인간의 대장내 점막에 대하여 우수한 점착특성을 갖는 probiotic 유산균주를 선별할 목적으로, colonic mucin-binding assay를 고안하고 최적의 분석 조건을 검토한 결과, microtiter plate의 well에 대한 colonic mucin의 부착은 pH 4.8, biotinylated SLP의 농도는 $5.0\;{\mu}g/mL$, 시판 HRP-conjugated streptoavidin은 24,000배 희석용액, TMB의 발색시간은 10분의 조건에서 측정시 최적의 결과를 나타냈다. 동 조건에서 본 assay system을 이용할 경우, 장내 점착능 측정 및 우수 유산균주의 선별에 있어 신속하고 재현성 있는 결과를 제공할 수 있으며, 인간의 대장에 대한 유산균의 점착특성을 정량적으로 분석할 수 있음을 보여주었다. 공시균주 32종 및 유아 분변 유래의 분리균주 18종을 포함한 총 50종의 유산균주에 대하여, colonic mucin-binding assay를 이용하여 대장 mucin에 대한 결합능을 비교한 결과, L. species FSB-1이 가장 높은 결합능을 보여주었다. 따라서 L. species FSB-1을 대상으로 형태학적 특성, 생리 및 생화학적 특성과 16S rDNA에 대한 부분 염기서열 분석을 포함한 동정실험을 수행한 결과, 장내 점착능 우수균주로 선별된 L. species FSB-1은 Lactobacillus brevis로 최종 동정되었다.
Receptor binding study was carried out as an in vitro assay to test the anti-ulcer effect for newly synthesized test compounds(IY-80843 and IY-80845) which were reported to have a strong anti-secretory effect in Shay-ligated rats. The histamine H$_{2}$-receptor fraction was prepared from the membranes of the isolated gastric glands in guinea pigs and $^{3}$H-cimetidine was used as a radioligand. The binding of $^{3}$H-cimetidine to the membranes of the isolated gastric glands was found to be time dependent, saturable and confined to a single population of binding sites with $K_{D}$ value of 0.13$\pm$0.03 $\mu{M}$ and B$_{max}$ value of 52.5$\pm$1.5 pmol/mg. From the competition experiments, both IY-80843 and IY-80845 were shown to have a strong blocking effect against binding of $^{3}$H-cimetidine to the histamine H$_{2}$-receptor. The IC$_{50}$, Ki, and Hill coefficient(nH) values for IY-80843 were 0.18$\pm$0.02 $\mu{M}$, 0.16$\pm$0.02 $\mu{M}$, and 0.97$\pm$0.15, respectively and those values for IY-80845 were 0.27$\pm$0.02 $\mu{M}$, 0.24$\pm$0.02 $\mu{M}$, and 0.82$\pm$0.13, respectively. The results demonstrated that the blocking effects of IY-80843 and IY-80845 were 7 and 5 times stronger than that of cimetidine, respectively. Therefore, the newly synthesized compounds, IY-80843 and IY-80845, appeared to be the highly potent competitive inhibitors of histamine on the H$_{2}$-receptor.
Song, Minyu;Kim, Hyaekang;Kwak, Woori;Park, Won Seo;Yoo, Jayeon;Kang, Han Byul;Kim, Jin-Hyoung;Kang, Sun-Moon;Van Ba, Hoa;Kim, Bu-Min;Oh, Mi-Hwa;Kim, Heebal;Ham, Jun-Sang
한국축산식품학회지
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제39권4호
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pp.601-609
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2019
Bifidobacterium longum KACC 91563 secretes family 5 extracellular solute-binding protein via extracellular vesicle. In our previous work, it was demonstrated that the protein effectively alleviated food allergy symptoms via mast cell specific apoptosis, and it has revealed a therapeutic potential of this protein in allergy treatment. In the present study, we cloned the gene encoding extracellular solute-binding protein of the strain into the histidine-tagged pET-28a(+) vector and transformed the resulting plasmid into the Escherichia coli strain BL21 (DE3). The histidine-tagged extracellular solute-binding protein expressed in the transformed cells was purified using Ni-NTA affinity column. To enhance the efficiency of the protein purification, three parameters were optimized; the host bacterial strain, the culturing and induction temperature, and the purification protocol. After the process, two liters of transformed culture produced 7.15 mg of the recombinant proteins. This is the first study describing the production of extracellular solute-binding protein of probiotic bacteria. Establishment of large-scale production strategy for the protein will further contribute to the development of functional foods and potential alternative treatments for allergies.
Tetraiodothyroacetic acid (tetrac) is a derivative of thyroid hormone T4 and causes anti-angiogenesis by blocking T4 binding to integrin αvβ3. In this study, we synthesized [99mTc]Tc-Cys-Asp-Gly(CDG)-tetrac and evaluated it in vitro as a tumor angiogenesis imaging ligand. The CDG was conjugated to tetrac as a chelator for technetium-99m labeling. The cold vial containing CDG-tetrac, sodium glucoheptonate, and reducing agent was completed under nitrogen-filled atmospheric glove bag. [99mTc]Tc-CDG-tetrac was synthesized in quantitative yield by heating the cold vial with [99mTc]TcO4- at 100℃ for 30 min. In vitro serum stability of [99mTc]Tc-CDG-tetrac was measured by incubating the radioligand in 50% fetal bovine serum at 37℃ and analyzing the incubation mixture by radio-TLC, which showed high stability over 6 h (≥ 98%). Cell binding study was carried out by incubating [99mTc]Tc-CDG-tetrac with human umbilical vein endothelial (HUVE) cells at 37℃ for 6 h. The cell binding of the radioligand increased from 100% at 0.5 h to 293.7% at 6 h in a time-dependent manner. For blocking study, the cells were incubated with the radioligand in the presence of either tetrac (20 μM) or cRGDyK (20 μM) at 37℃ for 4 h. The results demonstrated that the cell binding of the radioligand was inhibited by tetrac (19.1%) or cRGDyK (35.6%), indicating specific binding of the radioligand to integrin αvβ3. Thus, this study suggests that [99mTc]Tc-CDG-tetrac may be a potential radioligand for tumor angiogenesis imaging.
The clamp, as the structure which is used for supporting the pipe in the atomic power plant, is produced with a certain degree of anticlastic curvature in the current manufacturing process. In this study, the structural analysis of the clamp and the pipe was performed using ABAQUS. And the finite element modelling for the analysis was made by an HyperMesh. The contact forces which are transferred between the clamp and the pipe for the external force are changed according to the binding force of bolts and keeps the clamp tightly and protects the slipping between the clamp and the pipe. The clamps with the anticlastic curvature and with the flat curvature are considered in order to invest the anticlastic effect. In this study, another case is suggested. The present case does not have the stiffness ring on the end of the clamp but the suggested case has the ring. For the present case, the results showed that the equivalent stress is higher in the anticlastic curvature case than in the flat curvature case and the equivalent stresses on the pipe are almost the same as the binding force increses. For the suggested case, the result showed that the equivalent stress in the anticlastic curvature case decreases until some binding force and increases as the binding forces increase and is lower in some range than in the flat curvature case. From this study, the clamp with the anticlastic curvature in the suggested method is better than the clamp with the flat curvature and the optimal binding force are given.
Aptamers are short, chemically synthesized, single-stranded DNA or RNA oligonucleotides that fold into unique three-dimensional structures. In this study, we aim to determine the antibiofilm activity and binding specificity of the six polyclonal DNA aptamers (S15K3, S15K4, S15K6, S15K13, S15K15, and S15K20) on Staphylococcus aureus BPA-12 and Escherichia coli EPEC 4. Aptamer S15K6 showed the highest percentage of antibiofilm activity against S. aureus BPA-12 (37.4%) as shown by the lowest OD570 value of 0.313. Aptamer S15K20 showed the highest percentage of antibiofilm activity against E. coli EPEC 4 (15.4%) as shown by the lowest OD570 value of 0.515. Aptamers S15K13 and S15K20 showed antibiofilm activities against both S. aureus BPA-12 and E. coli EPEC4, and thus potentially have broad reactivity. Furthermore, based on the binding capacity and Kd values from our previous study, the binding specificity assay of selected polyclonal DNA aptamers (S15K3 and S15K15) against S. aureus BPA-12, E. coli EPEC 4, S. aureus BPA-6, S. agalactiae, E. coli MHA-6, and Listeria monocytogenes were performed using qPCR. Aptamers S15K3 and S15K15 showed specific binding to S. aureus BPA-12, E. coli EPEC 4, S. aureus BPA-6, and S. agalactiae, but could not bind to E. coli MHA-6 and L. monocytogenes. Therefore, this study showed that the polyclonal DNA aptamers have antibiofilm activity and were able to bind to S. aureus BPA-12 and E. coli EPEC 4 bacteria.
본 연구는 selenium binding yeast peptide의 식이내 첨가가 돼지의 생산성, 조직내 Se, 혈청내 GSH-Px의 활성 및 돈육의 품질에 미치는 영향을 확인하고자 실시하였다. 3원 교잡종(Duroc ${\times}$ Yorkshire ${\times}$ Landrace) 비육돈 80두를 공시하였으며 시험개시 시의 체중은82.88$\pm$1.23kg이었다. 시험설계는 옥수수-대두박 위주의 식이로서 처리한 대조구(CON:기초식이), 대조구 식이 내 selenium binding yeast peptide 물질을 0.05%(SY1. 대조구+0.05% selenium binding yeast feptide), 0.1%(SY2: 대조구+0.1% selenium binding yeast 울ptide) 및 0.2% 첨가한 구(SY3: 대조구+0.2% selenium binding yeast peptide)로 4개 처리를 하여 처리 당 5반복, 반복 당4두씩 임의 배치하였다. 사양기간 동안의 성장률에 누는 selenium binding yeast peptide를 급여한 처리구가 대조구에 비하여 다소 높은 경향을 보였지만, 유의적인 차이는 보이지 않았다(p>0.05). 명도를 나타내는 L*-값은 SY2가 대조구와 SY1에 비하여 유의적인 차이를 보였다(p<0.05). 적색도를 나타내는 a*-값은 대조구가 다른 처리구와 비교하여 낮은 수치를 나타내었다(p<0.05). 혈청 내 Se의 함량은 대조구가 516 mg/mL로 selenium binding yeast peptide를 급여한 처리구에 비하여 낮게 나타났지만 유의 적인 차이는 보이지 않았다(p>0,05). 등심의 Se 함량은 대조구(0.008 $\mu$g/g)에 비해 SY2(0.021 $\mu$g/g) 및 SY3(0.031 $\mu$g/g)에서 유의적인 차이를 나타냈다(p<0.05). 신장의 Se함량에서는 SY2와 SY3가 대조구 및 SY1과 비교하여 유의적으로 높게 나타났다(p<0.05). 간에서는SY1이 대조구에 비하여 높게 나타났다(p<0.05). 위의 결과를 종합하여 볼 때 비육돈 식이내 selenium binding yeast peptide의 첨가는 등심, 신장 및 간에서 많이 축적되는 것으로 보이며, 육색에도 영향을 미치는 것으로 보인다.
In this study, the double-stranded DNA-dependent activities of Deinococcus radiodurans RecA protein (Dr RecA) were characterized. The interactions of the Dr RecA protein with double-stranded DNA were determined, especially dsDNA-dependent ATP hydrolysis by the Dr RecA protein and the DNA strand exchange reaction, in which multiple branch points exist on a single RecA protein-DNA complex. A nucleotide cofactor (ATP or dATP ) was required for the Dr RecA protein binding to duplex DNA. In the presence of dATP, the nucleation step in the binding process occurred more rapidly than in the presence of ATP. Salts inhibited the binding of the Dr RecA protein to double-stranded DNA. Double-stranded DNA-dependent ATPase activities showed a different sensitivity to anion species. Glutamate had only a minimal effect on the double-stranded DNA-dependent ATPase activities, up to a concentration of 0.7 M. In the competition experiment for Dr RecA protein binding, the Dr RecA protein manifested a higher affinity to double-stranded DNA than was observed for single-stranded DNA.
ZigBee기술은 Home Automation, Building Automation 그리고 Sensor Network 분야까지 다양한 분야에서 기술적인 가능성을 가지고 있다. 그러나 ZigBee기술은 WPAN(Personal Area Network) 영역으로 그 범위를 제한하고 있어 Home Automation에 적용할 수 있는 분야가 제한될 수 밖에 없다. 본 논문에서는 ZigBee의 binding기술을 확장하여 home network에 도입하기 위한 방안을 제시하고, 댁외 device들이 home server를 통하여 ZigBee의 device들과 어떻게 binding될 수 있는지를 보이고자 한다. 또한 위의 내용을 기반으로 home network의 automation을 댁외 망으로 확장할 수 있음을 보이고자 한다.
This paper aims to provide an account for the English anaphors under the framework of the recent development of minimalism (Chomsky 1999, 2001). I propose that the anaphor has the uninterpretable [a] feature. The Agree operation erases the [a] feature by feature match. Once the [a] is deleted, the derivation converges, providing a proper interpretation of the anaphor. When there is no matching phi-features, the [a] cannot be eliminated, inducing the derivation to crash. The Agree operation can account for not only the typical local binding cases in English but the apparent long-distance binding cases in the picture-DP and expletive constructions. Consequently, the traditional concept of the binding domain and dichotomy between local and long-distance types are abandoned in favor of the analysis under the framework of minimalism. The minimalist accounts thus maximally simplifies the binding principles, using the general operation Agree only.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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