Background: Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are key components of the tumor microenvironment and significantly contribute to immune evasion. We investigated the effects of CAFs on the immune function of CD4+ and CD8+ T cells in non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods: We isolated CAFs and normal fibroblasts (NFs) from tumors and normal lung tissues of NSCLC patients, respectively. CAFs were co-cultured with activated T cells to evaluate their immune regulatory function. We investigated the effect of CAF conditioned medium (CAF-CM) on the cytotoxicity of T cells. CAFs were also co-cultured with activated peripheral blood mononuclear cells and further incubated with cyclooxygenase-2 (COX2) inhibitors to investigate the potential role of COX2 in immune evasion. Results: CAFs and NFs were isolated from the lung tissues (n=8) and lymph nodes (n=3) of NSCLC patients. Immune suppressive markers, such as COX2 and programmed death-ligand 1 (PD-L1), were increased in CAFs after co-culture with activated T cells. Interestingly, CAFs promoted the expression of programmed death-1 in CD4+ and CD8+ T cells, and strongly inhibited T cell proliferation in allogenic and autologous pairs of CAFs and T cells. CAF-CM decreased the cytotoxicity of T cells. COX2 inhibitors partially restored the proliferation of CD4+ and CD8+ T cells, and downregulated the expression of COX2, prostaglandin E synthase, prostaglandin E2, and PD-L1 in CAFs. Conclusion: CAFs promote immune evasion by suppressing the function of CD4+ and CD8+ T cells via their effects on COX2 and PD-L1 in NSCLC. The immunosuppressive function of CAFs could be alleviated by COX2 inhibitors.
본 연구에서는 도라지 추출물에 대한 세포 독성을 확인하였으며, $A{\beta}$에 의한 PC12 세포 독성에 대한 보호효과를 관찰하였다. 또한 도라지 추출물과 도라지 추출물 연양갱을 4주간 강제 경구 투여하여 Morris 수중미로시험에서 도달지점까지의 도달시간이 도라지 추출물 및 도라지 추출물 연양갱 투여에 의해서 모두에서 유의하게 감소하였다. 이와 유사하게 수동회피시험에서도 자극이 있는 어두운 방을 나오는 시간이 도라지 추출물 및 도라지 추출물 연양갱 투여에 의해서 현저하게 감소하였다. 따라서 도라지 추출물 및 도라지 추출물 연양갱은 인지능 개선에 도움을 줄 것으로 생각된다.
본 연구는 고온 스트레스 하에 타우린 첨가가 육계의 간에서 heat shock protein 70(hsp 70) 및 cell free system 상태에서 단백질 합성에 미치는 영향을 조사하였다. 공시동물은 1일령 육계 120수를 2주간 사육 후, 대조(CO, $24^{\circ}C$)와 고온스트레스 처리($34^{\circ}C$)에서 타우린을 공급하지 않은 처리구(HO)와 타우린 0.1%를 공급한 처리구(HT)로 나누어 3처리 4반복, 반복 당 10수씩 배치하였다. 고온 스트레스는 3, 6, 9, 12일간 진행하였다. 최종 체중과 간 무게는 HO와 HT가 CO보다 유의적으로 낮았다(P<0.05). 그러나 타우린을 첨가한 HT은 HO보다 유의적으로 높았다(P<0.05). 육계 간에서 hsp70 발현은 HO가 CO와 HT보다 유의적으로 높았으나(P<0.05), CO와 HT는 유의적인 차이가 없었다. In vitro 실험에서 고온 및 타우린은 21일령 육계 간의 총 단백질 합성률에 영향을 미치지 않았다. 따라서 타우린 섭취가 in vivo 육계의 성장에서 고온 스트레스를 완화시키지만, 생체 내의 단백질 합성에 직접적인 영향을 미치지 않는 것을 보이며, 이러한 결과는 타우린이 다양한 생리학적 기전을 통해 단백질 turnover 대사에 간접적으로 영향을 미칠 수 있다는 것으로 사료된다.
강원도(江原道) 지역(地域)의 답토양(畓土壤)이 널리 분포(分布)되어 있는 석회암지대(石灰岩地帶), 하성충적충지대(河成沖積層地帶), 현무암지대(玄武岩地帶) 토양(土壤)을 대상(對象)으로 하여 석회요구량(石灰要求量) 결정방법(決定方法)간의 차이(差異)를 실험적(實驗的)으로 비교(比較), 검토(檢討)하였던 바 그 결과(結果)를 요약(要約)하면 다음과 같다. 1. 석회요구량(石灰要求量)을 결정(決定)하는 7가지 방법(方法)($CaCO_3$ incubation method, $BaCl_2$-TEA method, SMP-single buffer method, Double buffer method, Adams and Evans method, SMP-double buffer method, O. R. D. method)을 비교(比較)한 결과(結果) 방법(方法)간에 큰 차이(差異)가 있었다. 2. $CaCO_3$ incubation method를 기준(基準)으로 할 때 석회요구량(石灰要求量)은 $BaCl_2-TEA$ method가 가장 높았고, O.R.D. method 가 가장 적었으며, SMP-double buffer method가 강원도(江原道) 토양(土壤)에 비교적(比較的) 적합(適合)할 것으로 평가(評價)되었다. 3. 치환성(置換性) Al 함량(含量)의 100% 당량(當量)에 해당(該當)하는 $CaCO_3$를 가(加)하고 incubation한 경우 약(約) 70%의 중화율(中和率)을 나타냈다. 4. 활성(活性) Al 함량(含量)의 100% 당량(當量)에 해당(該當)하는 $CaCO_3$를 가(加)하고 incubation한 경우에는 약(約) 30%의 중화율(中和率)을 나타냈다. 5. 치환성(置換性) Al 및 활성(活性) Al 함량(含量)을 기준(基準)으로 한 석회요구량(石灰要求量)은 $CaCO_3$ incubation method에 비(比)해 적은 값을 나타냈다.
Choi, S.H.;Park, S.K.;Johnson, B.J.;Chung, K.Y.;Choi, C.W.;Kim, K. H.;Kim, W.Y.;Smith, S.B.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제28권3호
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pp.411-419
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2015
We previously demonstrated that bovine subcutaneous preadipocytes promote adipogenic gene expression in muscle satellite cells in a co-culture system. Herein we hypothesize that saturated fatty acids would promote adipogenic/lipogenic gene expression, whereas mono- and polyunsaturated fatty acids would have the opposite effect. Bovine semimembranosus satellite cells (BSC) and intramuscular preadipocytes (IPA) were isolated from crossbred steers and cultured with 10% fetal bovine serum (FBS)/Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) and 1% antibiotics during the 3-d proliferation period. After proliferation, cells were treated for 3 d with 3% horse serum/DMEM (BSC) or 5% FBS/DMEM (IPA) with antibiotics. Media also contained $10{\mu}g/mL$ insulin and $10{\mu}g/mL$ pioglitazone. Subsequently, differentiating BSC and IPA were cultured in their respective media with $40{\mu}M$ palmitic, stearic, oleic, or linoleic acid for 4 d. Finally, BSC and IPA were single- or co-cultured for an additional 2 h. All fatty acid treatments increased (p = 0.001) carnitine palmitoyltransferase-1 beta ($CPT1{\beta}$) gene expression, but the increase in $CPT1{\beta}$ gene expression was especially pronounced in IPA incubated with palmitic and stearic acid (6- to 17-fold increases). Oleic and linoleic acid decreased (p = 0.001) stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression over 80% in both BSC and IPA. Conversely, palmitic and stearic acid increased SCD gene expression three fold in co-cultured in IPA, and stearic acid increased $AMPK{\alpha}$ gene expression in single- and co-cultured BSC and IPA. Consistent with our hypothesis, saturated fatty acids, especially stearic acid, promoted adipogenic and lipogenic gene expression, whereas unsaturated fatty acids decreased expression of those genes associated with fatty acid metabolism.
Kim, Bae-Chul;Han, Rong-Xun;Kim, Myung-Yoon;Shin, Young-Min;Park, Chang-Sik;Jin, Dong-Il
Reproductive and Developmental Biology
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제33권2호
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pp.107-111
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2009
The transfection efficiency of a transgene into pig and goat fetal fibroblast cells (PFF and GFF, respectively) was tested using co-transfection of a human tissue-type plasminogen activator (tPA) transgene and neomycin-resistant ($Neo^r$) gene, followed by G418 selection. To initially test G418 resistance, GFF and PFF were incubated in culture medium containing different concentration of G418 for 2 weeks, and cell survival was monitored over time. Based on the obtained results, the concentrations chosen for G418 selection were 800 ug/ml and 200 ug/ml for GFF and PFF, respectively. For co-transfection experiments, the pBC1/tPA and $Neo^r$ vectors were co-transfected into GFF and PFF ($1{\times}10^6$ cells in each case) using the FuGENE6 transfection reagent, and resistant colonies were obtained following 14 days of G418 selection. We obtained 96 and 93 drug-resistant colonies of GFF and PFF, respectively, only 54 and 39 of which, respectively, continued proliferating after drug selection. PCR-based screening revealed that 23 out of 54 analyzed GFF colonies and 5 out of 39 analyzed PFF colonies contained insertion of the tPA gene. Thus, the experimentally determined transfection efficiencies for tPA gene co-transfection with the $Neo^r$ gene were 42.6% for GFF and 12.8% for PFF. These findings suggest that co-transfection of a transgene with the $Neo^r$ gene can aid in the successful integration of the transgene into fetal fibroblast cells.
바이오필름은 부유 미생물이 피부 표면에 부착되어 형성된 미생물 집락이며 형질적 생화학적 특성에서 부유상태와는 차이가 있다. 바이오필름으로 증식하는 미생물은 부유 상태의 미생물 보다 숙주의 방어나 항생제에 대한 저항성이 훨씬 높기 때문에 바이오필름이 형성되면 감염 상태를 치료하기 위해 더욱 많은 항생제를 사용해야 한다. 따라서 감염된 세균의 내성을 피하면서 치료를 하기 위해서는 단순히 세균을 사멸하는 것이 아니라 표적을 달리하는 새로운 전략이 필요하다. 이번 연구에서는 아토피 등 염증성 피부 질환의 원인균의 S. aureus의 바이오필름을 억제하는 기작에 초점을 맞추어 연구를 진행하였다. 이 연구의 목적은 S. aureus의 바이오필름의 형성을 억제하여 피부질환을 조절할수 있는 후보 물질을 찾는 데에 있다. 슬라이드글라스를 human placental 콜라겐으로 코팅고 시험 물질과 함께 배양하여 억제된 바이오필름의 양을 crystal violet 염색법으로 측정하여 정량적으로 측정하였다. 이 실험에서는 표준균인 S. aureus ATCC 6538 strain이 사용되었다. 실험 결과 편백다당체가 바이오필름의 형성을 강하게 억제하였으며 녹차다당체와 황촉규근은 오히려 바이오필름의 형성을 촉진하였다. 자일리톨은 1 %의 낮은 농도에서는 바이오필름을 촉진하나 그 이상의 높은 농도인 3 %와 5 %에서는 억제하여 농도 의존적인 결과를 보였다.
당뇨망막병증은 서구에서 성인들의 실명을 일으키는 원인이다. 당뇨병이 있을 때 고혈당증은 여러 세포 형태에서 세포자연사를 유도하지만 그 기작은 명확하게 밝혀지지 않았다. 본 연구의 목적은 인간망막 내피세포에서 고혈당 포도당이 세포자연사에 미치는 영향에 대하여 알아보았다. 망막 내피세포는 5, 25, 50 mM 포도당이 포함된 IMDM배지에서 37$^{\circ}C$, 5% CO$_2$조정된 항온기에서 24, 36, 48시간 동안 배양하였다. 여러 농도의 포도당을 처리한 인간망막 내피세포 형태의 특징은 위상차현미경으로 관찰하였고, 세포의 생존은 MTT assay를 통해 산정하였다. 고농도 포도당에서 활성산소종인 세포 내의 H$_2$O$_2$는 FOX II assay와 caspase-3 assay에 의한 세포자연사를 통해 측정하였다. 고농도의 포도당을 처리한 세포에서의 DNA분절화는 아가펄스 겔 전기영동을 통해 관찰하였다. 25, 50mM 포도당을 포함한 배양액에 48시간 동안 배양한 세포는 형태가 변하고. 세포자연사에 의해 유도된 DNA 분절화를 관찰 할 수 있었다. 25, 50 mM의 포도당에서 배양한 세포와 5 mM 포도당에서 24, 36, 48 시간 배양한 세포와 비교했을 때 25, 50 mM에서 죽은 세포의 수가 더 많았다. 또한 과산화수소의 양과 caspase-3의 활성은 고농도 포도당을 처리한 세포에서 증가하였다. 결론적으로 고농도 포도당이 배양된 인간망막 내피세포에서 세포자연사를 유도하는 것을 증명하였고, 고혈당증의 유도로 caspase 활성에 의존적인 세포자연사는 증가하였다. 고농도의 포도당이 처리된 세포에서 활성산소종 유발과 caspase-3 활성간의 관계는 아직 조사되지않았다.
Objectives : The purpose of this study was to investigate the anti-atherosclerotic effects of 4 herbal formulas for Sasang constitutional medicine (Yeoldahanso-tang: YDHST, Yanggyeoksanhwa-tang: YGSHT, Cheongsimyeonja-tang: CSYJT and Taeeumjowi-tang: TEJWT). Methods : The antioxidant activities of herbal formulas were studied by measuring free radical scavenging activities on ABTS and DPPH. The inhibitory effects on LDL oxidation was evaluated by the formation of TBARS, REM and fragmentation of apolipoprotein B-100 (ApoB). Effects of herbal formulas on macrophage lipid accumulation were determined in native LDL and LPS co-incubated macrophages using Oil Red O staining. Results : The scavenging activities on ABTS and DPPH of herbal formulas were increased in dose-dependent manner (YDHST>YGSHT>CSYJT>TEJWT). Herbal formulas reduced the oxidation properties of LDL induced by $CuSO_4$. YDHST, YGSHT and CSYJT showed strong suppressive effect on LDL oxidation than TEJWT. In addition, YDHST, YGSHT and CSYJT significantly inhibited foam cell formation in LDL/LPS stimulated RAW 264.7 cells. Conclusions : These results demonstrate that YDHST, YGSHT and CSYJT have potentials on anti-atherosclerosis by antioxidative effect and suppressive effect on LDL oxidation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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