Kim, Suyoung;Park, Sook-Young;Kim, Hyejeong;Kim, Dongyoung;Lee, Seon-Woo;Kim, Heung Tae;Lee, Jong-Hwan;Choi, Woobong
The Plant Pathology Journal
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제30권4호
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pp.375-383
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2014
Fungi tolerate exposure to various abiotic stresses, including cytotoxic compounds and fungicides, via their ATP-driven efflux pumps belonging to ATP-binding cassette (ABC) transporters. To clarify the molecular basis of interaction between the fungus and various abiotic stresses including fungicides, we constructed a cDNA library from germinated conidia of Colletotrichum acutatum, a major anthracnose pathogen of pepper (Capsicum annum L.). Over 1,000 cDNA clones were sequenced, of which single clone exhibited significant nucleotide sequence homology to ABC transporter genes. We isolated three fosmid clones containing the C. acutatum ABC1 (CaABC1) gene in full-length from genomic DNA library screening. The CaABC1 gene consists of 4,059 bp transcript, predicting a 1,353-aa protein. The gene contains the typical ABC signature and Walker A and B motifs. The 5'-flanking region contains a CAAT motif, a TATA box, and a Kozak region. Phylogenetic and structural analysis suggested that the CaABC1 is a typical ABC transporter gene highly conserved in various fungal species, as well as in Chromista, Metazoans, and Viridiplantae. We also found that CaABC1 was up-regulated during conidiation and a minimal medium condition. Moreover, CaABC1 was induced in iprobenfos, kresoxim-methyl, thiophanate-methyl, and hygromycin B. These results demonstrate that CaABC1 is necessary for conidiation, abiotic stress, and various fungicide resistances. These results will provide the basis for further study on the function of ABC transporter genes in C. acutatum.
고추포장의 토양에서 분리한 Bacillus sp. NAAS-1 Colletotrichum acutatum에 대한 생물학적 방제 활성을 검정 하였다 이 분리균주를 일종의 작물보호제인 카밴다짐 가스가마이신 수화제와 비교하여 검정한 결과, 기준사용량 농도(50 ${\mu}L/mL$)와 비슷한 항진균 활성을 나타냈다. 또한 생물 검정 결과, 공시 작물보호제의 기준사용량 농도(50 ${\mu}L/mL$)에서 보다 고추 탄저병균의 발병억제효과가 높게 나타나내었다.
포도나무 잎의 메탄올 추출물을 n-hexane, ethylacetate, n-butanol $H_2O$으로 순차적으로 용매분획 하였다. Ethylacetate 분획으로부터 silica gel chromatography와 재결정하여 활성물질을 분리 정제하였다. 이 화합물의 화학구조를 EI-MS의 조각 데이터를 근거로 분석한 결과 betulin으로 구조결정 되었다. 이 화합물이 고추 역병균(Phytophthora capsici), 고추 탄저병균(Colletotrichum acutatum)에 대한 항균활성(in vitro)을 측정한 결과, 100 ${\mu}g\;mL^{-1}$에서 각각 52.1%, 40.8%의 균사생육 억제효과를 보였으나, 잔디 마름병(Rhizoctonia solani) 균의 균사생육 억제 효과는 나타나지 않았다.
다양한 작물로부터 분리한 4종의 탄저병균, C. gloeosporioided, C. acutatum, C. coccodes 및 C. dematium 등의 균주들에 대하여 여러 가지 살균제, 즉 carbendazim, carbendazim과 diethofencarb와의 혼합제, 4개의 보호용 살균제 및 3개의 ergosterol 생합성 저해(EBI) 살균제 등에 대한 약제 반응을 조사하였다. Benzimidazole계에 속하는 carbendazim에 대해서 4종의 Colletotrichum의 반응은, C. acutatum은 사용한 6개의 균주 모두 $EC_{50}$값은 $0.001{\sim}3.04{\mu}g/ml$ 사이에 있었으며, 모든 균주의 MIC 값은 $100{\mu}g/ml$ 이상이었다 고추와 사과, 딸기에서 분리한 C. gloeosporioides는 carbendazim에 대해서 저항성과 감수성 반응이 뚜렷하게 구별되었는데, 고추의 두 균주는 $EC_{50}$값은 0.24와 $0.01{\mu}g/ml$이었으며 MIC 값 역시 $1.0{\mu}g/ml$ 이었다. 이러한 반응은 사과와 딸기에서 분리한 균주 중에서 감수성 반응을 보이는 균주인 B13과 138, 그리고 CGF89와 94, 252에서도 비슷한 경향을 보였다. 그러나 저항성 균주로 판명된 B90, 92, 147과 CGF50, 54, 222는 $EC_{50}$값과 MIC 값 모두가 $100{\mu}g/ml$를 상회하였다. C. gloeosporioides는 carbendazim과 역상관 교차 저항성을 보이는 diethofencarb와 carbendazim의 혼합제에 대해서는 모두 $1{\sim}100{\mu}g/ml$의 MIC값을 보였지만, C. acutatum은 $100{\mu}g/ml$이상의 MIC값을 보였다. Carbandazim에 대하여 C. coccodes는 C. acutatum과 그리고 C. dematium는 C. gloeosporioides의 감수성 균주들의 반응과 유사한 반응을 보였다. 4종의 보호용 살균제에 대해서는 C. acutatum은 C. gloeosporioides보다도 높은 저항성인 반응을 보였다. 그러나 ergosterol 생합성 저해 살균제에 대해서는 4종의 탄저병균이 일정한 경향을 보였다.
Thirty-six isolates of Colletotrichum spp. were obtained from infected grapes in two different locations of Korea; 18 isolates from Cheonahn, where carbendazim (MBC) and the mixture of MBC and diethofencarb (NPC) had been applied to control grape ripe rot, and 18 isolates from Cheongju, where no fungicides had been used. Sequences analysis of the internal transcribed spacer (ITS) and the $\beta$-tubulin gene identified 34 of the 36 isolates as Colletotrichum gloeosporioides. The remaining two isolates from Cheongju were identified as C. acutatum. Of the 18 isolates from Cheonahn, 12 were resistant to both MBC and the mixture (MBC+NPC), and six were sensitive to them. All C. gloeosporioides isolates from Cheongju, but not the two C. acutatum isolates, were sensitive to these fungicides. Sequence analysis of the $\beta$-tubulin gene in all isolates revealed that C. gloeosporioides resistant to MBC and MBC+NPC had a tyrosine instead of phenylalanine at the amino acid position 200. The appearance of resistance to MBC and the mixture in C. gloeosporioides correlated with the history of fungicide application in Korea.
Kim, Joon-Tae;Park, Soo-Kyoung;Park, Woobong;Lee, Yong-Hwan;Kim, Heung-Tae
한국식물병리학회:학술대회논문집
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한국식물병리학회 2003년도 정기총회 및 추계학술발표회
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pp.125.1-125
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2003
Pepper anthracnose is one of the major limiting factors in pepper production. Boring last over 10 years, Colletotrichum gloeosporioides has been known as the most prevalent species among five Colletotrichum spp. involved as anthracnose causing agents. Recently, however, the change of major species with pepper anthracnose has been proposed. Identification study was peformed on 12 test isolates collected from anthracnose disease symptoms on pepper during 2001-2002 and 25 reference isolates obtained from several other host plants. The identification of the isolates with morphological observation and IfS region sequence comparison resulted that 11 ones from 12 test isolates colleted from pepper anthracnose during 2001-2002 were identified as C. acutatum. PCR using species-specific primers designed from ITS region sequence suggested a rapid diagnosis method in identifying C. acutatum from C. gloeosporioides.
To examine the relationship between plant hormones and the development of pepper anthracnose, we investigated the effects of several plant hormones on the progression of disease symptoms. Of the five plant hormones examined, abscisic acid (ABA) increased the lesion length and disease incidence on detached fruits of Capsicum annuum cv. Nokkwang. The simultaneous application of ABA with inoculation of Colletotrichum acutatum JC24 resulted in increased lesion length, depending the concentration of ABA applied. Additionally, application of ABA caused the development of pepper anthracnose in fruits of Capsicum baccatum cvs. PBC80 and PBC81, which were previously resistant to the disease. Furthermore, ABA administration rendered increased pathogenicity of other isolates of C. acutatum BAC02063, PECH10, and TCBNU3 obtained from the Chinese matrimony vine, peach, and tea tree, respectively. Our data suggest that exogenous ABA may result in the suppression of defense mechanisms of pepper fruits against anthracnose, which leads to a change in the susceptibility of pepper fruits and the development of pepper anthracnose.
Antifungal activity of Korean and Chinese lichen-forming fungi (LFF) was evaluated against plant pathogenic fungus of Colletotrichum acutatum, causal agent of anthracnose on hot pepper. This is the first attempt to evaluate antifungal activity of LFF, instead of lichen thalli, against C. acutatum. Total 100 LFF were isolated from the lichens with discharged spore method or tissue culture method. Among the 100 isolates, 8 LFF showed more than 50% of inhibition rates of mycelial growth of the target pathogen. Especially, Lecanora argentata was highly effective in inhibition of mycelial growth of C. accutatum at the rate of 68%. Antifungal activity of other LFF was in the order of Cetrelia japonica (61.4%), Ramalina conduplicans (59.5%), Umbilicaria esculenta (59.5%), Ramalina litoralis (56.7%), Cetrelia braunsiana (56.5%), Nephromopsis pallescensn (56.1%), and Parmelia simplicior (53.8%). Among the tested LFF, 61 isolates of LFF exhibited moderate antifungal activity against the target pathogen at the inhibition rates from 30 to 50%. Antifungal activity of the LFF against C. acutatum was variable at the species level rather than genus level of LFF. This study suggests that LFF can be served as a promising bioresource to develop novel biofungicides.
고추 종자에서 Colletotrichum acutatum, C. coccodes, C.dematium 및 C. gloeosporioides 등 4종의 탄저병균(炭疽病菌)이 검출(檢出)되었다. 그중 C.dematium과 C.gloeosporioides가 높은 비율(比率)로 검출(檢出)되었으며, 감염율(感染率)이 높은 종자시료(種子試料)는 각각(各各) 최고 84% 및 28%의 감염율(感染率)을 나타내었다. 반면에 C.acutatum과 C.coccodes는 각각 1개의 종자 시료(試料)에서 1% 및 2%의 낮은 비율(比率)로 검출(檢出)되었다. 표준습지법(標準濕紙法)이 냉동습지법(冷凍濕紙法)이나 한천배지배양법(培地培養法)에 비하여 종자상의 탄저병균(炭疽病菌) 검출(檢出)에 효과적(效果的)이었다. C.dematium과 C. gloeosporioides의 종자내 감염부위(感染部位)를 조사(調査)하였던 바, 종피(種皮)뿐 아니라 종자내 깊숙이 배유(胚乳)와 자엽(子葉)에 까지 감염(感染)되어 있음이 확인되었으나 종피(種皮) 감염율(感染率)이 높았다. C.dematium과 C.gloeosporioides 감염종자(感染種子)를 한천배지와 살균토양에 옮겨 발아율과 유묘생육상황(幼苗生育狀況)을 조사한 결과, 감염종자(感染種子)는 종자부패(種子腐敗), 모잘록, 유묘고사(幼苗枯死) 및 자엽(子葉)과 하배축(下胚軸)의 변색(變色)을 초래하였다. 접종실험(接種實驗) 결과 C.acutatum은 고추의 적과(赤果)에 병원성(病原性)이 있었고 C.coccodes는 고추 적과(赤果)에 강한 병원성(病原性)이, 고추 잎에 약한 병원성(病原性)이 있었다. C.dematium은 고추 잎과 청과(靑果)에 강한 병원성(病原性)이 있었고, C.gloeosporioides 는 고추 잎과 청과(靑果) 및 적과(赤果)에 병원성이 있었다. 이들 4종의 종자전염성(種子傳染性) 탄저병균(炭疽病菌)의 고추 이외의 다른 작물(作物)에 대한 병원성도 조사하였다.
농업유전자원센터에 보존하고 있는 896점의 고추(C. annuum 430점, C. baccatum 219점, C. chacoense 14점, C. frutescens 70점, C. pubescens 2점, 미동정 8점)에 C. acutatum을 접종 후 $28^{\circ}C$에서 14일간 배양 후 탄저병 발병 정도를 평가하였다. 무상처 분무 접종에서 총 49점이 C. acutatum에 저항성을 나타내었으며, 그 중 9점은 고도의 저항성을 나타내었다. 고도의 저항성을 나타내는 자원들은 C. baccatum 4점, C. chacoense 1점, C. frutescens 4점이었다. 무상처 분무 접종에서 탄저병 저항성을 나타내는 자원 중 42점을 상처 접종법으로 탄저병균을 접종하였다. 그 중 5점은 접종 5일 후에도 병반의 크기가 3%미만으로 나타나 저항성을 나타내었으며, 이들은 모두 C. baccatum이었다. 저항성을 보이는 5점은 탄저병 저항성 육성을 위한 자원으로 이용가능 할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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