Serum proteins of Korean native dogs (Gyeongju DongGyeong dogs) was analyzed by capillary electrophoresis system. Electrophoretic patterns showed six fractions. Total serum protein and ratio of albumin to globulin were $5.99{\pm}0.83$ (g/dl) and $1.41{\pm}0.29$ (g/dl) in DongGyeong dogs. Relative percentages of total serum albumin and $\alpha-1$, $\alpha-2$, $\beta-1$, $\beta-2$, $\gamma$-globulin fraction were $57.94{\pm}5.43$, $3.15{\pm}2.30$, $7.49{\pm}4.09$, $9.43{\pm}3.50$, $7.63{\pm}5.70$, and $14.36{\pm}7.63$, respectively. It was observed that $\beta$-globulin was higher than other fractions. The most striking alternation with age was founded in the $\gamma$-fractions. Also, it was observed that ratios of albumin to globulin in DongGyeong dogs were higher than on other dogs.
Brucella (B.) abortus is a facultative intracellular pathogen that infects a wide variety of animal species and human. Brucellosis is the zoonosis and an extremely important disease around the world. Although the eight species can be differentiated by conventional phenotypic tests, these species display a high degree of DNA homology in DNA-DNA hybridization assay (>90%). Various methods have been established for genotyping of Brucella species, but most of analytical methods are lack reproducibility and limited capability to differentiate them. The attempt of this study was to evaluate multiple-locus VNTR analysis (MLVA) for use of epidemiological trace-back analysis in bovine brucellosis. Ninety-four B. abortus isolates from Gyeongbuk province during 2006~2010 were analyzed using 16 VNTR locus. High resolution automatic capillary electrophoresis system was used for more throughput, simpleer, faster, and better discriminable than conventional gel electrophoresis. As a result, 13 different genotypes were identified from 94 B. abortus isolates. MLVA could contribute to epidemiological trace-back analysis of bovine brucellosis.
To see the possibility of irradiation as an alternative to ultra high temperature (UHT) sterilization, the quality characteristics of milk were analyzed. Milk treated by UHT ($135^{\circ}C$ for 4 sec) and irradiation at higher than 3 kGy showed no viable counts after 7 days of storage at $4^{\circ}C$. The contents of certain amino acids of milk, such as Arg, Asp, Glu, Ile, Leu, Lys, Pro, Ser, Thr, and Tyr, were lower in irradiated groups at 10 kGy than in UHT-treated one, but no difference was observed between irradiated milks at less than 5 kGy and UHT. The capillary electrophoresis (CE) patterns of the milk irradiated at 10 kGy showed a similar trend to the raw milk, low temperature long time (LTLT, $63^{\circ}C$ for 30 min), and high temperature short time (HTST, $72^{\circ}C$ for 15 sec) treated. However, the CE pattern of UHT-treated milk was different. Rennet coagulation test agreed with the CE results, showing that all milk samples were coagulated by rennet addition except for UHT-treated milk after 1 hr. These results suggest that irradiation of milk reduce the content of individual amino acids but it may not induce severe conformational change at a protein level when compared with UHT treatment.
Artificially oxidized cysteine residues in peroxiredoxin 6 (Prx6) were detected by electrospray interface capillary liquid chromatography-linear ion trap mass spectrometry after the preparation of two-dimensional gel electrophoresis (2D-GE). We used Prx6 as a model protein because it possesses only two cysteine residues at the 47th and 91st positions. The spot of Prx6 on 2D-GE undergoes a basic (isoelectric point, pI 6.6) to acidic (pI 6.2) shift by exposure to peroxide due to selective overoxidation of the active-site cysteine Cys-47 but not of Cys-91. However, we detected a tryptic peptide containing cysteine sulfonic acid at the 47th position from the basic spot and a peptide containing both oxidized Cys-47 and oxidized Cys-91 from the acidic spot of Prx6 after the separation by 2D-GE. We prepared two types of oxidized Prx6s: carrying oxidized Cys-47 (single oxidized Prx6), and other carrying both oxidized Cys-47 and Cys-91 (double oxidized Prx6). Using these oxidized Prx6s, the single oxidized Prx6 and double oxidized Prx6 migrated to pIs at 6.2 and 5.9, respectively. These results suggest that oxidized Cys-47 from the basic spot and oxidized Cys-91 from the acidic spot are generated by artificial oxidation during sample handling processes after isoelectric focusing of 2D-GE. Therefore, it is important to make sure of the origin of cysteine oxidation, if it is physiological or artificial, when an oxidized cysteine residue(s) is identified.
High-performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) were used to identify five active components in the modified herbal decoction Bo-Yang-Hwan-O-Tang (mBHT), i.e., amygdalin, decursin, paeoniflorin, salvianolic acid B, and calycosin-7-O-${\beta}$-D-glycoside. These components were identified by comparing their retention times and mass spectra with those of reference compounds. The conditions of both analytical methods were optimized and validated. Sufficient separation of target analytes was achieved using a buffer consisting of 40 mM sodium borate and 60 mM sodium dodecylsulfate (SDS) containing 10% methanol (pH 9.5) at 250 nm for CE analysis and gradient elution with a water-methanol mobile phase and ultraviolet (UV) photodiode array detector (DAD) at 250 nm for HPLC analysis. The mBHT components were determined within 65 min by HPLC and 16 min by CE. All calibration curves showed high linearity (R > 0.999) within the ranges tested. Intra-day and inter-day precision were less than 1.6% and 1.8% for HPLC and 2.5% and 4.8% for CE, respectively. The accuracy of the methods ranged from 98.8% to 102.3% for HPLC and from 95.9% to 108.2% for CE.
모세관 전기영동 장치를 이용하여 금속 표면 세척제(상품명 BFA와 BCA) 2종에 포함된 음이온 계면활성제에 대한 정성 및 정량분석을 수행하였다. Acetonitrile과 sodium benzoate를 포함하는 pH 10의 완충용액을 이용하여 18kV의 전압하에서 분리한 결과 $10^4$ 이상의 이론단수를 보이는 좋은 electropherogram을 얻을 수 있었다. S/N~3인 농도를 기준으로 검출한계는 ~5ppm이었으며 표준물질을 이용하여 얻은 검정곡선의 경우 농도가 10~100ppm의 범위에서 ~0.99 이상의 상관계수를 갖는 좋은 직선성을 보였으며, 이러한 결과를 바탕으로 분석한 결과 BFA의 경우 음이온 계면활성제의 각 성분은 octanoate, decanoate, dodecanoate, tetradecanoate, hexadecanoate등이었으며 상대비는 각각 1.0 : 1.0 : 6.5 : 2.1 : 0.8이었다.
Background: Recently, the pork industry of Thailand faced an epidemic of highly virulent strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), which spread throughout Southeast Asia, including the Lao People's Democratic Republic and Cambodia. Hence, the rapid and on-site screening of infected pigs on a farm is essential. Objectives: To develop the new aptamer as a biosensor for detection PRRSV which are rapid and on-site screening of infected pig. Methods: New aptamers against PRSSV were identified using the combined techniques of capillary electrophoresis, colorimetric assay by gold nanoparticles, and quartz crystal microbalance (QCM). Results: Thirty-six candidate aptamers of the PRRSV were identified from the systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) by capillary electrophoresis. Only 8 out of 36 aptamers could bind to the PRSSV, as shown in a colorimetric assay. Of the 8 aptamers tested, only the 1F aptamer could bind specifically to the PRSSV when presented with the classical swine fever virus and a pseudo rabies virus. The QCM was used to confirm the specificity and sensitivity of the 1F aptamer with a detection limit of 1.87 × 1010 particles. Conclusions: SELEX screening of the aptamer equipped with capillary electrophoresis potentially revealed promising candidates for detecting the PRRSV. The 1F aptamer exhibited the highest specificity and selectivity against the PRRSV. These findings suggest that 1F is a promising aptamer for further developing a novel PRRSV rapid detection kit.
The pandemic of avian influenza viruses (AIVs) in Asia has caused enormous economic loss in poultry industry and human health threat, especially clade 2.3.4.4 H5 and H7 subtypes in recent years. The endemic chicken H6 virus in Taiwan has also brought about human and dog infections. Since wild waterfowls is the major AIV reservoir, it is important to monitor the diversified subtypes in wildfowl flocks in early stage to prevent viral reassortment and transmission. To develop a more efficient and sensitive approach is a key issue in epidemic control. In this study, we integrate multiplex reverse transcription recombinase polymerase amplification (RT-RPA) and capillary electrophoresis (CE) for high-throughput detection and differentiation of AIVs in wild waterfowls in Taiwan. Four viral genes were detected simultaneously, including nucleoprotein (NP) gene of all AIVs, hemagglutinin (HA) gene of clade 2.3.4.4 H5, H6 and H7 subtypes. The detection limit of the developed detection system could achieve as low as one copy number for each of the four viral gene targets. Sixty wild waterfowl field samples were tested and all of the four gene signals were unambiguously identified within 6 h, including the initial sample processing and the final CE data analysis. The results indicated that multiplex RT-RPA combined with CE was an excellent alternative for instant simultaneous AIV detection and subtype differentiation. The high efficiency and sensitivity of the proposed method could greatly assist in wild bird monitoring and epidemic control of poultry.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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