• 생명과학회지
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• 제29권9호
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• pp.972-976
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• 2019

본 연구는 참까막살 에탄올 추출물이 천연 미백 소재로의 가능성을 알아보기 위해 멜라닌 함량, 세포내 tyrosinase 활성 측정 및 Western blotting 실험이 수행되었다. 참까막살 에탄올 추출물의 농도에 따른 MTT assay를 통해 세포 생존율 및 증식에 큰 영향을 미치지 않는 $500{\mu}g/ml$ 농도까지를 실험 조건으로 설정하였다. B16F10 melanoma cell의 melanin 생성에 미치는 영향을 측정한 결과 대조군에 비하여 ${\alpha}-MSH$만 처리한 경우 뚜렷하게 증가하였고, 참까막살 에탄올 추출물을 100, 300, $500{\mu}g/ml$의 농도로 각각 처리한 결과 ${\alpha}-MSH$만을 처리한 것에 비해 25%, 30%, 35%로 농도 의존적으로 감소하였다. Tyrosinase 활성도 100, 300, $500{\mu}g/ml$의 농도로 처리한 결과 ${\alpha}-MSH$만을 처리한 것에 비해 6%, 12%, 21%로 감소하였다. 참까막살 에탄올 추출물의 멜라닌 합성 관련 단백질 발현에 대한 영향을 확인하기 위하여 Western blot으로 미백관련 전사인자인 MITF, TRP-1, TRP-2, Tyrosinase 발현을 조사하였다. ${\alpha}-MSH$을 단독 처리한 경우에 각 단백질의 발현이 현저하게 증가하는 것을 확인 할 수 있었고 반면 참까막살 에탄올 추출물을 처리한 경우 농도 의존적으로 감소하는 것으로 나타났으며 특히 $500{\mu}g/ml$의 농도에서 매우 효과적으로 억제되었다. 본 연구 결과 참까막살 에탄올 추출물은 멜라닌 생합성에 관련된 유전자인 MITF, TRP-1, TRP-2, Tyrosinase의 발현을 억제하는 것으로 나타나, 향후 기능성 화장품 개발에 있어 효과적인 미백 기능성 해양 소재로 활용될 것으로 기대된다.

• 한방안이비인후피부과학회지
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• 제16권2호
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• pp.57-77
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• 2003

Objectives: The aim of this study was to investigate the depigmentation effects of Barley, Unpolished rice, Job's-tear. Metbods: We investigated that the extracts of Barley, Unpolished rice, Job's-tear inhibit activity of tyrosinase, the enzyme which convert ts 3-(3,4-dihydroxyphenyl) alanine to dopachrom in the biosynthetic process of melanin, the UV absorbance of the extracts in the UV-A region and UV-B region was measured by UV scanning, the effect of extracts on cell viability and melanin production in cultured B16 mouse melanoma cells were measured, and cytoprotective effects of extracts on PC12 cells injured by hydrogen peroxide measured by MTT assay. Results: The extracts of Barley, Unpolished rice, Job's-tear inhibited activity of tyrosinase in low density. The Barley, Job's-tear extracts not only showed inhibitory effects on melanin production in cultured B16 mouse melanoma cells, but also exhibited cytoprotective effects on PC12 cells injured by hydrogen peroxide in low density. Unpolished rice extract showed inhibitory effect on melanin production in cultured B16 mouse melanoma cells, but did not showed cytoprotective effect Barley, Unpolished rice, Job's-tear extracts did not showed an absorbance effect in the UV-A region and UV-8 region. Conclusions: These results suggest that Barley, Unpolished rice, Job's-tear inhibit melanin biosynthesis which is involved in hyperpigmentation and could be used as a whitening agent.

• 대한화장품학회:학술대회논문집
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• 대한화장품학회 2003년도 IFSCC Conference Proceeding Book II
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• pp.241-242
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• 2003

The effects of N-acetylphytospingosine(NAPS), one of the phytospingosine derivatives, on melanogenesis of B 16F 1 0 mouse melanoma cell lines were investigated. We assessed the effect of NAPS on the depigmentation of B16F10 cells. The melanin content of cells was significantly reduced by NAPS. We examined the inhibitory effect of NAPS on tyrosinase activity using L-dopa as a substrate and the results showed that tyrosinase activity was inhibited in a does-dependent manner. The mRNA level of tyrosinase as well as that of tyrosinase related protein-l (TRP-l) and tyrosinase related protein-2 (TRP-2) genes were not affected by NAPS based on a reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay. We also performed a Western blotting analysis using anti-tyrosinase antibody. It showed that there is no change in tyrosinase protein level after treatment of NAPS. These results suggest that the depigmenting mechanism of NAPS in B16F10 melanoma cells involves inhibition of melanosomal tyrosinase activity, rather than the mRNA expression or protein level of tyrosinase.

• 약학회지
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• 제47권6호
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• pp.432-437
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• 2003

It has been known that quercetin, a bioflavonoid widely distributed in fruits and vegetables as dietary-derived flavonoid and exert significant multiple biological effects such as antioxidant and anti-inflammatory, anti-tumor effects. In addition, it has been shown to have a chemoprotective role in cancer, though complex effects on signal transduction involved in cell proliferation and angiogenesis. The present study investigated whether quercetin can enhance antioxidant enzyme activity (glutathione peroxidase: GPx, superoxide dismutase: SOD, catalase: CAT) and regulate the reactive oxygen species (ROS) generation in the presence of vitamin E, L-ascorbic acid, reduced glutathione (GSH) on B16F10 murine melanoma cells. After 48h treatment of cells with quercetin in the presence of vitamin E, L-ascorbic acid, GSH, we measured the cytotoxicities by MTT assay. The cells exhibited a dose-dependent inhibition in their proliferation in the presence of vitamin E, L-ascorbic acid, GSH respectively. We also investigated the effects of antioxidant enzyme activity and ROS generation. The antioxidant enzyme activity of quercetin in the presence of vitamin E was stronger than GSH, L-ascorbic acid, the same treatments decreased ROS generation in B16F10 murine melanoma cells. Taken together, these result demonstrate that the antioxidant effect of quercetin can enhanced in the presence of vitamin E and it might plays an important role in anti-oxidative effects.

• 대한화장품학회지
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• 제31권4호
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• pp.295-304
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• 2005

알부틴, 유용성감초추출물(GLY), 아스코빌글루코사이드(AA2G), 에칠아스코빌에텔(EAE)은 현재 미백 기능성성분으로 가장 많이 사용되어지는 성분들이다. 위의 미백 성분 중 어느 성분을 같이 혼합하여 사용하였을 때 미백효과가 더 효과적인가를 알아보기 위하여 tyrosinase 활성 억제와 B-16 melanoma cells에서 MSH에 의한 멜라닌 생성 억제 정도를 측정하였다. 알부틴과 유용성감초추출물은 농도 의존적으로 정제된 tyrosinase 활성을 저해하였다. 유용성감초추출물(GLY)과 아스코빌글루코사이드(AA2G)를 같이 사용하였을 때나 유용성감초추출물(GLY)과 에칠아스코빌에텔(EAE)을 같이 사용하였을 때는 유용성감초추출물(GLY)을 단독으로 사용하였을 때보다 tyrosinase 활성 저해효과가 상승하였으나 알부틴과 다른 성분들을 같이 사용하였을 때는 그러한 현상을 보여주지 못했다. B-16 melanoma cell을 이용한 MSH로 유도된 melanin 생성실험에서는 유용성감초추출물 (GLY)과 에칠아스코빌에텔(EAE)을 같이 사용하였을 때 멜라닌 생성 억제 효과가 유용성감초추출물(GLY)을 단독으로 사용하였을 때보다 현저히 증가하였다. 유용성감초추출물(GLY), 알부틴, 아스코빌글루코사이드(AA2G), 에칠아스코빌에텔(EAE)의 복합물을 일반적인 크림제형에 혼합하여 $25^{\circ}C,\;45^{\circ}C$에서 30일간 안정성(stability)을 관찰하였으며 특이한 함량변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과로 미루어 볼 때 유용성감초추출물(GLY)과 아스코빌글루코사이드(AA2G), 에칠아스코빌에텔(EAE)은 같이 사용함으로서 미백효과를 더 상승시킬 수 있다고 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제18권3호
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• pp.298-303
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• 2008

펩타이드 문고 기술을 이용하여 흑색종 세포주인 B16FI0에 결합하는 펩타이드 리간드를 검색하였다. 먼저 세포 내부로 들어간 파지들을 선택하는 방법으로 두 번 검색한 후 표면에 결합한 파지들 가운데 트랜스페린 단백질을 이용하여 트랜스페린 수용체에 결합한 파지들만을 선별적으로 용출시키는 방법으로 세 번 검색하였다. 다음으로 이 두 가지 방법을 통해 선별된 파지들에 표현된 펩타이드들을 Pseudomonas exotoxin의 전이 영역과 촉매 영역에 융합시킨 재조합 독소들을 만들었다. B16FI0 세포에 대한 각 재조합 독소의 활성을 측정하여 일곱 개의 클론을 선택한 후 염기서열을 분석하였다. 그 결과 그 가운데 한 클론에서 표현하는 펩타이드의 아미노산 서열이 사람의 트랜스페린과 유사한 서열을 갖는 것으로 확인되었다. 그 펩타이드를 화학적으로 합성한 후 항암제를 포함하는 리포솜에 붙여 실험한 결과 트랜스페린 수용체를 통해 치료물질을 전달할 수 있는 가능성을 지닌 것으로 평가되었다.

• 한국자원식물학회지
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• 제22권5호
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• pp.477-482
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• 2009

한국에서 주요하게 재배되는 세 개의 품종(켐벨, 청포도, 머루포도)을 대상으로 껍질과 씨 추출물의 미백효능을 검색하였다. Mouse melanoma인 B16세포에 $\alpha$-MSH와 샘플을 처리하여 melanin 생성을 측정하였다. 세 품종의 껍질은 효과가 없었으며 켐벨과 청포도의 씨 추출물은 세포독성이 매우 강하였다. 머루포도 씨 추출물은 $50{\mu}g/ml$에서 대조구에 비해 melanin 생성은 $51.6{\pm}20.5%$ 이었으며 세포 생존율은 $90.4{\pm}11.3%$ 이어서 약간의 세포 독성에도 불구 melanin 생성 억제 효과가 뚜렷하였다. 머루포도 씨 추출물은 B16세포에서 $\alpha$-MSH에 의한 tyrosinase 발현량 증가를 억제하였다. 이후 연구는 1) 머루포도 씨의 생리활성 단일물질 검색과 2) $\alpha$-MSH의 신호전달 과정에 추출물 및 생리활성 단일물질이 어떻게 영향을 미치는지 하는 점이고 현재 실험에 진행 중에 있다.

• 동의생리병리학회지
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• 제19권3호
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• pp.662-670
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• 2005

Recently many efforts were focused to understand the mechanical insights of melanogenesis to develop the agents for hyper-pigmentation and hypo-pigmentation. In the melanin bio-synthetic pathway, tyrosinase is the rate limiting enzyme, and ${\alpha}$-melanocyte stimulating hormone(MSH) stimulates melanogenesis and enhances the melanin synthesis and the tyrosinase activity. The author has analyzed the effects of Biota Orientalis Folium on the basal melanogenic activities of B16 mouse melanoma cells, and on the ${\alpha}$-MSH or tyrosinase-induced melanogenesis. Biota Orientalis Folium alone markedly suppressed melanin content and tyrosinase activity in a dose-dependent manner. The decrease of cell propagation was observed in B16 cells treated with 200${\mu}$g/ml dose of Biota Orientalis Folium, indicating that Biota Orientalis Folium-induced depigmenting effect was caused by inhibition of melanin synthesis, not due to destruction of B16 cells. Pretreatment of the cells with Biota Orientalis Folium also suppressed the increase of ${\alpha}$-MSH (10 nM) induced melanin content and tyrosinase activity. Biota Orientalis Folium inhibited the revelation of ${\alpha}$-MSH induced tyrosinase protein and tyrosinase related protein and mRNA of tyrosinase in B16 melanoma cell. These results suggest that Biota Orientalis Folium inhibits melanogenesis and abrogates ${\alpha}$-MSH and tyrosinase-induced melanogenesis in B16 melanoma cells.

• 한방안이비인후피부과학회지
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• 제16권3호
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• pp.129-144
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• 2003

Recently many efforts were focused to understand the mechanical insights of melanogenesis to develop the agents for hyper-pigmentation and hypo-pigmentation. In the melanin biosynthetic pathway, tyrosinase is the rate limiting enzyme, and ${\alpha}$-melanocyte stimulating hormone(MSH) or cAMP-elevating agents stimulate melanogenesis and enhance the melanin synthesis and the tyrosinase activity. The author has analyzed the effects of Rhizoma Bletillae on the basal melanogenic activities of B16／F10 mouse melanoma cells, and on the ${\alpha}$-MSH or forskolin-induced melanogenesis. Rhizoma Bletillae alone markedly suppressed melanin content and tyrosinase activity in a dose-dependent manner. Pretreatment of the cells with Rhizoma Bletillae also suppressed the increase of ${\alpha}$-MSH (100 nM) or forskolin (20 ${\mu}M$)-induced melanin content and tyrosinase activity. The decrease in the tyrosinase activity was paralled by a decrease in the abundance of tyrosinase protein and tyrosinase promoter activity. Pretreatment of the cells with Rhizoma Bletillae also inhibited the increase of forskolin(20${\mu}M$) induced the amount of tyrosinase protein and tyrosinase promoter activity. The results of DOPA staining revealed that pretreatment of the cells with Rhizoma Bletillae showed less intensity than B16 melanoma cells stimulated with ${\alpha}$-MSH or forskolin. These results suggest that Rhizoma Bletillae inhibits melanogenesis and abrogates ${\alpha}$-MSH and cAMP-induced melanogenesis in B16 melanoma cells.

• 대한약학회:학술대회논문집
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• 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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• pp.137.2-137.2
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• 2003

Dendritic cells (DCs) are known to professional antigen presenting cell (APC). Due to the role as an effective activator of cytotoxic T Lymphocytes by expressing MHC, adhesion and co-stimulatory molecules, DCs are now widely recognized to play an important role in the immune responses to tumors.We investigated the effect of cultured DCs in murine melanoma pulmonary metastasis model. To follow the metastasis protocol, syngenic melanoma cells were inoculated intra-venously into the mouse (B16F10 into the C57BL/6)8 days prior to the first DC injection (1$\times$106 DCs/ mouse, i.p.) and the autologous tumor cell lysate pulsed-DCs were injected as a therapeutic module twice in two weeks. (omitted)