Opisthorchis viverrini and Clonorchis sinensis are parasites known to be carcinogenic and causative agents of cholangiocarcinoma in Asia. The standard method for diagnosis for those parasite infections is stool examination to detect parasite eggs. However, the method has low sensitivity, and eggs of O. viverrini and C. sinensis are difficult to distinguish from each other and from those of some other trematodes. Here, we report a multiplex real-time PCR coupled with high resolution melting (HRM) analysis for the differentiation of O. viverrini and C. sinensis eggs in fecal samples. Using 2 pairs of species-specific primers, DNA sequences from a portion of the mitochondrial NADH dehydrogenase subunit 2 (nad 2) gene, were amplified to generate 209 and 165 bp products for O. viverrini and C. sinensis, respectively. The distinct characteristics of HRM patterns were analyzed, and the melting temperatures peaked at $82.4{\pm}0.09^{\circ}C$ and $85.9{\pm}0.08^{\circ}C$ for O. viverrini and C. sinensis, respectively. This technique was able to detect as few as 1 egg of O. viverrini and 2 eggs of C. sinensis in a 150 mg fecal sample, which is equivalent to 7 and 14 eggs per gram of feces, respectively. The method is species-specific, rapid, simple, and does not require fluorescent probes or post-PCR processing for discrimination of eggs of the 2 species. It offers a new tool for differentiation and detection of Asian liver fluke infections in stool specimens.
Objectives : To investigate the prevalence of Clonorchis Sinensis infestation and to determine the associated risk factors among a population in a part of the rural area of Gyeongsangnam-do, Korea, which is an area known to have a high mortality from liver cancer and a high infection of C. sinensis. Methods : The study populat ion consisted of those people who have lived in rural areas and who were over 40 years old. This study was performed in 5 areas during the period from 1999 to 200 3. Informed consents were obtained from the 2,381 study participants, and these people were interviewed about their life style habits with using the structured questionnaire that was administered by trained staff members. The subjects underwent blood sampling and their stool specimens were examined by using the Formalin-ether sedimentation technique. Results : Among the study subjects (N=2,381), the positivity for C. sinensis in the stool was 34.4% (95% CI=36.3-42.5); it was 39.4% (95% CI=36.3-42.5) in the males and 30.9% (95% CI=28.5-33.3) in the females . The positivity for C. sinensis was associated with current alcohol drinking (odds ratio=1.8, 95% CI: 1.5-2.1) and raw fish consumption (odds ratio 1.2, 95% CI: 0.9-1.6). Conclusion : The present study confirmed the high prevalence of C. sinensis in the study subjects. It is necessary to establish consistent medical management and education programs for the treatment and prevention of C. sinensis infestation in the rural inhabitants of Korea.
간흡충 탈낭유충에 대한 잉어, 붕어, 참붕어의 보체 살충능 및 식세포 chemiluminescent 반응 차이를 조사하였다. 낙동강에서 채집한 참붕어는 모두 간흡충 피낭유충에 중감염되어 있었으나, 진영의 저수지에서 채집한 참붕어 및 낙동강에서 채집한 붕어와 양식 잉어에서는 간흡충 피낭유충이 전혀 검출되지 않았다. 각 실험어의 신선혈청을 이용하여 간흡충 탈낭유충에 대한 살충능을 조사한 결과 간흡충 피낭유충에 중감염된 참붕어 혈청과 붕어의 혈청은 잉어의 혈청에 비해 높은 살충능을 나타낸 반면, 간흡충 피낭유충에 감염되지 않은 참붕어의 혈청은 가장 낮은 살충능을 나타냈다. 각 어종의 혈청을 $47^{\circ}C$에서 30분간 처리하여 보체를 불활화시킨 결과 모든 실험어종에서 혈청의 살충능이 완전히 사라졌다. 간흡충 탈낭유충 균질액의 상층액을 각 어종의 두신 식세포에 첨가하여 chemiluminescent(CL) 반응을 측정한 결과 참붕어와 잉어에서 CL반응이 zymosan만을 첨가했을때에 비해 유의적(P<0.05)으로 감소하였으며, 각 어종별 간흡충 탈낭유충 균질액의 상충액 첨가에 의한 CL반응 감소율은 참붕어의 경우 22.9%, 붕어 9.6%,잉어 12.4%로 나타났다.
In order to elucidate the defence mechanism of Cyprinus carpio nudus to Clonorchis sinensis, clonorchicidal substance in the epidermal mucus of this fish was isolated by silica gel column and thin layer chromatography and analyzed for its chemical nature by UV, IR and NMR-spectroscopy. The epidermal mucus of the fish was extracted by ethyl ether and separated into 2 fractions by column chromatography using petroleum ether/chloroform(30/70,v/v) as first solvent and methanol as second solvent. The second fraction with greyish white colour showed clonorchicidal effect. The second was again fractionated into greyish white precipitate and clonorchicidal greenish yellow supernatant fraction, by adding petroleum ether and standing the mixture for 5 days at $5^{\circ}C$. The latter was divided into 7 fractions in column chromatography with acetone/ benzene (10/90, v/v) as carrier. The fraction on equivalent to the spot of Rf. 0.225 value among them disclosed the strongest clonorchicidal effect. By this purification procedure, clonorchicidal substance was purified 154-fold with 0.9% yield from the mucus of the fish, and 10mg of the final fraction killed tne metaceicariae in 22 min. Infra red, nuclear magnetic resonance and ultraviolet spectrometric analysis of the purified substance revealed that the substance is linoleic acid. According to the results of the present studies it seemed that this fish could not be proper intermediate host of Clonorchis sixensis, and that defence mechanism of this fish to the worm seems to be correlated with clonorchicidal substance in epidermal mucus.
Park, Jae-Hwan;Guk, Sang-Mee;Kim, Tae-Yun;Shin, Eun-Hee;Lin, Aifen;Park, Ji-Yeon;Kim, Jae-Lip;Hong, Sung-Tae;Chai, Jong-Yil
Parasites, Hosts and Diseases
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제42권1호
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pp.41-44
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2004
The pond smelt Hypomesus olidus and minnow Zacco platypus were collected from the Soyang and Daechung Lakes in January 2003, and their metacercarial infections was examined by the muscle compression and artificial digestion techniques. In the Soyang Lake, 161 metacercariae of Clonorchis sinensis (0.35 per fish) were harvested from 459 pond smelts examined. Also, 13 metacercariae of C. sinensis (0.43 per fish), 1 of Metagonimus sp., 4 of Echinostoma sp., 148 of Centrocestus armatus and 44 unidentified species were collected from 30 minnows. In the Daechung Lake, 369 metacercariae of C. sinensis (3.69 per fish) and 51 unidentified species were recovered from 100 pond smelts. The metacercariae of C. sinensis were fed to experimental rats, in which the adult flukes were identified. The pond smelts and minnows collected from the Soyang and Daechung Lakes were verified to be the second intermediate hosts and the sources of human C. sinensis infection.
A new crystal of helminth glutathione S-transferase, 28 kDa isozyme from Clonorchis sinensis has been grown from a 20% PEG MME 550 solution containing 50 mM $CaCl_{2}$ in 0.1 M bis-Tris buffer (pH 6.5) in $2{\sim}3$ days. The crystals diffract to $3.0{\AA}$ resolution and belong to the orthorhombic space group $P2_{1}2_{1}2_{1}$ with cell parameters $a=62.58{\AA},\;b=69.92{\AA},\;and\;c=339.67{\AA}$.
이리지방(裡里地方)의 축견내장(畜犬內臟) 150두분(頭分)을 부검(剖檢)한 결과(結果) 15예(例)(10%)에 있어서 간흡충(肝吸蟲)의 감염(感染)을 그리고 2예(例)(1.3%)에 있어서 묘흡충(猫吸蟲)의 감염(感染)을 보았다. 이 사실(事實)로 미루어보아 우리나라에 있어서 감염견(感染犬)으로 부터 간접적(間接的)으로 사람에게 감염(感染)이 성립(成立)되는 것이 명확(明確)함으로 축견(畜犬)의 감염예방(感染豫防)이나 감염견(感染犬)의 박멸(撲滅)은 예방의학적(豫防醫學的) 견지(見地)에서 중대(重大)한 의의(意義)가 있다.
The Kato-Katz (KK) method is a well-known method of fecal examination for helminthiases. Its diagnostic sensitivity was found very high for clonorchiasis. The present study evaluated the correlation of Clonorchis sinensis egg counts by the KK method with those by direct smear and formalin-ether (FE) technique. The egg counts obtained by the KK method (Y) were correlated with the counts by direct smear (X) with the equation of Y = 659.4 + 0.266X ($r^2$ = 0.738), but not with those by the FE method. The present study demonstrated that the KK method and direct smear were useful for both qualitative and quantitative diagnosis of clonorchiasis, especially in the field.
In preventing the infection of Clonorchis sinensis, there is one way in which life cycle of Clonorchis sinensis is cut off by eradicating the first intermediate host viz Parafossarulus manchuoricus, with molluscicides or insecticides. This survey was carried out in order to evaluating the molluscicidal effect of several insecticides upon P. manchauricus. In this survey, diazinon, heptachlor, E.P.N., E.M., and malathion was applied as molluscidies. Those insecticides had been generaly used in farming area. The results are summarized as follows. 1) In molluscicidal effect, E.M. showed the higher molluscicidal effect than any other insecticides in all experiment parts, and the order of insecticides upon molluscicidal effect was that of E.M., E.P.N., heptachlor and malathion. 2) $LD_{50}$ values are varied according to the exposure time in insecticide solution, and the longer the exposure time is, the lower the values of $LD_{50}$ is. 3) To take the exposure time in low concentration of insecticide solution for the long time would obtain the more molluscicidal effect. 4) The mortality rate increases in proportion as the concentration of insecticides increases.
Praziquantel is the drug of choice for clonorchiasis. Since clonorchiasis is endemic in most river basins, praziquantel has been widely used for 30 years in Korea. A 54-year-old Korean woman suffered from hypersensitive reactions, such as nausea, dyspnea, rash, and urticaria after taking the first dose of praziquantel to treat clonorchiasis. She ingested one dose again and the same symptoms appeared, and she was treated at a clinic with anti-histamines. She tried one more dose with anti-histamines but found the same symptoms. Later, she was found to pass eggs of Clonorchis sinensis and medicated with flubendazole. The hypersensitive reaction to praziquantel is rare but occurs. This is the 5th case report in the world.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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