competitive reaction with MCLR in water sample. After the enzyme substrate 3,3,5,5-tetramethyl benzidine (TMB) was injected into the chamber and catalyzed by HRP, the color change was detected with a liquid-cord waveguide. This integration shortened the conventional ELISA analysis time from several hours to about 30 min with only 4.2 $\mu$L MCLR sample consuming which was useful for the environmental analysis. More over, troublesome operations required for ELISA could be replaced by simple operations. The microchip based detection system showed a good sensitivity of 0.05 $\mu$g/L and maintained good reliability through its quantitative range with low coefficients of variation (2.5-10.5%).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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