Shuttle plasmid vector인 pHN114를 이용하여 Kluyveromyces fragilis의 3-isopropylmalate dehydrogenase 유전자를 cloning 하였다. 그 결과 Saccharomyces cerevisiae의 leu2변이와 E.coli의 leuB변이를 상보하는 두가지 clone 체 pJK104와 pJK106을 얻었다. Restriction mapping 결과 이들은 서로 반대방향으로 삽입되어 있었으며 expression activity는 pJK104가 높았다. pJK104에 삽입된 유전자를 BglII와 SalI으로 끊은 1.6kb fragment를 probe 로 하여 Southern Hybridization 한 결과 유전자의 유래가 Kluyveromyces fragilis 임을 확인하였다.
Positional cloning (map-based cloning) of mutations or genetic variations has been served as an invaluable tool to understand in-vivo functions of genes and to identify molecular components underlying phenotypes of interest. Mice homozygous for the cerebellar deficient folia (cdf) mutation are ataxic, with cerebellar hypoplasia and abnormal lobulation of the cerebellum. In the cdf mutant cerebellum approximately 40% of Purkinje cells are ectopically located within the white matter and the inner granule cell layer (IGL). To identify the cdf gene, a high-resolution genetic map for the cdf-gene-encompassing region was constructed using 1997 F2 mice generated from C3H/HeSnJ-cdf/cdf and CAST/Ei intercross. The cdf gene showed complete linkage disequilibrium with three tightly linked markers D6Mit208, D6Mit359, and D6Mit225. A contig using YAC, BAC, and P1 clones was constructed for the cdf critical region to identify the gene. A deletion in the cdf critical region on chromosome 6 that removes approximately 150kb of DNA was identified. A gene associated with this deletion was identified using cDNA selection. cdf mutant mice with the transgenic copy of the identified gene restored the brain abnormalities of the mutant mice. The positional cloning of cdf gene provides a good example showing the identification of a gene could lead to finding a new component of important molecular pathways.
HcNPV DNA genome 을 제한효소 EcoRI 으로 절단하여 그들의 일부 절편을 pUC8 vector 에 cloning 한 후 E. coli JM 83 세포에 형질 전환시켰다. 이 결과 24 개의 EcoRI 절편중 12 개의 절편이 cloning 되었다. 이들 제조합체중 4 개는 eNP-O, eNP-Q, eNP-R, eNP-S 라 명명하였다. 또한 이들 제조합체의 외래 유전자 발현을 SDS-PAGE 에 의해 단백질 패턴을 분석하였다. 그 결과 제조합체 eNP-O, eNP-Q, eNP-R 에서는 E. coli JM 83 숙주세포의 단백질 밴드와 비교하여 다른 분자량을 갖는 밴드가 나타났다.
본 논문은 밴드 매칭과 경계제거 두 부분으로 나누어진 새로운 인페인팅 방법을 제안한다. 밴드 매칭은 삭제하고자하는 영역(인페인팅 영역)을 둘러싸는 밴드와 영상의 나머지 영역을 비교하여 그 차이가 가장 작은 영역을 인페인팅 영역에 채워 넣는 것이고, 경계제거는 밴드매칭으로 채워진 영역과 주변영역 사이에 나타나는 경계를 제거하는 것이다. 제안하는 방법은 인페인팅 영역으로 연속된 선이 지나는 경우 좋지 못한 결과를 얻는 경우가 있는데, 이러한 경우 영역분할이라는 과정을 더한다. 영역분할 방법은 인페인팅 영역을 작게 나누고, 분할된 각각의 영역에 대해 밴드 매칭과 경계제거를 수행하는 것이다. 영역분할을 이용하는 경우 분할 개수에 따라 여러 개의 다른 결과를 얻을 수 있고, 사용자는 그 결과들 중에서 가장 좋은 결과를 선택할 수 있다.
PSS hetero 돼지를 이용하여 PSS와 관련된 유전자를 cloning 하여 유전자 구조를 분석하고 세포내의 유전자의 존재를 확인하여 PSS 돼지의 유전양식을 밝히고자 실시되었고, 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 615번 amino acid가 N과 n에서 각각 arginine과 cysteine으로 존재함을 확인할 수 있었다. 그리고 6번 염색체(PSS 관련유전자)로부터 우성유전자 N과 열성유전자 n이 각각 유전자 좌위(locus)에 대립 유전자(alleles)로 존재함을 확인할 수 있었으며, 이러한 alleles로 존재함으로써 각각의 유전자가 나뉘어져 유전됨을 알 수 있었다.
1. A. ficuum의 genomic library 검색을 통해 Axe 유전자를 포함하고 있는 5.0 kb의 XbaI DNA 절편을 cloning 했다. Cloning 된 절편의 부분 염기서열 결정 결과 약 1.4 kb의 AXE coding 부위를 확인했으며, cDNA cloning과 그 염기서열의 결정을 통해 AXE coding 부위 내에는 두 개의 intron 이 존재함이 확인되었다. 2. AXE coding 부위의 아미노산 잔기 서열 검색 결과 A. awamori의 AXE와 약 92%의 상동성과 95%의 유사성이 있음이 확인 되었다. 3. 약 900 kb의 AXE의 cDNA를 yeast의 YEp352 vector의 GAL1 promoter의 전사 방향으로 cloning한 후 발현시킨 결과 형질전환체에서 acetyl esterase 활성을 확인했으며, 활성도는 숙주균주에 비해 약 4-5배의 높은 OD unit로 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
간흡충 total RNk에는 많은 량의 185 rRNA가 함유되어 있었지만 285 rRNA는 그 양이 매우 적었다. 약 $8{\;}{\mu\textrm{g}}의{\;}poly{\;}(A)^{+}$ mRNAS부터 합성된 double-stranded CDNA는 대부분이 0.4-4.2 kb 크기이었으며 9.5 kb에 달하는 것도 있었다. 이미 보고되어 있는 tropomyosin의 amino산 서열을 기준하여 5개의 degenerated oligonucleotide (sense primer 2개와 antisense primer 3개)를 합성하였다. TotalcDNA를 template로 하고 sense primer와 antisense primer를 조합하여 실시한 PCR 산물 중에서 580 bp 크기의 특이 유전자가 나타났다. 만손주혈흡충의 tropomyosin CDNA를 탐색자로 써서 Southern hybridization했을 때 이 유전자만이 검출되어서. 이 유전자는 간횹충 tropomyosin (CSTM) CDNA의 일부분일 가능성이 높다고 생각되어 sequencing vector인 POEM-3Zf(-)에 cloning한 다음 염기서열을 결정하였다. nRf 증폭된 CSTM CDNA는 크기가 575 bp이었으며 191개의 predicted amino산 서열은 한 개의 open reading frame을 갖고 있었다 CSTM CDNA의 amino산 서열은 만손주혈흡충 tropomyosln과 86.3%. Trichosoonvk: colhnfornis tropomyosin과 51.1% 의 유사성을 갖고 있었다. 이 CSTM cDNA fragment는 앞으로 간흡충 cDNA library를 screening하여 완전한 CnM CDNA를 cloning하기에 좋은 probe로 쓰일 것으로 예상된다.
Tn5의 kanamycin 저항성 유전자를 가진 pBEL1 plasmid와 C.glutamicum cryptic plasmid인 pSR1으로 7.5kb의 새로운 plasmid를 만든 후, 이를 pCE1301이라 명명하였다. 이 pCE1301은 PEG1301은 PEG-protoplast법으로 C.glutamicum을 형질전환하였을 때 효율이 약 $3.0\times 10^3$형질전환제/$\mu g$이었으며 SalI과 EcoRI 제한효소 절단부위가 1개씩이었다. 또 Km이 없는 배지에서 25세대까지 안정하게 유지되었으며 B.flavum, E.coli에서 복제되었다. 이 pCE1301을 이용하여 C.glutamicum 의 homoserine dehydrogenase 유전자를 cloning하였다.
IPTV 시스템에서 콘텐츠 및 서비스 제공자의 권익보호는 수신제한시스템(CAS, Conditional Access System) 및 디지털저작권관리(DRM, Digital Right Management)를 통해서 이루어진다. 특히 CAS의 경우, 계층화된 인증키를 사용하여 권한이 있는 사용자에게만 암호화된 콘텐츠를 복호화할 수 있도록 한다. 하지만 CAS가 콘텐츠 제공자와 스마트카드(SC, Smart Card) 사이 구간만의 보안을 제공하기 때문에 셋톱박스(STB, Set-Top Box)와 SC 간 보호 받지 못하는 채널을 도청하는 McCormac Hack 공격이나 SC 복제 공격으로부터 시스템을 보호할 수 없다. 본 논문에서는 McCormac Hack 공격뿐 만 아니라 SC 복제 공격에도 강건하면서 다중 STB를 지원할 수 있는 SC / STB 인증 기법을 제안한다. SC 복제 공격을 막기위해 SC등록 단계에서 STB와 SC를 바인딩하였던 기존 기법은 다중 STB환경을 지원하지 못한다. 제안하는 시스템은 가입자관리시스템에서 STB 정보를 IPTV의 양방향 채널 특성을 이용하여 동적으로 갱신함으로서 사용자의 다중 STB를 효과적으로 지원한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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