Over the past several years, research efforts have been directed both at economically producing valuable substances from the wood biomass and at producing lignolytic enzymes at a lower cost. In the present study, we found that Phellinus igniarius, the basidiomycetes, secreted lignin peroxidase as a main lignolytic enzyme, which was detected maximum activity at 16th day of culture and showed 37 kDa of molecular mass in identification by activity assay and purification by anion-exchange chromatography. The Phellinus igniarius-derived lignin peroxidase hydrolyzed steam-exploded wood (Quercus mongolica) powder into small molecules showing cytotoxicity against cancer cel1s (HepG2 hepatoma, SK-N-SH neuroblastoma, B16 melanoma, MBT-2 bladder cancer). In addition, the enzyme hydrlysates of lignins (ELg) that were extracted from the steam-exploded oak showed more potent cytotoxic effects on the cancer cells than the enzyme hydrolysates of wood biomass (EWp), indicating that the cytotoxic effect of EWp may be due to the enzyme-degraded products of lignin among the lignocellulosics. Furthermore, the cytotoxic effect of ELg on Chang, normal liver cells, was much less potent than that of ELg on HepG2 and B16 cancer cells, indicating that the cytotoxic effect of ELg may be specific for cancer cells. The present results suggest that Phellinus igniarius may be a useful resource for the large-scale production of lignin peroxidase and that the lignin peroxidase may be applied for the generation of valuable biodegradation products from wood lignocellulosics for medical use.
The antitumor components of the protoplast fusants of Lentinula edodes and Ganoderma lucidum were examined for immunological activity to elucidate the mechanism of their antitumor activity. They did not show any direct cytotoxicity against tumor cells. But being examined for immunopotentiation activity, they increased the number of colonies in the bone marrow stem cells to 3.0 times. They also increased the activities of the acid phosphatase in activated macrophages to 2.1 times and the secretion of nitric oxide in RAW 264.7 to 2.2 times, respectively. They activated the components of the alternative complement pathway. In humoral immunity. they increased the activities of the alkaline phosphatase in differentiated B cells to 1.6 times and the number of plaque forming cells to 1.8 times, respectively. In cellular immunity, they restored the depressed response of delayed type hypersensitivity in tumor bearing mice to normal level.
리그닌 분해 담자균류로 알려져 있는 느타리버섯균 No.42는 망간퍼옥시데이즈(MnP) 및 락게이즈(Lac)를 생산하였으나 글루코오스-펩톤-이스트-밀기울(GPYW)배지를 이용한 정치배양조건하에서 리그닌퍼옥시데이즈(LiP)활성은 검출되지 않았다. 한편, 동일배지에서 망간퍼옥시데이즈 활성은 11일째 80(3.6) U/flask(ml)의 최대 생산되었다. 망간퍼옥시데이즈 분리정제는 Sepha-ros CL-6B 및 Mono-Q 컬럼순으로 수행하였으며 주요 망간퍼옥시데이즈 isozyme은 단일밴드로 분자량은 36.4KDa이였다. N-말단으로부터 19개의 아미노산 배열은 단백질 자동 분석 장치로 분석한 결과 ATCADGRTTANAACCVLFP를 나타내었다. 느타리버섯균 No.42의 정치배양조건 하에서 세포외로 생산되는 중요한 망간퍼옥시데이즈 isozyme의 N-말단 아미노산 배열은 이전에 보고된 MnP3의 아미노산 배열과 동일하였다.
원형질체내에 외래유전물질 도입에 의한 균주 개발의 가능성 검토의 일환으로 사철느타리의 원형질체로부터 핵을 분리하여 느타리의 원형질체내로 전이하여 얻은 결과는 다음과 같았다. 1. 핵전이주는 크게 3가지 type으로 구분되었는데 type 1은 아주 빠른 균사생장과 clamp connection를 형성하지 않으며 CM+benomyl에서 균총분리가 나타남으로서 이질이배체로 사료되었다. type 2는 주된 핵전이주로서 모균주와 비슷하거나 다소 빠른 균사생장과 clamp connection을 지녀 자실체를 형성하였으며 heterokaryon으로서 원형질체 융합주와 유사하였다. 그러고 type 3은 핵 또는 염색체 단편의 전이로 clamp connection를 지니지 않고 아주 느리거나 MM에서 생육이 거의 불가능한 균주였다. 2. 핵전이주 및 모균주를 전기영동법으로 esterase 동위효소 pattern을 조사한 결과 핵전이주는 모균주와 구별되었는데 type 1인 이질이배체는 새로운 band를 나타내었으며, type 2와 type 3은 모균주들을 합한 것으로 보였다.
Ganoderma lucidum의 개체배양물(個體培養物)로 부터 얻은 cellulase를 ammonium sulfate fractionation으로 조정제(組精製)한 후(後) 이 효소(酵素)의 기본적(基本的)인 특성(特性)을 조사(調査)하였다. 이 효소(酵素)의 최적작용(最摘作用) pH와 온도(溫度)는 각각 pH $4.0{\sim}7.0$사이와 $50^{\circ}C$ 이하(以下)의 온도(溫度)에서는 비교적(比較的) 안정(安定)하였다. CMC-2Na분해(分解)에 대한 activation energy는 6.2 Kcal/mole이었다. $Mg^{++},\;Co^{++}$에 의해서 효소활성(酵素活性)이 증가(增加)되었으나 $Hg^{++}$에 의해서는 저해(沮害)되었다. 한편 본(本) 효소활성(酵素活性)은 SDS에 의해서 약 27%저해(沮害)된 것을 제외(除外)하고는 여러가지 chemical reagents에 의해서는 아무런 영향(影響)을 받지 않았다. 본(本) 효소(酵素)의 CMC-2Na에 대한 Km치(値)는 2.4 mg/ml였으며 CMC-2Na 이외(以外)에 천연(天然) cellulose에도 작용(作用)을 하였다.
Lim, Seon-Hwa;Kwak, A Min;Min, Kyong-Jin;Kim, Sang Su;Kang, Hee Wan
한국균학회소식:학술대회논문집
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한국균학회 2014년도 추계학술대회 및 정기총회
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pp.19-19
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2014
Pleurotus ostreatus, P. eryngii, and Flammulina velutipes are major edible mushrooms that account for over 89% of total mushroom production in Korea. Recently, Agrocybe cylindracea, Hypsizygus marmoreus, and Hericium erinaceu are increasingly being cultivated in mushroom farms. In Korea, the production of edible mushrooms was estimated to be 614,224 ton in 2013. Generally, about 5 kg of mushroom substrate is needed to produce 1 kg of mushroom, and consequently about 25 million tons of spent mushroom substrate (SMS) is produced each year in Korea. Because this massive amount of SMC is unsuitable for reuse in mushroom production, it is either used as garden fertilizer or deposited in landfills, which pollutes the environment. It is reasonably assumed that SMS includes different secondary metabolites and extracellular enzymes produced from mycelia on substrate. Three major groups of enzymes such as cellulases, xylanases, and lignin degrading enzymes are involved in breaking down mushroom substrates. Cellulase and xylanase have been used as the industrial enzymes involving the saccharification of biomass to produce biofuel. In addition, lignin degrading enzymes such as laccases have been used to decolorize the industrial synthetic dyes and remove environmental pollutions such as phenolic compounds. Basidiomycetes produce a large number of biologically active compounds that show antibacterial, antifungal, antiviral, cytotoxic or hallucinogenic activities. However, most previous researches have focused on therapeutics and less on the control of plant diseases. SMS can be considered as an easily available source of active compounds to protect plants from fungal and bacterial infections, helping alleviate the waste disposal problem in the mushroom industry and creating an environmentally friendly method to reduce plant pathogens. We describe extraction of lignocellulytic enzymes and antimicrobial substance from SMSs of different edible mushrooms and their potential applications.
This study aimed to investigate the enzymatic hydrolysis of mannitol using Viscozyme$^{(R)}$ L, Celluclast$^{(R)}$ 1.5 L, Saczyme$^{(R)}$, Novozym$^{(R)}$, Fungamyl$^{(R)}$ 800 L, Driselase$^{(R)}$ Basidiomycetes sp., and Alginate Lyase, and to optimize of reaction conditions for production of reducing sugar. Response surface methodology (RSM) based on central composite rotatable design was used to study effects of the independent variables such as enzyme (1-9% v/w), reaction time (10-30 h), pH (3.0-7.0) and reaction temperature ($30-70^{\circ}C$) on production of reducing sugar from mannitol. The coefficient of determination ($R^2$) of $Y_1$ (yield of reducing sugar by Viscozyme$^{(R)}$ L) and $Y_3$ (yield of reducing sugar by Saczyme$^{(R)}$) for the dependent variable regression equation was analyzed as 0.985 and 0.814. And the p-value of $Y_1$ and $Y_3$ showing 0.000 and 0.001 within 1% (p < 0.01), respectively, was very significant. The optimum conditions for production of reducing sugar with Viscozyme$^{(R)}$ L were 9.0 % (v/w) amount of enzyme, 30.0 hours of reaction time, pH 4.5 and $30.0^{\circ}C$ of reaction temperature, and those with Saczyme$^{(R)}$ were 9.0% (v/w) of amount of enzyme dosage, 30.0 h of reaction time, pH 7.0 and $30.0^{\circ}C$ of reaction temperature, consequently, the predicted reducing sugar yields were 22.5 and 27.9 mg/g-mannitol, respectively.
Han, Jae Woo;Kim, Bomin;Oh, Mira;Choi, Jaehyuk;Choi, Gyung Ja;Kim, Hun
Mycobiology
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제48권4호
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pp.326-329
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2020
Valuable natural compounds produced by a variety of microorganisms can be used as lead molecules for development of new agrochemicals. Furthermore, high-throughput in vitro screening systems with specific modes of action can increase the probability of discovery of new fungicides. In the current study, a rapid assay tested with various microbes was developed to determine the degree of respiratory inhibition of Saccharomyces cerevisiae in two different liquid media, YG (containing a fermentable carbon source) and NFYG (containing a non-fermentable carbon source). Based on this system, we screened 100 fungal isolates that were classified into basidiomycetes, to find microbial secondary metabolites that act as respiratory inhibitors. Consequently, of the 100 fungal species tested, the culture broth of an IUM04881 isolate inhibited growth of S. cerevisiae in NFYG medium, but not in YG medium. The result is comparable to that from treatment with kresoxim-methyl used as a control, suggesting that the culture broth of IUM04881 isolate might contain active compounds showing the inhibition activity for respiratory chain. Based on the assay developed in this study and spectroscopic analysis, we isolated and identified an antifungal compound (-)-oudemansin A from culture broth of IUM04881 that is identified as Oudemansiella venosolamellata. This is the first report that (-)-oudemansin A is identified from O. venosolamellata in Korea. Taken together, the development of this assay will accelerate efforts to find and identify natural respiratory inhibitors from various microbes.
To find antitumor components in Korean basidiomycetes, the carpophores of Armillariella mellea which were collected in Gyeong Gi Province were extracted with distilled water at $90{\sim}100^{\circ}C$ for eight hours. The hot water extract was concentrated under reduced pressure, mixed with three-fold volumes of ethanol and allowed to stand at $4^{\circ}C$ overnight. The precipitate was centrifugated and lyophilized to yield a protein-polysaccharide fraction. It was examined for antitumor activity against sarcoma 180 implanted in ICR mice. The fraction showed 75.7%, 83.9%, and 94.1% of tumor inhibition ratios at the doses of 10, 20 and 50 mg/kg/day, respectively. The chemical analysis of the fraction showed that it contained a polysaccharide(41.3%) and a protein (35.0%). The hydrolyzates of the polysaccharide moiety contained fucose (4.5%), xylose (1.1%), galactose (17.4%), glucose (55.4%), mannose(19.4%), and one unknown monosaccharide. The protein moiety contained seventeen amino acids. The protein-polysaccharide from A. mellea was administered, i.p., to mice and caused an influx of polymorphonuclear leukocytes (PMN) at $5{\sim}24$ hours which was followed by an accumulation of macrophages and disappearance of the PMN at $48{\sim}72$ hours.
식용버섯의 재배와 소비가 증가해가는 중요성에 비추어 새로운 품종 육성을 위하여 국내의 주요 재배 버섯인 느타리버섯과 사철느타리버섯의 원형질체를 융합하여 종간 체세포 잡종을 선발하였으며, 그 특성을 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 느타리버섯과 사철느타리버섯의 종간 원형질체 융합율은 0.18-3.80%였다. 2. 융합된 균총의 생장은 빠른 것, 중간 그리고 아주 느린 것으로 나눌 수 있었으며 그 형태는 불규칙 하였다. 3. 선발한 40개의 체세포 잡종 모두가 정상적인 자실체를 맺었으며, 자실체의 형태가 모본과는 달리 아주 다양하게 나타났다. 4. 체세포 잡종의 자실체색은 짙은 회색을 가진 느타리버섯과 연한 백색을 가진 사철느타리버섯의 중간색을 나타내었다. 5. 무포자 또는 극히 적은량의 포자를 지닌 균주를 선발하였으며 이들의 자실체 형태는 정상이었다. 6. 수량이 다소 낮은 무포자 균주를 제외하고는 대체적으로 체세포 잡종의 자실체 수량이 모본보다 증가했다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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