Peptidylarginine deiminase type 2 (PADI2) deiminates (or citrullinates) arginine residues in protein to citrulline residues in a $Ca^{2+}$-dependent manner, and is found in lymphocytes and macrophages. Vimentin is an intermediate filament protein and a well-known substrate of PADI2. Citrullinated vimentin is found in ionomycin-induced macrophage apoptosis. Citrullinated vimentin is the target of anti-Sa antibodies, which are specific to rheumatoid arthritis, and play a critical role in the pathogenesis of the disease. To investigate the role of PADI2 in apoptosis, we generated a Jurkat cell line that overexpressed the PADI2 transgene from a tetracycline-inducible promoter, and used a combination of 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate and ionomycin to activate Jurkat cells. We found that PADI2 overexpression reduced the cell viability of activated Jurkat cells in1a dose- and time-dependent manner. The PADI2-overexpressed and -activated Jurkat cells presented typical manifestations of apoptosis, and exhibited greater levels of citrullinated proteins, including citrullinated vimentin. Vimentin overexpression rescued a portion of the cells from apoptosis. In conclusion, PADI2 overexpression induces apoptosis in activated Jurkat cells. Vimentin is involved in PADI2-induced apoptosis. Moreover, PADI2-overexpressed Jurkat cells secreted greater levels of vimentin after activation, and expressed more vimentin on their cell surfaces when undergoing apoptosis. Through artificially highlighting PADI2 and vimentin, we demonstrated that PADI2 and vimentin participate in the apoptotic mechanisms of activated T lymphocytes. The secretion and surface expression of vimentin are possible ways of autoantigen presentation to the immune system.
The vaccinations of susceptible children and postpubertal females are the major means to prevent congenital rubella syndrome(CRS). Another means for reducing the CRS is therapeutic abortion or fetal monitoring for women who are infected in the first four months of pregnancy. We could not estimate the incidence of CRS in Korea, because there was no surveillance system for rubella and CRS. Nationwide vaccination program for 15months infant had been started early 1980s. So, most women at childbearing age during study period were not received rubella vaccination. We set forth CRS management system for pregnant women in two rural county of Kyonggi province, Korea. In this system, the presence of rubella IgG and IgM antibodies for early pregnant women were examined with MEIA(Microparticle Enzyme Immunoassay) method by IMx automated analyzer $Abbott^(R)$. The infected pregnant women followed up in order to confirm their childrens CRS. This study was carried out from Mu. 1993 to Jun. 1994, and pregnant women examined were 874 persons. The results were summarized as follows. The overall positive .ate of rubella IgG antibody was 94.5%(826/874). The positive rate was significantly increase as the age increased, and reached 100% in pregnant women who were over 35 years old. This results suggest that a meaningful number of women are infected during childbearing years. The geometric mean titer of IgG of sero-positive subjects was significantly declined as the age increased. On the question about history of URI symptoms and rash in pregnancy, 20.7% of respondents checked on URI symptoms with .ash, 13.5% only URI symptoms without .ash, and 65.8% no symptoms. However there was no demonstrable association between the rubella like infection history in pregnancy and the rubella IgG and IgM antibody status. Rubella infection .ate in pregnant women was 0.9%(95% CI 0.4-1.8%). Two of these 8 infected pregnancies were terminated by therapeutic abortion. One of them was not followed. Five babies had no gross anomalies at birth. In Dec. 1996, three of five babies were normal appeared infants. Two of them were not followed. Throughout this study results, we confirmed the need of CRS management system for pregnant women, in Korea.
Objectives : Cases of human brucellosis in Korea have recently increased due to the increasing incidence of bovine brucellosis. The authors conducted this study to elucidate the status of brucellosis through seroepidemiologic study. Methods : We selected our study population from a high risk group. We conducted a questionnaire survey and obtained blood samples to determine the seroprevalence of brucellosis antibodies for 10 days in February, 2005. The titers of brucellosis were measured by the combination of standard tube agglutination test (STA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test. Results : Our study subjects comprised 1,075 cases: 971 livestock workers, 51 veterinarians, and 53 artificial inseminators. In the STA test, 27 cases (2.5%) had titers of greater than or equal to 1:20. Of 1,068 cases (7 cases were excluded due to previous brucellosis), 7 cases of brucellosis were diagnosed with titers of 1:160, giving a seroprevalence of brucellosis of 0.66%. The seroprevalence in the male group was 0.95%, and that of livestock workers, veterinarians, and artificial inseminators was 0.52%, 4.17%, and 0.00%, respectively. The Spearman's correlation coefficient between the positive rate of bovine brucellosis per capita and household and human brucellosis was 0.806 and 0.744, respectively. The concordance rate between the Korea National Institute of Health and the Gyeongsangbuk-do Institute of Health and Environment by the STA and ELISA tests was 94.7% and 100.0%, respectively. Conclusions : The study results indicated in higher seroprevalence rate among veterinarians than among livestock workers and artificial inseminators. Because veterinarians may be exposed to this high risk, effective working guidelines for veterinarians to guard against brucellosis must be developed. Moreover, more extensive epidemiologic research for laboratory workers and meat handlers is needed.
Background: Synergistic antitumor effects of the combined chemoimmunotherapy based on dendritic cells have been reported recently. The aim of this study is to search new applicability of gefitinib into the combination treatment through the confirmation of gefitinib effects on the monocyte derived dendritic cells (moDCs); most potent antigen presenting cell (APC). Methods: Immature and mature monocyte-derived dendritic cell (im, mMoDC)s were generated from peripheral blood monocyte (PBMC) in Opti-MEM culture medium supplemented with IL-4, GM-CSF and cocktail, consisting of TNF-${\alpha}$ (10 ng/mL), IL-$1{\beta}$ (10 ng/mL), IL-6 (1,000 U/mL) and $PGE_2$ ($1{\mu}/mL$). Various concentrations of gefitinib also added on day 6 to see the influence on immature and mature MoDCs. Immunophenotyping of DCs under the gefitinib was performed by using monoclonal antibodies (CD14, CD80, CD83, CD86, HLA-ABC, HLA-DR). Supernatant IL-12 production and apoptosis of DCs was evaluated. And MLR assay with $[^3H]$-thymidine uptake assay was done. Results: Expression of CD83, MHC I were decreased in mMoDCs and MHC I was decreased in imMoDCs under gefitinib. IL-12 production from mMoDCs was decreased under $10{\mu}M$ of gefitinib sinificantly. Differences of T cell proliferation capacity were not observed in each concentration of geftinib. Conclusion: In spite of decreased expressions of some dendritic cell surface molecules and IL-12 production under $10{\mu}M$ of gefitinib, significant negative influences of gefitinib in antigen presenting capacity and T cell stimulation were not observed.
단세포군항체(monoclonal antibody)를 이용한 항암제치료법이 다각적인 방면으로 실험되고 있으나, 환자에 주입된 단세포군항체중에서 실제의 암전달량은 언제나 기대치에 미치지 못하고 있다. 그러므로, 효과적인 항암제치료와 조기암진단을 위하여 암내부에서의 물질전달에 미치는 인자들의 포괄적인 측정이 필요하였다. 본 실험에서는 면역결핍누드쥐에 이식된 neurobastoma의 물질전달환경을 이해하기 위하여 성장특성과 포도당대사속도(GMR)를 측정하였으며, 세포간체액압력(IFP), 국부혈액속도(BPR)와 pH를 높이 2cm의 암에서 반경방향으로 측정하였다. 성장특성으로써 체적배가시간을, 세포활동성으로써 GMR를 측정하였더니, 각각 8.1일 (SD 0.44일), 23.53 mg/min/100g(SD 3.54 mg/min/100 g)이었다. 암중심 IFP는 암부피가 커짐에 따라 증가하여 높이 3cm의 암에서는 12.3mmHg(SD 2.6mmHg)이 되었다. 반경방향에 따른 IFP, BPR, pH를 특정한 결과, 암중심에 접근할수록 IFP는 증가되었고, 반면에 BPR과 pH는 감소되었다. 이로써 암내부에서의 증가된 IFP, 감소된 BPR과 pH가 단세포군항체와 그 공합체의 내부전달을 저해하는 원인으로 작용할 수 있다는 사실이 제시되었으며, 이들 인자들을 적당한 기술로 조절하여 더 많은 단세포군항체를 암내부로 전달시킬 수 있을 것으로 판단된다.
인체에 고주파 에너지를 가하면 진동 폭이 매우 짧아서 직류 전류 이용 시 발생하는 전해질 화상이 일어나지 않으며 이온분자, 분극분자 등이 초당 4만 번 이상 진동을 하면서 마찰열로 전환되어 심부열을 발생시켜 모세혈관의 혈류량은 휴식 시 보다 4~5배 증가하여 산소, 영양물질, 항체, 백혈구 등 공급의 증가한다. 또한 진동 폭과 맥동기간이 매우 짧아 전기 화학적 반응이 일어나지 않으며 감각신경과 운동신경을 자극하지 않는 물리적 인자치료 방법이다. 본 연구에서는 고주파통증치료기를 사용하여 젊은 정상 성인을 대상으로 등장성운동을 시키고, 등장성 운동 시 근전도 데이터를 측정하여 운동신경 응답의 변화에 미치는 영향을 확인하여 재활치료 접목시키고자 하였다. 윗팔두갈래근의 등장성 운동을 실시할 때 발생되는 근전도 데이터와 운동 후 고주파통증치료기사용 후 측정된 근전도 데이터를 각각 RMS하여 t-검정을 통하여 검증을 실시하였으며, 남녀 모두 t값, p값이 유의수준(<.05) 보다 작게 나와 유의한 차이가 있다는 것을 확인하였다.
본 연구에서는 특정한 생물학적 의미를 갖는 물질들간의 결합 및 분리과정을 실시간에 측정하기 위해 빠른 응답특성과 높은 감도를 갖는 표면 플라즈몬 공명 (Surface Plasmon Resonance, SPR) 현상을 이용한 센서 시스템을 제작하였다. SPR 시스템의 프리즘 표면에 일정 두께의 금 박막이 진공증착된 센서칩을 두고 이 아래에 위치한 시료충전셀에 살모넬라 (salmonella) 항체를 주입시켜 항체가 센서칩 표면에서 자기집합 (self-assembly) 함에 따라 공명각이 변화하는 현상을 측정하였다. 이후 분석대상물질인 살모넬라 항원을 주입하여 항체와의 결합 상태를 일정 시간 간격을 두고 공명각의 변화로서 측정하고 이 결과를 분석하였다. 또한 human Immunglobulin G (hIgG)를 항원으로 한 항원-항체 반응 역시 살모넬라의 경우와 같은 방법으로 측정하였다. 그 결과 살모넬라의 항체는 센서칩 표면에서 약 10분 동안 자기집합하고 반응이 포화됨을 공명각의 변화를 통해 볼 수 있었으며, hIgG의 항체의 경우는 약 60분 동안 반응을 하고 포화됨을, 그리고 살모넬라와 hIgG의 항원 (분석대상물질) 은 모두 각각의 항체에 대해서 약 1분 이내에 결합하고 포화됨을 볼 수 있었다.
난소가 제거된 생쥐를 이용하여 자궁조직에서의 ADAM-8, 9, 10, 12, 15, 17, 그리고 ADAMTS-1의 유전자의 발현이 생식호르몬에 의하여 조절되는 지를 알아보았다. 암컷 생쥐의 난소를 제거하고, 2주후에 sesame oil, 17 ${\beta}$-estradiol ($E_2$), progesterone ($P_4$ 혹은 이 둘 혼합액 ($E_2+P_4$)을 피하 주사하였다. RT-PCR 방법을 이용하여 유전자 전사체의 발현을 조사한 결과 ADAM-8, 12, 그리고 17은 oil을 주사하거나 $P_4$만을 주사한 군보다 $E_2$를 주사한 군에서 자궁조직에서의 mRNA의 양이 현저하게 증가하였다. 반면 ADAM-9, 10, 15, 그리고 ADAMTS-1은 oil을 주사하거나 $E_2$만을 주사한 군보다 $P_4$를 주사한 군에서 mRNA의 양이 현저하게 증가하였다. 또한 단백질의 발현양상의 결과도 RT-PCR의 결과와 동일하게 관찰되었다. 이러한 결과로 미루어 ADAM-8, 12, 그리고 17은 17 ${\beta}$-estradiol에 의하여, ADAM-9, 10, 15, 그리고 ADAMTS-1은 progesterone에 의하여 유전자의 발현이 upregulation 되는 것으로 생각되어진다.
본 연구는 항생제인 imipenem에 내성이 있는 Pseudomonas aeruginosa에 대한 차 폴리페놀(TPP)과 imipenem의 살균 상승효과와 세포반응을 조사하기 위하여 수행되었다. Imipenem 내성 Ps. aeruginosa는 병원의 환자로부터 분리하였다. TPP와 imipenem을 단독으로 처리하였을 때와 병용으로 처리하였을 때의 최소억제농도(MIC)를 측정한 결과, imipenem 감수성과 내성 균주는 TPP와 imipenem을 병용처리 하였을 때, imipenem 농도가 각각 16배, 8배가 감소되는 것을 확인하였다. 또한, time-kill 조사를 통해 TPP와 imipenem의 항균효과를 조사하였으며, 병용처리 하였을 때 낮은 농도의 imipenem에서도 동일한 항균효과를 나타내는 것을 확인하였다. TPP에 의한 imipenem 감수성과 내성 균주의 스트레스 충격 단백질 발현을 조사하기 위하여 anti-DnaK와 anti-GroEL 단일항체를 이용한 Western blot을 통해 관찰하였다. 스트레스 충격 단백질인 DnaK와 GroEL은 TPP의 노출시간이 증가함에 따라 발현양이 증가하다가 감소하는 것을 확인하였으며, 유도된 DnaK와 GroEL의 분자량은 각각 70 kDa과 60 kDa으로 나타났다. TPP의 농도와 시간에 따른 세균의 LPS 증감 변화를 SDS-PAGE와 은 염색을 통하여 확인하였고, TPP와 imipenem에 노출된 세균의 세포 외부 형태변화를 주사전자현미경을 이용하여 관찰한 결과, 움푹 패이고, 주름진 표면을 가지는 것으로 관찰되었다.
다클론항체를 이용하여 환경 시료중 유기인계 살충제 acephate를 분석할 수 있는 경합적 간접효소면역측정법(competitive indirect ELISA)을 개발하기 위하여 분석물과 화학구조가 유사하며 hexanoic acid를 지닌 3종의 hapten을 합성하였다. 이들 hapten을 active ester 방법으로 담체단백질인 keyhole limpet hemocyanin과 접합시켜 면역원으로 사용하있고, bovine serum albumin과 접합시켜 homologous 혹은 heterologous ELISA를 위한 코팅항원으로 사용하였다. 생산된 항체들과 코팅항원을 최종선발하여 acephate 잔류분석을 위한 ELISA를 위하여 최적화하였다. 단백질의 농도가 $1{\mu}g/mL$인 코팅항원 (hapten-3-BSA)과 다클론항체 #8377를 16000배로 희석한 heterologous ELISA에서 최적화된 acephate의 $IC_{50}$ 값은 110 ng/mL이었고, 분석범위와 최소검출한계는 각각 $10{\sim}1000$과 4 ng/mL 이었다. Acephate의 주분해산물이고 살충제로 사용되는 methamidophos을 위시한 몇몇 유기인계 살충제의 항체에 대한 교차반응은 모두 0.02%이하였다. 이와 같은 결과는 본 ELISA가 농산물 및 환경시료중의 acephate 잔류분석을 위하여 편리한 방법이 될 수 있음을 시사한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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