• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제10권2호
• /
• pp.275-280
• /
• 2000

The inulin fructotransferse (depolymerizing) (IFTase, EC 2.4.1.93) gene of Arthrobacter sp. A-6 was cloned and expressed in Escherichia coli and Bacillus subtilis. The IFTase gene consisted of an ORF of 1.311 nucleotides encoding a polypeptide of 436 amino acids containing a signal peptide of 31 amino acids in the N-terminus. The molecular mass of the IFTase based on the nucleotide sequence was calculated to be 46.116 Da. The recombinant E. coli $DH5{\alpha}$ cells expressing the Arthrobacter sp. A-6 IFTase gene produced most of the IFTase intracelularly. In contrast, the recombinant B. subtilis DB 104 carrying the IFTas gene on a B. subtilis-E. Coli expression vector secreted the IFTase into the culture fluid efficiently.

• 생명과학회지
• /
• 제16권1호
• /
• pp.120-125
• /
• 2006

과메기에서 histamine분해능을 가진 세균을 분리 동정하기 위하여 histamine만을 첨가한 제한배지에서 균을 분리했다. 기본적인 형태 및 생화학적 동정시험을 거쳐 10종의 시험균주를 선택하여 16S rDNA 염기서열 비교에 의한 계통발생학적 분석으로 동정하였다. 동정된 세균의 histamine분해능은 탁도측정법과 효소법에 의해 재 확인하였으며 그 실험 결과는 다음과 같다. 16S rDNA 염기서열 비교에 의한 계통 발생학적 분석을 이용하여 동정한 결과, E americana B791, Arthrobacter sp. R45S, H. marisflava, P. sp. 9B-7, Bacillus sp. LMG 21002, P. cibarius JG-220, B. megaterium KL-197 7종이 동정되었고, 각각 $99\%,\;95\%,\;98\%,\;99\%,\;99\%,\;99\%,\;98\%$의 상동성을 보였으며, 3종은 미동정되었다. 동정된 세균의 histamine분해능을 탁도측정법과 효소법에 의해 재 확인한 결과, Arthrobacter sp. R45S, H. marisflava, Bacillus sp. LMG 21002, B. megaterium KL-197이 분해능을 나타내었고, Psychrobacter sp. 9B-7은 미약한 분해능을 보였으며 미동정된 3종도 분해능이 있는 것으로 나타났다. 그리고 E. americana B791과 P. cibarius JG-220은 분해능이 불확실한 것으로 확인되었다 자반고등어에서 분리한 균주보다 시험균주 모두가 생육과 histamine의 분해속도가 비교적 빨랐다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제35권4호
• /
• pp.242-247
• /
• 1992

서울시 중량천 하수처리장의 활성오니로부터 총 20주의 pentachlorophenol(PCP) 내성균주들을 분리하여 B. sphaericus B-2와 B. schlegelii B-13를 포함한 Bacillus spp. 9주, Corynebacterium spp. 4주, Staphylococcus aureus S-1 1주, Aeromonas spp. A-19 1주, Arthrobacter LN-3 1주로 동정하였다. 이 균주들은 $200{\sim}300\;ppm$ PCP와 0.1% glucose가 포함된 mineral salt 배지에서 생육하였으며 PCP를 분해하는 종류 13주와 분해하지 못하고 흡착 혹은 흡수하는 종류 7주로 구분되었다. PCP 분해균주들은 대부분 배양 24시간후 생육이 최고에 도달하여 PCP를 약 $75{\sim}90%$ 분해하였으며 PCP 흡착 혹은 흡수하는 균주들은 흡착한 PCP를 배양 24시간 이후 또는 72시간 이후에 방출하였다. PCP 분해균주 B. sphaericus B-2, B. schlegelii B-13의 분해 산물을 TLC를 이용하여 검출한 결과 B. sphaericus B-2의 배양액에서 2-chlorophenol, B. schlegelii B-13에서는 2,4-dichlorophenol로 추정되는 물질과 4종의 분해산물로 보이는 물질들을 검출하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제6권6호
• /
• pp.402-406
• /
• 1996

Inulin fructotransferase (depolymerizing) (EC 2.4.1.93) was purified 34-fold from the culture broth of Arthrobacter sp. A-6 by using a combination of ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sepharose CL-6B chromatography and Sephacryl S-200 gel filtration. The purified enzyme converts inulin into di-D-fructofuranose dianhydride III(DFA III) and small quantities of fructo-oligosaccharides. The temperature and pH optima of the enzyme were $70^{\circ}C$ and 6.0, respectively. Molecular weight of the enzyme was determined to be 49 kDa by 12$%$ SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, and 145 kDa by Sephacryl S-200gel filtration. This indicates that the functional inulin fructotransferase of Arthrobacter sp. A-6 has a homomeric trimer structure. The enzyme had an isoelectric point of pH 4.6. The N-terminal amino acid sequence of the purified enzyme subunit was Ala-Asp-Asn-Pro-Asp-Gly(\ulcorner)-Ser-Asn-Met(or Glu)-Tyr-Asp-Val.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
• /
• 제6권1호
• /
• pp.61-66
• /
• 2001

The aim of this study was to examine how plant terpenoids, as natural growth substrates or inducers, would affect the biodegradation of PCB congeners. Various PCB degraders that could grow on biphenyl and several terpenoids were tested for their PCB degradation capabilities. Degradation activities of the PCB congeners, 4,4-dichlorobiphenyl (4,4-DCBp) and 2,2-dichlorobiphenyl (2,2-DCBp), were initially monitored through a resting cell assay technique that could detect their degradation products. The PCB degraders, Pseudomonas ((S)-(-) limonene, p-cymene and $\alpha$-terpinene) whereas Arthrobacter sp. B1B could not grow on the terpenoids as a sole carbon source. The B1B strain grown on biphenyl exhibited good degradation activity for 4,4-DCBp and 2,2-DCBp, while the activity of strains P166 and T104 was about 25% that of the B1B strain, respectively. Concomitant GC analysis, however, demonstrated that strain T104, grown on (S)-(-) limonene, p-cymene and $\alpha$-terpinene, could degrade 4,4-DCBp up to 30%, equivalent to 50% of the biphenyl induction level. Moreover, strain T104 grown on (S)-(-) limonene, could also degrade 2,2-DCBp up to 30%. This indicates that terpenoids, widely distributed in nature, could be utilized as both growth and/or inducer substrate(s) for PCB biodegradation in the environment.

• 한국환경과학회지
• /
• 제15권10호
• /
• pp.983-988
• /
• 2006

The textile remains have been affected largely by environmental factors including microorganisms because they were composed of organic compounds to be easy to damage. So, we selected 8 strains of the 131 isolated strains from museum environments and textile remains by high pretense activity, and identified them for measuring the antibacterial activity of Gingko biloba extracts. They were identified Genus Arthrobacter spp. 3 strains (Arthrobacter nicotiannae A12, Arthrobacter sp B12, Arthrobacter oxidans B13), Cenus Bacillus spp. 2 strains (Bacillus licheniformis D9, Bacillus cereus D33), Genus Pseudomonas spp. 2 strains (Pseudomonas putida A24, Pseufomonas fluorescene C21) and a Genus Staphylococcus sp. 1 strain (Staphylococcus pasteuri D3) as closest strains through the blast search of NCBI. Though antibacterial activity of the extracts of Gingko biloba leaves as MIC was lower than that of other pharmaceutical antibiotics. However the extracts was crude extracts, the extracts might have good antibacterial against most of the isolates from museum. Especially, the antifungal activity of Gingko biloba is known previously, the extracts of Gingko biloba leaves has possibility of usage as a good natural material for conservation of remains.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제9권6호
• /
• pp.804-810
• /
• 1999

There is a possibility that carvone, a monoterpene from spearmint (Mentha spicata), could induce the bph degradative pathway and genes in Alcaligenes eutrophus H850, which is a known Gram-negative PCB degrader with a broad substrate specificity that was thoroughly investigated with Arthrobacter sp. BIB, a Gram-positive PCB degrader. The strains BIB and H850 were unable to utilize and grow on the plant terpene [(R)-(-)-carvone] (50ppm) to be recognized as a sole carbon source. Nevertheless, the carvone did induce 2,3-dihydroxybiphenyl 1,2-dioxygenase (encoded by bphC) in the strain B lB, as observed by a resting cell assay that monitors accumulation of a yellow meta ring fission product from 4,4'-dichlorobiphenyl (DCBp). The monoterpene, however, did not appear to induce the meta cleavage pathway in the strain H850. Instead, an assumption was made that the strain might be using an alternative pathway, probably the ortho-cleavage pathway. A reverse transcription (RT)-PCR system, utilizing primers designed from a conserved region of the bphC gene of Arthrobacter sp. M5, was employed to verify the occurrence of the alternative pathway. A successful amplification (182bp) of mRNA transcribed from the N-terminal region of the bphC gene was accomplished in H850 cells induced by carvone (50ppm) as well as in biphenyl-growth cells. It is, therefore, likely that H850 possesses a specific PCB degradation pathway and hence a different substrate specificity compared with B1B. This study will contribute to an elucidation of the dynamic aspects of PCB bioremediation in terms of roles played by PCB degraders and plant terpenes as natural inducer substrates that are ubiquitous and environmentally compatible.

• 대한환경공학회지
• /
• 제35권7호
• /
• pp.503-508
• /
• 2013

본 연구의 목적은 가축사체 매몰지 토양의 침출수 오염에 따른 병원성 미생물에 의한 잠재적 위해성을 평가하기 위하여 미생물 군집을 조사하는 것이다. 경기도 지역에 위치한 가축사체 매몰지 세 군데(A, B, C) 토양을 대상으로 DNA를 추출하여, 16S rRNA 염기서열을 분석을 통해 미생물 군집을 조사하였다. 연구결과를 문(phylum)별로 구분해보면, A 토양은 전체 토양미생물이 Proteobacteria (100%) 1개의 문으로 동정되었으며, B 토양은 Actinobacteria (66.4%) > Proteobacteria (31.1%) > Bacteriodetes (2.1%) > Acidobacteria (0.3%) 순으로, C 토양은 Actinobacteria (63.1%) > Proteobacteria (36.9%) 순으로 분포하였다. 속(genus)별로 구분해보면, A 토양에서는 Pseudomonas가 98% 비율로 나타났고，B와 C 토양의 경우 Arthrobacter이 각각 68, 61%로 우점하였다. 세 군데(A, B, C) 토양 미생물 군집의 종 다양성을 Shannon 지수에 근거하여 분석한 결과, B 토양(3.45)과 C 토양(3.43)은 유사한 수준이었으나, A 토양(2.37)은 가장 낮게 계산되었다. 또한, 분석결과 Salmonella, Campylobacter 그리고 Clostridium perfringens과 같은 병원균도 발견되지 않았으나, 세균혈증을 일으키는 Ralstonia pickettii가 높은 농도로 관찰되었다. 본 연구에 사용된 가축 매몰지 토양은 침출수에 의한 미생물학적 오염도가 낮은 것으로 판단되지만, 가축매몰에 따른 병원성 미생물에 의한 토양의 잠재적 위해성을 평가하기 위하여 지속적인 모니터링이 필요하다.

• 식물병연구
• /
• 제19권1호
• /
• pp.12-20
• /
• 2013

상추 균핵병균에 대하여 길항력을 나타내는 세균을 분리하기 위해 2007년부터 2008년에 걸쳐 초봄에 경기도 남양주시 관내 상추 시설재배지에서 균핵병이 발병한 포장의 토양을 수집하였다. 수집한 토양을 희석평판법을 이용하여 총 196개의 세균을 분리하였고, 분리한 세균을 실험실에서 균핵병균(Sclerotinia sclerotiorum)과의 대치배양을 통해 균사생장억제율이 80% 내외로 우수한 길항력을 나타내는 26개 균주를 선발하였다. 선발된 26개 균주를 16S rDNA염기서열분석으로 동정한 결과 Bacillus megaterium, B. cereus, B. muralis, B. velezensis, Arthrobacter nicotianae, A. oryzae, Pseudomonas fuscovaginae, P. flavescens, Stenotrophomonas maltophilia, Sphingobacterium faecium으로 동정되었다. 길항세균의 균사생장억제율이 높게 나타낸 10개 균주를 대상으로 여름철 포트실험을 통해 균핵 생존에 미치는 영향을 조사한 결과 B. cereus(C210)와 B. megaterium(DK6)이 각각 20%와 35%의 균핵 생존율을 나타냈다. 겨울철에 온실 내에서 포트실험을 통해 상추 균핵병에 대해 방제효과를 조사한 결과 대조구가 80%의 발병율을 나타냈으나, 26개 균주 중 9개 균주가 20% 정도의 발병율을 나타내 향후 상추 균핵병의 생물적 방제를 위한 길항세균으로서의 활용가치가 기대된다.

• 미생물학회지
• /
• 제41권3호
• /
• pp.195-200
• /
• 2005

Comamonas sp. strain DJ-12의 pmcABCDEFT 유전자군은 protocatechuate (PCA)의 분해과정에 관여하는 PCA 4,5-dioxygenase, 4-carboxy-2hydroxymuconic semialdehyde (CHMS) dehydrogenase, 2-pyrone04,5-dicarboxylate(PDC) hydrolase, 4-oxalomesaconate (OMA) hydratase, 그리고 4-oxalocitramalate (OCM) aldolase 등의 효소들을 생산하는 유전자들과 transporter의 역학을 하는 유전자로 각각 확인되었다. 이 유전자군은 Comamonas sp. strain DJ-12의 chromosomal DNA로부터 얻은 PCR 산물들을 T-vector에 ligation하여 재조합 플라스미드 pMT1, pMT2, pMT3, pMT4, pMT5, pMT6, pMT7, pMT8, pMT9, pMT10을 제조하였다. 이들 재조합 플라스미드의 염기서열을 분석한 결과 PCA 4,5-dioxygenase 유전자는 alpha(pmcA)와 beta(pmcB) 두 개의 subunit으로 구성 되어있으며, 각각 450 bp와 870 bp이었다. CHMS dehydrogenase 유전자(pmcC)는 960 bp, PDC hydrolase 유전자(pmcD)는 918 bp이였으며, OMA hydratase 유전자(pmcE)는 1029 bp, OCM aldolase 유전자 (pmcF)는 689 bp, 그리고 transporter 유전자(pmcT)는 1,398 bp이였다. 이들 pmc 유전자들은 pmcT-pmcE-pmcF-pmcD-pmcA-pmcB-pmcC의 순서로 배열되어 있었다. Comamonas sp. strain DJ-12의 pmcABCDEFT 유전자산물의 아미노산 서열을 분석한 결과, Comamonas testosteroni BR6020 및 Psedomonas ochraceae NG.J1와 $94{\~}98\%$의 높은 유사성을 보였고, 그 유전자들의 배열 순서도 동일하였다. 그러나 Sphingomonas paucimobilis SYK-6, Sphingomonas sp. LB126, 그리고 Arthrobacter keyser 12B와는 아미노산 서열이 $52{\~}74\%$의 유사성을 보였고, 그 유전자의 배열 구조도 상이하였다.