Clostridium difficile infection (CDI) is the main cause of hospital-acquired diarrhea that can cause colitis or even death. The medical-treatment cost and deaths caused by CDI are increasing annually worldwide. New approaches for prevention and treatment of these infections are needed, such as the use of probiotics. Probiotics, including Bifidobacterium spp. and Lactobacillus, are microorganisms that confer a health benefit to the host when administered in adequate amounts. The effect of Bifidobacterium longum ATCC 15707 on infectious disease caused by C. difficile 027 was investigated in a mouse model. The survival rates for mice given the pathogen alone, and with live cells, or dead cells of B. longum were 40, 70, and 60%, respectively. In addition, the intestinal tissues of the B. longum-treated group maintained structural integrity with some degree of damage. These findings suggested that B. longum ATCC 15707 has a function in repressing the infectious disease caused by C. difficile 027.
This study was conducted to compare the cellular fatty acid composition and genotypic analysis of Bifidobacterium longum MK-G7 originated from Koreans with other commercial type strains of bifidobacteria. The cellular fatty acid of Bif. longum MK-G7 was shown to be composed of $C_{160FAME},C_{181\;c18DMA},C_{18.1\;CIS9\; FAME},C_{14.0FAME},C_{19\;0cye9,10 DMA},Feature7(C_{17.2 FAME), and Feature 10(C_{181\; Cll/t9/t6 FAME}$. Bif. longum MK-G7 showed 99.9% homology and the highest relatedness with Bif. longum ATCC 15707 type strain. Both Bif. longum MK-G7 and Bif. longum ATCC 15707 showed 153 bp products on RAPD (randomly amplified polymorphic DNA) analysis, however, they showed quite different band patterns on PFGE (pulsed-field gel electrophoresis) analysis. Consequently, our present study showed that Bif. longum MK-G7 was different from any commercial type strains of Bif. longum tested.
A $CaCO_3$-alginate beads system was developed for high cell density cultivation of Bifidobacterium longum and the cost-effective media were also screened. In batch process with $CaCO_3$, beads, two strains of B. longum showed both the highest viable cells and optical density in TPY medium, resulting in maximum optical density and viable cell counts of 12.40, $2.22{\times}10^10$ cfu/ml for B. longum ATCC 15707 and 13.71, $3.93{\times}10^10$ cfu/ml for B. longum HLC 3742. Released size distribution, according to $CaCO_3$-alginate bead size preparation, was smaller than others. These results were also examined by observing their morphology. The skim milk-based medium was most adequate to cultivate B. longum as the cheapest medium, and $10\%$ skim milk supplemented with $2\%$ glucose and $1\%$ yeast extract was a suitable medium, supporting the growth to $5.57{\times}10^10$ cfu/ml for ATCC 15707 and $6.82{\times}10^9$ cfu/ml for HLC 3742. During the long-term storage at $4^{\circ}C\;and\;-20{\circ}C$, B. longum cultivated with $CaCO_3$ beads had the highest stability. Consequently, $CaCO_3$-alginate beads buffer was found to be useful not only to cultivate B. longum but also to preserve cultures.
A simple and low-cost medium was developed for the growth of Bifidobacterium longum KFRI 977. Of three bifidobacterial strains, B. longum KFRI 977 (ATCC 15707) showed the best growth in MRSC broth containing 0.3% oxgall, grew well in partially anaerobic condition, exhibited highest $\beta$-galactosidase activity, and was inhibitory against Clostridium perfringens KFRI 434. Of three developed media, the population of B. longum KFRI 977 was highest (1.9$\times$$10^9$/ml) in ISP based medium. The composition of ISP based medium is ISP (5%), glucose (1%), L-cysteine HCI (0.05%), Trypticase peptone (0.5%), yeast extract (0.5%), $MgSO_4$ (0.05%), Tween-80 (0.1%), and phosphate buffer (pH 7.0). Hydrolysis of ISP by Protease A was unnecessary, and the use of phosphate buffer (pH 7.0) prevented the formation of protein precipitate. Associative culture of B. longum KFRI 977 with Lactobacillus acidophilus KFRI 233 was proven to be deleterous to the growth of B. longum KFRI 977.
우유와 두유에 Bifidobacterium을 혼합한 후 $4^{\circ}C$에서 한 달(30 days)동안 보관했을 때, 저장기간에 따라 살아있는 Bifidobacterium을 함유한 우유와 두유의 최상 조건을 알아보고자 하였다. 이를 위하여 pH, 산도, glucose함량, 생균수를 관찰하고, 또한 관능검사(10 days)를 실시하였다. Bifidobacterium을 시료에 혼합한 후 $4^{\circ}C$에서 한 달(30 days)동안 보관시 적정산도 증가율은 탈지분유, 저지방유, 저온 처리유, 고온 처리유, 그리고 두유 순으로 나타났으며 이에 반해 모든 종류의 우유와 두유에서 pH의 변화는 큰 차이가 없었다. 또한 이들 군에서 glucose함량 변화를 측정하였을 때, $0{\sim}10$일, $10{\sim}20$일, $20{\sim}30$일 사이에서 각각 두유, 저온 처리유, 고온 처리유가 높은 함량을 나타냈다. Bifidobacterium을 첨가한 우유 및 두유의 관능검사 결과는 두유의 10일 보관 전 기간동안 2일과 4일 경과시 풍미에서 가장 높은 점수를 받았으며, 우유에서는 기간이 길어질수록 좋지 않음을 알 수 있었다. 그러나 우유와 두유 모두에서 4일 경과시 다른 저장 기간에서보다 높은 기호도를 나타냈다.
본 연구에서는 Bifidobacterium을 우유와 두유에 접종하여 $37^{\circ}C$에서 발효 특성, 적정 발효 기간 및 효율적인 증식을 위한 생육 인자를 찾고자 하였다. 이를 위하여 pH, 산도, glucose함량, 생균수, ${\alpha}-galactosidase$활성 그리고 ${\beta}-galactosidase$활성 변화를 조사하였다. $37^{\circ}C$에서 일반 발효 특성을 측정했을 때 48시간동안 우유의 발효는 pH의 감소와 산 생성의 증가는 현저한 반면, 세포 증식을 24시간동안 증가하였으나 남은 24시간동안은 감소를 보였다. 또한 효소 반응은 ${\beta}-galactosidase$ 활성이 높은 반면, ${\alpha}-galactosidase$는 비교적 낮았으며 glucose 함량은 세포 증식기에 높았다. 두유의 경우는 우유에 비해 pH의 감소가 큰 반면 적정산도 증가는 비슷하였다. 세포 증식은 발효 2일동안 이루어졌으며, ${\alpha}-,\;{\beta}-galactosidase$ 모두 활성이 높게 나타났고, glucose 함량도 1일 동안 지속적인 증가를 나타냈다. 또한 적정 발효기간은 발효유는 24-36시간, 발효 두유는 약 24시간이 바람직한 것으로 나타났다. Bifidobacterium의 성장 촉진 인자의 영향을 발효 시간에 따른 pH와 생균수 변화로 조사한 결과, 두유에서는 fucosyllactose, 그리고 우유에서는 발효 초기에 L-cysteine·HCl, 발효 진행중에는 fucosyllactose가 효과적인 생육 인자로 작용하였다.
Bifidobacteria의 고농도 배양을 위한 배양액내 완충제로써 $CaCO_3$ 비드를 효율적으로 이용하기 위하여 유기산에 대한 비드의 반응특성과 유기산과 반응한 비드의 재사용 방안을 수학적 모델을 적용하여 검토하였다. 각각 다른 크기의 $CaCO_3$ 비드를 0.1 M의 혼합 유기산 용액과 Bifidobacterium longum ATCC 15707이 접종된 배양액에 각각 첨가하여 반응시킨 후, 비드 표면으로부터 감소한 $CaCO_3$ 양을 수학적 모델에 의하여 산출한 비드의 직경값과 micrometer를 이용하여 반응한 비드의 직경을 직접 측정한 값을 비교한 결과 서로 일치하였다. 그러므로, 수학적 모델이 유기산과 반응하는 $CaCO_3$ 비드의 반응특성을 설명하는데 유용하게 이용되어 질 수 있음을 확인하였다. 각각 다른 크기의 $CaCO_3$ 비드를 완충제로 사용한 배양액에 Bifidobacterium longum을 접종하여 $37^{\circ}C$로 20시간 배양한 후, $CaCO_3$ 비드의 완충효과와 직경의 변화 및 Bifidobacterium longum에 대한 증식도를 측정한 결과 비드의 직경이 작을수록 더높은 완충효과와 균증식도를 나타내었으며, 또한 비드의 직경이 크게 감소하였다. 균배양액으로부터 회수한 비드의 직경을 조사하여 반응된 비드의 전체표면적을 산출한 후 초기 사용한 비드의 전체표면적과 같도록 새로운 비드를 첨가하여 bifidobacteria를 배양한 결과 초기 사용한 비드의 완충효과와 유사한 결과를 나타내었으며, 또한 배양액내 균증식도도 같은 수준으로 증식되었음을 알 수 있었다. 따라서 bifidobacteria 배양에 완충제로 이용된 비드를 균배양에 완충제로 재차 이용할 경우 비드가 일정한 크기를 갖고, 감소한 표면적과 같은 양의 새로운 비드를 첨가한다면 사용된 비드의 재활용 가능성도 있다고 사료되었다.
Twelve strains of Lactobacillus acidophilus isolated from feces of human or animal sources were tested for probiotic properties such as cholesterol assimilation, bile and acid tolerances, and CLA production. Although the cultures showed some variation with respect to each test, the 12 strains could be classified into 3 groups based on their ability to assimilate cholesterol. The cholesterol assimilation showed positive correlation with bile tolerance and negative correlation with acid tolerance. The cholesterol assimilation of L. acidophilus strains may not be related to the deconjugation activity, but may in fact be attributed to its bile tolerance. CLA production by lactic acid bacteria (LAB) exhibited a wide variation that ranged from 2.69 to 7.64 mg/g fat. CLA production of Bifidobacterium longum ATCC 15707 was the highest among the LAB tested, but there was no evidence for differences in CLA production between genus and species.
In this study, phytoestrogen for the industrial production of soybean probiotics by lactic acid bacteria (LAB) was studied in a soybean extract. Soybean was fermented with LAB, Lactobacillus plantarum KCTC 3108 and Bifidobacterum longum ATCC 15707. The change in the content of various isoflavones (aglycone and glucoside) and the $\beta$-glucosidase activity in soybean during fermentation were investigated and shown to be dependent on the starter organism. Soybean extract powder fermented with L. plantarum showed the highest $\beta$-glucosidase activity and the greatest increase in the aglycone content. After 48h of fermentation, the contents of daidzin, genistin and glycitin in L. plantarum decreased from a mean initial levels of $83.03{\pm}2.17$, $168.13{\pm}8.17$ and $20.02{\pm}1.07$, respectively, to mean levels of $5.34{\pm}3.24$, $3.79{\pm}0.57$ and $1.87{\pm}1.09\;mg$/100 g. Whereas, after 48h fermentation, the contents of daidzein, genistein and glycitein increased from a mean initial levels of $8.09{\pm}0.78$, $11.20{\pm}0.84$ and $4.71{\pm}0.46$, respectively, to mean levels of $85.76{\pm}0.84$, $175.87{\pm}2.21$ and $22.41{\pm}0.91\;mg$/100 g. Taken together, these results suggested an increase of aglycones and decrease of glucoside in isoflavones occurred during fermentation, which coincided with an increase of $\beta$-glucosidase activity in the fermented soybean extract powder.
낮은 pH 환경에서 생장이 억제되는 혐기성 유산균인 bifidobacteria의 배양효율 증대를 위한 완충제로서 alginate로 고정화된 평균 지름 2.5 mm의 $CaCO_3$ 비드를 제조하였다. 고정화된 $CaCO_3$ 비드의 완충 효과를 조사하기 위하여 초산, 유산 및 초산과 유산을 3:2 몰농도 비율로 혼합한 산용액을 이용하여 pH 4.0으로 조정된 m-TPY 배지에 첨가되는 $CaCO_3$ 비드의 양을 달리하여 20분간 반응시킨 결과 첨가되는 $CaCO_3$ 비드의 양에 따라 다양한 pH 상승 효과가 나타남을 관찰하였고, 배양액에 첨가되는 $CaCO_3$ 비드의 양을 달리하여 bifidobacteria의 배양 특성을 조사한 결과 배양액에 첨가되는 $CaCO_3$ 비드의 양이 증가할수록 배양액내 완충능력과 균증식도가 크게 증가하였다. 또한, $CaCO_3$ 비드가 30%로 도입된 배양액에 포도당 농도를 0.5%, 1.0%, 1.5%, 2.0%, 2.5% 그리고 5.0%로 각각 첨가하여 당농도에 따른 bifidobacteria의 배양 특성을 조사한 결과 배양액내 당농도가 증가함에 따라 배양액내 균증식도와 대수기의 지속 시간이 크게 증가되었다. 따라서 bifidobacteria의 배양효율 증대를 위하여 완충제로서 고정화된 $CaCO_3$ 비드의 이용은 매우 효과적인 것으로 생각되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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