Adaptive development of early stage embryo is well established and recently it is explored that the mammalian embryos also have adaptive ability to the stressful environment. However, the mechanisms are largely unknown. In this study, to evaluate the possible role of aquaporin in early embryo developmental adaptation, the expression of aquaporin (AQP) 5 gene which is detected during early development were examined by the environmental condition. To compare expression patterns between in vivo and in vitro, we conducted quantitative RT-PCR and analyzed localization of the AQP5 by whole mount immunofluorescence. At in vivo condition, Aqp5 expressed in oocyte and in all the stages of preimplantation embryo. It showed peak at 2-cell stage and decreased continuously until morula stage. At in vitro condition, Aqp5 expression pattern was similar with in vivo embryos. It expressed both at embryonic genome activation phase and second mid-preimplantation gene activation phase, but the fold changes were modified between in vivo embryos and in vitro embryos. During in vivo development, AQP5 was mainly localized in apical membrane of blastomeres of 4-cell and 8-cell stage embryos, and then it was localized in cytoplasm. However, the main localization area of AQP5 was dramatically shifted after 8-cell stage from cytoplasm to nucleus by in vitro development. Those results explore the modification of Aqp5 expression levels and location of its final products by in vitro culture. It suggests that expression of Aqp5 and the roles of AQP5 in homeostasis can be modulated by in vitro culture, and that early stage embryos can develop successfully by themselves adapting to their condition through modulation of the specific gene expression and localization.
The kinetics of the loss of leaf fresh weight during incubation of barley and rice leaves in 9% or 15% NaCl solutions were biphasic, indicating the existence of a controlling mechanism for water transport. The first rapid phases reached their plateaus within 1 and 2 h in the case of rice and barley leaves, respectively. When barley leaves were fed with sodium fluoride, an inhibitor of phosphatase inhibitor, through their epicotyls for 3 h in darkness, prior to the treatment of NaCl, the biphasic pattern shown during NaCl treatment was disappeared resulting in linear decreases in the relative fresh weights. The results suggest that NaF accelerates salt-induced water efflux from plant cells, possibly by inhibiting the protection mechanism that may act in NaF-untreated leaves. The linear water loss can be explained in terms of phosphorylation of aquaporin by blocking its dephosphorylation in the presence of the phosphatase inhibitor to keep aquaporin in a phosphorylated form. However, the effect of NaF shown in barley leaves were not observed in rice. These results suggest that the regulation of water transport depends on plant species, and the mechanism for the controlling water transport in rice is different from that of barley.
Xenopus oocyte을 이용하여 식물 aquaporin 단백질의 물 흡수 활성을 측정하기 위한 최적의 조건을 확립하기 위하여 애기장대의 AtPIP2-1유전자를 클로닝하여 cRNA 제작용 vector, buffer osmolarity, hypoosmotic shock 처리시간, 발현 단백질의 localization등을 검토한 결과, Xenopus ${\beta}$-globin 유전자의 5'과 3' UTR(untranlation region)'염기서열을 갖고 있는 pGEMHE vector가 단백질 생산에 더욱 효과적이며, 이 vector를 시용하였을 경우 hypoosomotic stress는 1/2ND buffer에서 6분간 처리시 가장 큰 차이를 볼 수 있었으며, 애기장대 AtPIP2-1단백질과 GFP를 결합시켜 발현시킬 경우 GFP가 plasmamembrane에 위치하는 것을 보아 올바른 subcelluar localization이 이루어지는 것을 확인할 수 있었다.
Objectives : This research was performed to investigate the effect of acupuncture at the $KI_2\;KI_{10}\;HT_8\;HT_3$, on Aquaporin-2(AQP2) expression related with the renal functions in rats. Methods : Acupuncture was performed during 100-seconds, 6-times, at 150-seconds intervals under anesthesia in rats. We observed rats' mean arterial pressure(MAP), heart rate(HR), renal sympathetic nerve activity(RSNA) during acupuncture and AQP2 expression by western blot method and atrial natriuretic peptide(ANP), renin, norepinephrine of plasma after decapitation. Results : The AQP2 expression was significantly increased in $HT_8$ group, but decreased in $KI_{10}$ group. Average MAP during 6-times acupuncture was significantly increased in $HT_8$ group. Average HR was significantly increased in $HT_8$ group, Average RSNA was increased in $KI_{10}$ group, but that was marginally increased in $KI_{10}$ group. Plasma renin concentration was increased in $KI_2,\;HT_3$, groups. Plasma ANP show a tendency to decrease in $KI_10\;HT_3$ groups, increased in $KI_2,\;HT_3$ but not significant. Plasma norepinephrine concentration was significantly decreased in $KI_{10},\;HT_3$ groups. Conclusions : These results suggested that acupuncture at $HT_8$ activate renal function to reuptake, but $KI_{10}$ show a decline on effect of AQP2 expression, blood pressure, nerve activity and renin.
신령버섯(Agaricus blazei Murill)은 항암, 면역력 개선, 항비만 등 다양한 효능이 알려져 있으며, 피부 효능으로는 항산화, 항염, 미백 등에 대하여 보고되었다. 이러한 효능을 뒷받침하기 위하여, 신령버섯의 성분 연구가 진행되었다. 따라서 본 연구에서는 신령버섯 추출물의 피부 효능을 재확인하고 유용한 효능성분을 밝혀내어 이를 화장품 소재로서 이용하고자 하였다. 신령버섯 추출물은 100 ㎍/mL에서 멜라닌 합성 저해, 콜라겐 합성 증진, 보습과 관련된 유전자(hyaluronan synthase-2, 3와 aquaporin-3) 발현 증가를 나타내었다. 이들 화합물은 분광학적 데이터와 문헌값을 비교하여 ergosterol (1), 5-dihydroergosterol (2), cerevisterol (3), cerebroside B (4), cerebroside D (5), adenosine (6), 및 benzoic acid (7)로 동정하였다. 이들 중 비교적 효능이 알려지지 않은 3종의 sterol (1-3)과 2종의 glucosylceramide (4, 5)에 대하여 피부효능을 평가하였으며, 그 결과 5-dihydroergosterol (2)이 마우스 흑색종 세포에서 멜라닌 생성을 억제하였으며, 또한 인간 진피 섬유아세포 세포에서 콜라겐 생합성 촉진하였다. 그리고 cerevisterol (3), cerebroside B (4), cerebroside D (5)는 마우스 대식세포에서 NO 생성을 억제하였으며, 특히 cerebroside D (5)는 인간각질형성세포에서 hyaluronan synthase-2와 aquaporin-3 유전자 발현을 증가시켰다. 따라서 신령버섯 추출물과 분리 화합물은 화장품 소재로 활용 가능 할 것으로 생각된다.
The spermatozoa become mature in the epididymis which is divided into initial segment and caput, corpus, and cauda epididymis. The water movement across the epididymal epithelium is important for creating luminal microenvironment for sperm maturation. Aquaporins (Aqps) are water channel proteins, and expression of Aqps is regulated by androgens. The current research was focused to examine expressional regulation of Aqp1 and Aqp9 by an androgenic-anabolic steroid, nandrolone decanoate (ND). The ND at the low dose (2 mg/kg body weight/week) or high dose (10 mg) was subcutaneously administrated into male rats for 2 or 12 weeks. Transcript levels of Aqp1 and Aqp9 were determined by quantitative real-time polymerase chain reaction (PCR) analyses. In the initial segment, level of Aqp1 was decreased with 12 week-treatment, while Aqp9 level was decreased by the high dose treatment for 12 weeks. In the caput epididymis, Aqp9 expression was decreased by the low dose treatment. The 2 week-treatment resulted in an increase of Aqp1 level but a decrease of Aqp9 expression in the corpus epididymis. In the corpus epididymis, the 12 week-treatment at the low dose caused the reduction of Aqp1 and Aqp9 levels, but the high dose treatment resulted in an increase of Aqp1 expression and a decrease of Aqp9 level. In the cauda epididymis, Aqp1 expression was decreased by 2 and 12 week-treatments, while increases of Aqp9 levels was detected with the high dose treatment for 2 weeks and with 12 week-treatment. These findings indicate differential regulation of Aqp1 and Aqp9 expression among epididymal segments by ND.
The present study was examined the effects of Bojungchiseup-tang water extract on the renal expression of renal function regulatory proteins including aquaporin 2 (AQP 2), aquaporin 3 (AQP 3), Na, K-ATPase α1 subunit, endothelial nitric oxide synthase (ecNOS), and inducible nitric oxide synthase (iNOS) in rats. The renal expression of AQP 3 was attenuated in rats administered with Bojungchiseup-tang water extract without altered expression of AQP 2, while ecNOS was up-regualted. Oral administration of Bojungchiseup-tang water extract (40 ㎕/100 g) also attenuated the renal expression of Na, K-ATPase α1-subunit and iNOS protein. These results suggest that the diuretic and natriuretic effects of Bojungchiseup-tang maybe causely related with a decreased expression of AQP 3 and increased expression of ecNOS.
Oxidative stress-induced melanocyte apoptosis is linked to the immune system and plays a critical role in the pathogenesis of vitiligo. Aquaporin-3 (AQP3), which is downregulated in vitiligo keratinocytes, regulates intracellular H2O2 accumulation. However, the role of AQP3 in oxidative stress is uncertain in vitiligo. This study investigated the effect of downregulated AQP3 on oxidative stress in vitiligo using lesional and non-lesional skin specimen sets from vitiligo patients and primary cultured adult normal human epidermal keratinocytes, with or without downregulation and overexpression of AQP3 in the presence or absence of H2O2 treatment. The levels of nuclear factor E2-related factor 2 (NRF2) and/or its main target, NAD(P)H quinone dehydrogenase 1 (NQO-1), were lower in the lesional keratinocytes and cultured keratinocytes with AQP3 knockdown, but were increased in keratinocytes upon AQP3 overexpression. Ratios of NRF2 nuclear translocation and NQO-1 expression levels were further reduced in AQP3-knockdown keratinocytes following H2O2 treatment. The conditioned media from AQP3-knockdown keratinocytes treated with H2O2 contained higher concentrations of reactive oxygen species (ROS). Moreover, the number of viable melanocytes was reduced when the conditioned media were added to the culture media. Overall, AQP3 downregulation in the keratinocytes of patients with vitiligo can induce oxidative stress in neighboring melanocytes, leading to melanocyte death.
Whether there exists a sympathetic neural regulation on the aquaporin (AQP) channels in the kidney was examined. Male Sprague-Dawley rats were used. They were renal nerve denervated by stripping the nervous and connective tissues passing along the renal artery and vein, and painting these vessels with 10% phenol solution through a midline abdominal incision. Three days later, the expression of AQP1-4 proteins in the denervated kidneys was determined. The content of norepinephrine was found significantly decreased following the denervation. Accordingly, the expression of AQP2 proteins was markedly decreased. The expression of AQP3 and AQP4 was also slightly but significantly decreased, while that of AQP1 was not. Neither the basal nor the AVP-stimulated accumulation of cAMP was significantly affected in the denervated kidney. It is suggested that the sympathetic nervous system has a tonic stimulatory effect on AQP channels in the kidney.
Mannosylerythritol lipids (MELs) are glycolipids and have several pharmacological efficacies. MELs also show skin-moisturizing efficacy through a yet-unknown underlying mechanism. Aquaporin-3 (AQP3) is a membrane protein that contributes to the water homeostasis of the epidermis, and decreased AQP3 expression following ultraviolet (UV)-irradiation of the skin is associated with reduced skin moisture. No previous study has examined whether the skin-moisturizing effect of MELs might act through the modulation of AQP3 expression. Here, we report for the first time that MELs ameliorate the UVA-induced downregulation of AQP3 in cultured human epidermal keratinocytes (HaCaT keratinocytes). Our results revealed that UVA irradiation decreases AQP3 expression at the protein and messenger RNA (mRNA) levels, but that MEL treatment significantly ameliorated these effects. Our mitogen-activated protein kinase inhibitor analysis revealed that phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase (JNK), but not extracellular signal-regulated kinase or p38, mediates UVA-induced AQP3 downregulation, and that MEL treatment significantly suppressed the UVA-induced phosphorylation of JNK. To explore a possible mechanism, we tested whether MELs could regulate the expression of peroxidase proliferator-activated receptor gamma ($PPAR-{\gamma}$), which acts as a potent transcription factor for AQP3 expression. Interestingly, UVA irradiation significantly inhibited the mRNA expression of $PPAR-{\gamma}$ in HaCaT keratinocytes, whereas a JNK inhibitor and MELs significantly rescued this effect. Taken together, these findings suggest that MELs ameliorate UVA-induced AQP3 downregulation in HaCaT keratinocytes by suppressing JNK activation to block the decrease of $PPAR-{\gamma}$. Collectively, our findings suggest that MELs can be used as a potential ingredient that modulates AQP3 expression to improve skin moisturization following UVA irradiation-induced damage.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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