An attempt to confirm the associations of some selected risk factors of HBV infection and measure their risks, a cross-sectional study with 1,209 urban office workers was carried out. For the study, a simple questionnaire which contained several questions on personal experience and behaviors on several known selected risk factors of HBV infection was applied to each subject, and the Hepatitis B virus surface antigen and its antibody were checked by RPHA and PHA method, respectively. Risk factors chosen for this study were experience of blood transfusion and personal contact variables, such as frequencies of eating-out, drinking after office hours, going to tea room, sharing cigarettes, etc. The results obtained were as follows: 1. The proportion of HBsAg positive was 10.6%, and total HVB infected including the Anti-HBs positive cases without vaccination was 44.2%. Both were higher in male than in female. 2. Frequent personal contact through glasses and dishes in eating-outs and drinkings turned out not to be a significant risk factor of Hepatitis B surface antigenecity. 3. Frequent visits to tea room was a significant risk factor of HBV infection which combined HBsAg positive cases and Anti-HBs cases who had not received HBV vaccination. The odds ratio was 1.56 4. Blood transfusion was not a significant risk factor of both HBsAg positive and total HBV infection. In summary, indirect oral contacts through eating-outs and drinkings was not significant risk factor in Korea at least between adults. Blood transfusion is no more major source of HBV infection in Korea probably because the adquate screening test of HBsAg for the blood donors is being made.
B형 간염 표면항원(HBsAg)의 4가지 주요 아형 조사를 통해 HBsAg과 B형 간염표면항체가 모두 양성인 환자에서 항원과 항체의 아형이 다름을 밝힘으로 항원-항체 공존을 이해하게 되었으며, 감염경로를 추적하는 역학적 조사, 인구이동양상의 지표에 유용하게 사용될 수 있다. 현재까지 우리나라의 HBV 아형에 관한 연구는 전체적인 빈도의 조사나 HBsAg과 anti-HBs가 공존하는 경우에서 아형이 가지는 의미에 대한 것이 전부였다. 본 연구에서는 영남대학교 의과대학 부속병원에서 만성 간질환으로 진단받고 경과추적중인 HBsAg 양성인 환자 214명을 대상으로 혈청에 존재하는 HBsAg 아형을 단세포군 항체를 이용한 혈청학적 방법으로 조사하였다. 214명의 검체중 206명(93.9%)에서 adr, 6명(2.8%)에서 adw, 2명(0.9%)에서 ayr, 2명(0.9%)에서 ar, 3명(1.4%)에서 adwr로 나타났으며 ayw는 한 례에서도 발견되지 않았다. 아형과 질환의 중증도 사이에는 유의한 연관성은 발견되지 않았다. 결론적으로 만성 간질환 환자에서 adr이 가장 많고 질환의 중증도와 아형간에 유의한 연관성은 발견되지 않았지만, 아형이 만성 B형 바이러스 간염의 간경변증이나 간세포암으로의 진행과 예후에 영향을 미치는지 밝히기 위해서는 좀 더 연구를 진행하여야 할 것이다.
While there have been not a few reports on the seroepidemiological characteristics of hepatitis B virus (HBV) infection in Korea, most of them, however, have had several limitations; operational definition of HBV infection, validity of detection methods of HBV serologic markers, size of the study population, and confirmation of the vaccination history against HBV, etc. In order to avoid such limitations, authors randomly selected 1,495 healthy adults among the 217,511 insured (target population) of Korean Medical Insurance Corporation, living in seoul, and tested HBV serologic markers by RIA method and conducted direct interview to them. Although HBV serologic markers (HBsAg, anti-HBs and anti-HBc) of all the subjects were tested, 392(26.2%) of interview failure cases and 361 vaccinee were excluded from the actual population. Finally, the serologic markers tested of 742 nonvaccinee (study population) only were analysed for the seroepidemiologic observation of the natural infection of HBV. The seroepidemiological characteristics of HBV infection in Korea were as follows ; 1. Point prevalence of HBs antigenemia was 11.7(9.1{\sim}14.3)% in male, which was slightly higher than that of female, 9.5($3.7{\sim}15.3$)%. This level was one of the highest among those of Asian-Pacific countries. Decreasing tendency of HBsAg prevalence alter the age of 50 was observed, which seems to be due to selective attrition of HBV chronic carriers among the healthy adults and/or to the limited-lasting duration of the HBs antigenemia, in part. 2. Point prevalence of anti-HBc(78.8% in male,50.9% in female) was higher than that of anti-HBs(65.2% in male,46.6% in female), respectively. And both of them were higher in male than in female. Increasing tendency of the prevalence of both antibodies was observed by age, which seems to be largely due to recurrent infection in adults and to some cumulative effect, in part, of their relatively longer-lasting duration. 3. The level of HBV infection defined by positive for at least one of the 3 serologic markers of HBV by RIA method was 84.7($81.8{\sim}87.6$)% in male and 61.2($51.9{\sim}70.5$)% in female, which was also one of the highest among those of Asian-Pacific countries. The proportion of susceptible population to HBV infection among healthy adults was 15.3% in male and 38.8% in female. 4. The relative frequency of current or past infection and chronic carrier among HBV infected person was estimated. The currently or past infected was estimated 75.7% in male and 71.8% in female, and chronic carrier state, 13.8% in male and 14.1% in female. The analysis of the geometric mean of the antibody titer in anti-HBs positive sera indicated also to be compatible with the above findings, suggesting that active, even though inapparent, infection of HBV occur so frequently among healthy adults in Korea.
많은 항바이러스제의 개발에도 불구하고, B형간염바이러스 감염으로 인해 간 이식을 받은 환자를 대상으로 한 재발 억제 치료 시 항 B형간염바이러스 면역글로불린(Anti-hepatitis B immunoglobulin, HBIG) 치료는 아직도 가장 중요한 약물요법으로 여겨지고 있다. 본 연구진은 간 이식 환자에서의 6개월 간의 약동학 연구를 통해, HBIG의 약동학적 파라미터와 이에 대한 영향인자를 확인하였으며, 이를 이용해 용법용량 별로 유지요법 시기에 목표 농도 도달 가능성을 예측하는 시뮬레이션 tool을 개발하였다. 그 결과 95% 환자가 목표 농도 이상의 HBIG 농도를 유지하기 위한 용량은 '목표 농도 ${\times}$ 20'에 해당하는 것을 확인하였으며, 다수의 대학병원에서 통상적인 HBIG 유지 요법의 목표 농도를 최소 300 IU/L로 하고 있음을 고려할 때, 6,000 IU의 용량을 월 1회 투여하는 것이 바람직할 것으로 판단하였다.
목 적 : B형 간염 바이러스 보균자가 많은 우리 나라에서는 모든 신생아에게 B형 간염에 대한 능동면역이 시행되고 있다. 혈장 백신은 공급원에 한계가 있고 전염성 질환이 전파될 가능성이 있으며 값이 비싸다는 문제점이 있어 이와는 다른 유전자 재조합 공법으로 생산된 HG-II$^{(R)}$백신의 면역원성과 안전성을 조사하고 BCG 선행군과 그렇지 않은 군에서의 면역원성을 비교하고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 1995년 4월부터 1996년 6월까지 경상대학병원(Group A), 지방공사 강남병원 (Group B)과 영동 세브란스병원(Group C)에서 10세이하의 소아를 대상으로 하여 유전자 재조합 B형간염 백신(HG-II$^{(R)}$)$10{\mu}g$의 양을 0, 1, 6개월 접종 방식으로 3회 근주 하였다. 4군는 BCG를 간염 2차 접종하기 1주전에, B군은 1주후에 접종하였다. C군에서는 두가지 예방접종의 선후관계를 알 수 없었다. 3회 접종후 1개월에 채혈하여 anti-HBs Ab를 측정하였으며 부작용을 조사하였다. 결 과 : 1) 총 114례중 신생아는 104례였으며 이 중 55례는 간염 2차 접종하기 1주전에 BCG를 접종하였고 43례는 간염 2차 접종후에 BCG를 접종하였으며, 6례는 선후관계를 알 수 없었다. 2) 항체양전율은 99.1%였고 기하 평균 항체가는 131.2mIU/ml였다. 3) BCG를 간염 2차 접종하기 1주전에 접종한 군과 1주후에 접종한 군에서의 기하 평균 항체 가는 각각 105.5mIU/ml, 162.8mIU/ml였다(p<0.025). 4) 부작용은 국소 반응이 1.4%, 전신 반응이 7.8%였다. 결 론 : 유전자 재조합 간염 백신은 부작용이 적고 면역원성이 우수하였다. 간염 2차 접종 전에 BCG를 접종한 군에서의 기하 평균 항체가가 낮게 관찰된 바 향후 이에 대한 연구가 더 필요할 것으로 사료된다.
Background: Phage display is the most widely used technique among display methods to produce monoclonal antibody fragment with a specific binding activity. Having a large library for efficient antibody display/selection is quite laborious process to have more than $10^9$ members of transformants. To overcome these limitations, several in vitro selection approaches have been reported. Ribosome display that links phenotypes, proteins, directly to genotype, mRNA, is one of the in vitro display methods. Ribosome display can reach the size of scFv library up to $10^{14}$ molecules and it can be further diversified during PCR steps. To select the high affinity scFv from one pot library, we established ribosome display technique by modifying the previously reported eukaryotic translation system. Methods: To establish the antibody selection system by ribosome display, we used 3D8, anti-DNA antibody. A 3D8 scFv was synthesized in vitro by an in vitro transcription-translation system. The translated 3D8 scFv and the encoding 3D8 mRNA are connected to the ribosome. These scFv-ribosome-mRNA complexes were selected by binding to their specific antigens. The eluted mRNAs from the complexes are reverse transcribed and re-amplified by PCR. To apply this system, antibody library from immunized mouse with terminal protein (TP)-peptide of hepatitis B virus DNA polymerase TP domain was also used. This TP-peptide encompasses the 57~80 amino acid residues of TP. These mRNA/ribosome/scFv complexes by our system were panned three times against TP-peptide. The enrichment of antibody from library was determined by radioimmunoassay. Results: We specifically selected 3D8, anti-DNA antibody, against ssDNA as a model system. The selected 3D8 RNAs sequences from translation complexes were recovered by RT-PCR. By applying this model system, we enriched TP-peptide-specific scFv pools through three cycles of panning from immunized library. Conclusion: We show that our translating ribosome complexes are well maintained and we can enrich the TP-specific scFv pools. This system can be applied to select specific antibody from an antibody library.
We performed a basic experiment for rapid, on-line, real-time measurement of HBsAg by using a surface plasmon resonance biosensor to quantify the recognition and interaction of biomolecules. We immobilized the anti-HBsAg polyclonal antibody to the dextran layer on a CM5 chip surface which was pre-activated by N-hydroxysuccinimide for amine coupling. The binding of the HBsAg to the immobilized antibody was measured by the mass increase detected by the change in the SPR signal. The binding characteristics between HBsAg and its antibody followed typical monolayer adsorption isotherm. When the entire immobilized antibody was interacted, there was no additional, non-specific binding observed, which suggested the biointeraction was very specific as expected and independent of the ligand density. No significant steric hindrance was observed at 17.6 nm/$mm^2$ immobilization density. The relationship between the HBsAg concentration in the sample solution and the antigen bound to the chip surface was linear up to ca. $40\mu\textrm{g}$/mL, which is much wider than that of the ELISA method. It appeared the antigen-antibody binding was increased as the immobilized ligand density increased, but verification is warranted. This study showed the potential of this biosensor-based method as a rapid, simple, multi-sample, on-line assay. Once properly validated, it can serve as a more powerful method for HBsAg quantification replacing the current ELISA method.
Five assays for anti-HBs were compared to improve potency test of Human lgG preparations. The three commercial EIA kits were optimized including dose response curve ranges and compared by conducting a co-laboratory study. After selecting the most reproducible EIA kit, methods comparison was performed with 22 samples in 5 different days. As a result, EIA (7.7 ${\pm}$ 5.3%) and MEIA (AxSYM: 3.7 ${\pm}$ 1.9%, IMx: 1.6 ${\pm}$ 0.8%) showed precision and accuracy (100.1 ${\pm}$ 12.6%). Therefore, the validated EIA assay was established and it is believed to be comparable to current MEIA.
B형간염표면 항원 및 항체(HBsAg와 anti-HBs)에 대한 검사 방법으로 화학발광면역검사법(CIA)을 포함한 면역검사법을 주로 사용하고 있으나 최근 간편한 면역크로마토그래피법(ICA)의 사용이 늘고 있는 추세이다. 본 연구에서는 CIA법을 이용한 정량검사법과 비교하여 신속검사인 ICA법의 민감도를 평가하고자 하였다. 대학병원에 간염검사를 의뢰한 검체 중 CIA법에서 양성 및 음성으로 나온 120 검체를 선정하여 ICA법으로 분석하였다. ICA법과 CIA법의 일치율은 항원 97%와 항체 90%로 나타났다. 항원검사의 ICA법 민감도, 특이도, 양성예측도, 음성예측도는 각각 97%, 100%, 100% 및 96.8%로 나타났으며, 항체검사는 각각 90%, 93.3%, 93.1% 및 90.3%로 나타났다. ICA법을 임상에서 사용 시 결과판독에 주의가 필요하며, 낮은 역가의 경우 검출되지 않는 제한점이 있으므로 예민도가 높은 다른 검사법을 이용하여 이중검사를 시행해야 할 것으로 사료된다.
본 논문에서는 10% fetal bovine serum(FBS)를 첨가한 RPMI 1640배지에 비하여 간염바이러스 표면항원에 대한 단일클론항체 생산에 있어서 효과적은 무혈청 배지에 낮은 온도의 혈청을 첨가하여 하이브리도마_2_c3.1 세포에서 그 효과를 조사하였다, 세포성장관 단일클론항체 생산을 증가시키기 위하여 기본 무혈청배지와 RPMI 1640 배지성분들의 농도를 균형있게 강화시킨 배지를 2:1(v / v)로 혼합하여 농축배지를 조성하고, 이 배지에 2mg / ml 인혈청 알부민 $5\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ insulin, $5\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ tran-sferrin, $10\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ monoethanolmine 등의 몇가지 무혈청 첨가물들을 첨가하였다. 이 농축 배지에 fetal bovine serum(FBS)과 supplemented bovine calf serum(sBCS)을 첨가하였을때의 세포성장과 단일클론항체 생산을 비교하여 FBS농도를 변화하여 세포성장과 단일클론항체생산의 증가를 시도하였다. 0.5%를 농축배지에 첨가함으로써 세포성장과 단일클론항체생산의 증가를 보았다. 최대 세포농도는 $3.06{\times}10^6$ cells / ml이었으며, 이때 생산된 단일클론항체는 10% FBS배지의 $43.0\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ 무혈청배지의 $50\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$보다 3배이상 높은 $159.7\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$이 생산되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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