• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제5권5호
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• pp.350-354
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• 2000

The growth promotion of a Taxus brevifolia cell suspension culture was investigated using conditioning factors. The conditioning factors produced and secreted from cultured cells usually stimulate cell division and the production of secondary metabolites. Therefore, the effective incubation time for the optimal secretion of conditioning factors was firstly determined for the promotion of cell growth. Conditioned media obtained by cultivating for 2 and 5 days showed the promotion of initial cell growth during the early cell growth period. However, the positive effect of the conditioning factors on the initial cell growth did not continue because of the depletion of the medium nutrients. Accordingly, the addition of a carbon source to the conditioned medium prolonged the positive effect on the cell growth. The addition of sucrose to the conditioned medium resulted in the maximum cell density being reached 4 days earlier compared to the control group and an increased substrate yield.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제36권1호
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• pp.7-12
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• 2009

본 실험은 음나무 배발생 세포의 증식 및 체세포배 발달을 위한 액체 현탁 배양조건의 확립을 위해 수행되었다. 배발생 세포의 생장율은 접종 밀도가 증가할수록 감소하였다. 배발생 세포의 증식에 가장 효과적인 접종 밀도는 0.1 g/100 ml 로서 이 농도에서 세포의 생장율이 가장 높았다. 배양기간에 따른 배발생 세포의 생장 패턴 및 세포 주기 (G1, S, G2/M) 분석 결과, 세포의 생장은 배양 5일 후부터 증가가 시작되어 15일 까지 급격히 생장하였으며 그 이후에는 점차 감소하였다. 배양 기간 별 세포 주기 (cell cycle)의 변화가 명확하게 관찰되어 배양 5일째 5기는 초기의 5.5% 에서 11.7%로 두 배정도 증가하였으며, 배양 15일 이후부터는 다시 초기의 세포 주기로 되돌아가면서 안정화되는 것으로 나타났다. 따라서 음나무 배발생 세포의 현탁배양은 15일의 주기로 배양하는 것이 증식에 가장 효과적인 것으로 생각되었다. 한편 배발생 세포에서 체세포배의 유도는 배양초기의 접종 밀도가 중요한 것으로 나타났다. 0.5 g/L 의 낮은 밀도로 접종 시에는 65% 이상의 어뢰형 배가 유도된 반면 접종 밀도가 높아질수록 어뢰형으로의 배발달은 급격히 감소하였다. 초기의 접종 밀도가 증가할수록 특히 어뢰형 배의 발달은 지연되었으나 구형 및 심장형 배의 유도는 초기 접종밀도에 영향을 받지 않았다. 이상의 실험결과로 음나무 액체 배양 시 초기 접종 밀도를 조절함으로써 배발생 캘러스의 증식 및 체세포배를 효과적으로 유도할 수 있었으며 이는 체세포배 생산을 위한 배양 기간의 단축이 가능함을 보여주는 결과이다.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권3호
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• pp.155-161
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• 2000

야생 흰 제비꽃 (viola patrinii DC.)의 callus로부터 분열 활성이 높고 균일한 세포주의 생산성 향상을 위한 현탁배양 방법이 세포의 생장에 미치는 영향에 관하여 조사한 결과는 다음과 같다. Compact callus의 세포생장을 위해서 배지의 종류를 MS, B5, R2, White배지로 나누어서 실험한 결과 MS배지와 R2 배지의 callus 생육이 양호하였으며, White배지를 사용시에는 횐 callus에 붉은 색소 (시코닌계 색소)가 생산되었다. 무기염의 농도에서는 생체중은 MS 기본배지에서 건물중은 1/2 NH$_4$NO$_3$, 1/2 KNO$_3$가 가장 좋았다. 배지중의 NH$_{4}$$^{+}$ 와 HO$_{3}$$^{-}$ 농도비를 100:0, 75:25, 50:50, 25:75, 0:100로 한 결과 25:75의 비에서 생육이 가장 양호하였으며, NH$_{4}$$^{+}$ 의 농도가 낮아질수록 세포에 붉은 색소가 생성되는 경향을 보였다. Casein Hydrolysate (CH)의 농도가 세포의 생장에 미치는 영향은 5 g/L 첨가시 생체중, 건물중 모두 높았다. 조직학적 관찰에 있어서는 2~4주간 된 callus는 대부분의 세포의 크기가 작고 세포질이 농후한 상태로 비교적 균일한 세포로 구성되어 있고 액포화가 거의 이루어지지 않은 상태로 세포의 분열이 왕성하게 이루어지고 있음을 관찰할 수 있었고, 6주간 배양된 callus는 신장되고 액포화된 세포들이 많이 관찰되었다.

• Journal of Plant Biology
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• 제34권1호
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• pp.19-23
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• 1991

벼의 종자로부터 embryogenic callus를 유도하고 이로부터 개체로의 재분화를 유도하였으며, embroyogenic cell suspension culture를 통하여, 이로부터 원형질체를 분리, 배양하여 embryogenic callus를 형성하였다. 또한, 분리된 원형질체를 electroporation하였을 때 생존율(viability)에 미치는 여러 요인들을 조사하였다. 원형질체의 생존율은 voltage와 capactiance가 증가할수록 감소를 보였으며, HBM buffer에서 $4^{\circ}C$로 electroporation 하였을 때 생존율에 보다 효과적이었다.

• 한국약용작물학회지
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• 제3권2호
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• pp.96-99
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• 1995

본 실험은 쪽 세포의 현탁배양에서 indirubin 생산을 위한 indole의 처리 시기와 처리 기간 및 첨가량을 찾기 위하여 수행하였으며 얻어진 결과는 다음과 같다. 1. Indole 첨가시 세포 생장량은 억제되었다. 2. Tryptophan 첨가시 세포 생장량의 증가는 크지 않았다. 3. Indole과 L-tryptophan을 고체레지에 첨가한 경우 indole을 첨가한 배지에서 만 indirubin이 검출되었다. 4. Indirubin 생산에 적절한 indole 첨가 농도는 고체배지에서 200mg으로 나타났다. 5. 현탁배양 중 indole 첨가시기를 달리한 결과 배양 20일 후 indole을 첨가한 배지에서 세포와 배지내 indirubin 농도가 높았다. 6. 고체배양보다 현탁배양에서 세포내에 축적된indirubin이 많았으며 배지 내 로 상당량의 indirubin이 유출되었다.

• 생명과학회지
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• 제17권2호통권82호
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• pp.293-297
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• 2007

형광단백질 (green fluorescent protein, GFP)은 생물공정을 살피데 지표 단백질로 유용하게 사용이 된다. 본 연구에서는 쌀세포에서 외래 단백질의 발현양상을 관찰하기 위해서, 표지 단백질로 GFP를 형질전환 후 이것에서 유도된 현탁세포에서 GFP의 발현 양상을 관찰하였다. 형질전환시 GFP의 발현을 위한 프로모터로 RAmysE를 사용하였으며 이것은 배양액 중에서 당이 고갈되었을 때 강력히 작동된다. 그래서 본 연구에서는 배양액 중에 다양한 슈크로오스 농도로 쌀세포를 배양하여 세포의 성장양태 및 GFP의 발현양에 미치는 영향을 관찰한 결과 세포의 성장은 12%의 당농도에서 7.06g/L로 최적이였으며 GFP는 당을 가장 적게 사용한 3%에서 최적임을 알 수가 있었다. 이것은 세포의 성장과 GFP의 생산에 사용된 당이 반대로 영향을 미침을 알 수가 있었으며 향후 최적의 대량배양을 위해서는 세포의 성장과 산물의 생산시기를 분리한 이단계 배양법이 필요함을 암시한다.

• Journal of Plant Biology
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• 제32권4호
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• pp.247-253
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• 1989

Protoplasts were enzymatically isolated from suspension culture of sweet potato. High yields of single protoplasts were produced from nonembryogenic cell aggregates. However, most protoplasts obtained from embryogenic cell clumps were spontaneously fused during enzyme treatment; a small portion of them remained single. Upon transfer to Murashige and Skoog's(MS) liquid medium supplemented with 0.1 mg/1 6-benzyladenine(BA) and 1 mg/12,4-dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D), protoplasts from nonembryogenic cell aggregates sustained cell divisions to form cellus. Upon subculture onto MS media with 0.2 mg/12,4-D or without growth regulators, the callus did not give rise to any organs. On the other hand, first cell division of single protoplasts from embryogenic cell clumps was sporadically observed.

• KSBB Journal
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• 제20권1호
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• pp.34-39
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• 2005

목련과 수종인 함박꽃나무의 현탁배양세포로부터 생리활성을 갖는 리그난화합물인 (+)-eudesmin을 효율적으로 생산하기 위한 연구로써 플라스크배양 단계에서의 다양한 배양조건들 즉, 배지, 초기 당농도, 교반속도, 초기 접종농도, 그리고 elicitation 효과를 확인하고자 하였다. MS배지를 포함한 4종의 배지에서는 물질의 생산성과 생중량 모두에서 MS배지가 적합한 것으로 나타났다. 130 rpm으로 교반되는 항온배양기에서 $3\%$ sucrose와 0.5 mg/L 2,4-D가 첨가된 MS배지에 0.5 mg (DCW)의 농도로 세포를 접종한 실험구에서 8주 후 플라스크 당 3.71 g (DCW)의 생중량을 얻었으며, 지표물질인 (+)-eudesmin의 함량은 $5\%$ sucrose와 200 mg/L chitosan 처리구에서 $3.2{\mu}g/g$ (DCW)으로 대조구에 비해 1.7배의 증가를 나타내었다. 이와 같은 연구결과는 생물반응기를 이용한 목련과 수종에서의 유용물질 생산 연구에 활용될 수 있을 것으로 사료된다.

• Journal of Plant Biology
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• 제31권1호
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• pp.41-49
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• 1988

Several cultivars of rice were examined for induction of embryogenic callus on a medium containing MS salts, vitamins and 2, 4-D under darkness. Embryogenic callus was obtained from cultivar Cheonma with high ratio and embryo-like structures were formed from the callus on a medium with or without reduced 2, 4-D. Somatic embryoids with a plumule and radicle axis surrounded by a scutellum were observed. These embryoids germinated and produced plantlets in 30 days on the same medium. Protoplasts isolated from an embryogenic cell suspension culture derived from embryogenic callus were cultured either in liquid or in agar medium and protoplast derived cell colonies were obtained in 3-4 weeks.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제7권2호
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• pp.117-120
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• 2002

The effect of cell density on cell growth was investigated in a suspension batch culture of hybridoma cells. The specific growth rate was found to increase with increasing initial cell density and then to decrease with further increases in initial cell density. In order to quantitatively describe the dependence of specific growth rate on cell density, a kinetic model is proposed, which satisfactorily represents the experimental data.