This study was conducted to investigate optimum conditions for mass production of ntagonistic microbes Alcaligenes sp. HC12. Alcaligenes sp. HC12 had a potent biological control agent to control browning disease caused by Pseudomonas agarici. Alcaligenes sp. HC12 markedly showed the antagonistic activity against Pseudomonas agarici, the most destructive pathogen of cultivated mushrooms. To define the optimum conditions for the mass production of the Alcaligenes sp. HC12, we have investigated optimum culture conditions and effects of various nutrient source on the bacterial growth. The optimum initial pH and temperature were determined as pH 9.0 and $30^{\circ}$, respectively. The optimal concentration of medium elements for the growth of pathogen inhibitor bacterium(Alcaligenes sp. HC12) was determined as follows: 0.5% dextrine, 1.5% yest extract, 1.0% $NaNO_3$, 0.5% $KH_2PO_4$, and 1.5% asparagine.
Concerning about the negative impact of chemical pesticides on human health and the environment has been leading to dramatic increase of research in natural product-based pesticides. An antagonistic bacterium Streptomyces sp. S-1110 was isolated from apple farm soil. The culture filtrate of the strain showed growth inhibition effects to apple pathogenic fungi, Botryosphaeria dothidea, Colletotrichum gloeosporioides and Rhizoctonia solani. The unidentified antibiotic substances from the strain kept antagonistic activity either after heat treatment at $121^{\circ}C$ for 1 h or pH treatment at range of pH 3 - pH 12 for 24 h. The substances also prevented apple fruit from spoiling by inoculated two pathogenic molds, B. dothidea and C. gloeosporioides. These results suggested that the isolated strain would be useful as a biocontrol agent to control apple spoiling occurred from mold.
In oder to select the powerful rhizophere-dorminatable biocontrol agent, we had isolated an indigenous antagonistic bacterium which produced antibiotic and siderophore from a disease suppressive local field soil of Gyungsan, Korea. And we could select the Pseudomosp. 4059 which can strongly antagonize against Fusarium oxysporum and Phytophthora capsici by two kinds of antifungal mechanism that can be caused by the antibiotic of Phenazin, a siderophore and a auxin like subThe selected strain was identified as Pseudomonas fluorescens (biotype A) 4059 by biochemical tests, API $\textregistered$ test, MicroLog TM system and 16S rDNA analysis. The selected antagonistic microorganism, Pseudomosp. 4059 had an antifungal mechanism of antifungal antibiotic and sidrophore. And we were confirmed the antagonistic activity of P fluorescens 4059 with in vitro antifungal test against Phytophthora capsici and in vivo by red-pepper.
For the selection of powerful antagonistic bacterium for biological control of soil borne Eminia carotovora subsp. carotovora causing rot of vegetable, excellent strains (S4, S14, 565) were selected from 1,196 strains of bacteria which were isolated from rhizosphere in vegetable root rot-suppresive soil. Strains were identified to be Pseudomonas species with Api 20NE kit. Antagonistic substance was produced in 523 synthetic broth medium at pH 7~8 and $30^{\circ}C$ during 3 days culture. The substance was stable in the pH range of 6 to 9. When the basal medium was supplemented with mannitol and sorbitol as carbon source and calcium chloride as metal salt, the production of the inhibitory substance was increased. The inhibitory acitivity was increased by the addition of fertilizer in soil. The isolated strains were resistant to the agricultural chemical such as benomyl and fosethyl-Al-folpet, and the antibiotics such as penicillin and lincomycin. We had found that Pseudomonas sp. S14 strain had a single plasmid. After treated with acridin orange for curing, we confirmed the existence of antagonistic gene in the chromosomal DNA.
Bacterial strain BAS23 was isolated from rice field soil and identified as Bacillus amyloliquefaciens. Based on dual culture method results, the bacterium BAS23 exhibited potent in vitro inhibitory activity on mycelial growth against a broad range of dirty panicle fungal pathogens of rice (Curvularia lunata, Fusarium semitectum and Helminthosporium oryzae). Cell-free culture of BAS23 displayed a significant effect on germ tube elongation and mycelial growth. The highest dry weight reduction (%) values of C. lunata, H. oryzae and F. semitectum were 92.7%, 75.7%, and 68.9%, respectively. Analysis of electrospray ionization-mass spectrometry (ESI-MS) and $^1H$ nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy revealed that the lipopeptides were iturin A with a C14 side chain (C14 iturinic acid), and a C15 side chain (C15 iturinic acid), which were produced by BAS23 when it was cultured in nutrient broth (NB) for 72 h at $30^{\circ}C$. BAS23, the efficient antagonistic bacterium, also possessed in vitro multiple traits for plant growth promotion and improved rice seedling growth. The results indicated that BAS23 represents a useful option either for biocontrol or as a plant growth-promoting agent.
Miscanthus purpurascens Juice containing potassium (37,952 mg/L), nitrogen (14,000 mg/L), phosphorus (6,800 mg/L), magnesium (5,969 mg/L), calcium (5,910 mg/L), etc., was investigated to develop a novel meidum far the mass cultivation of useful microorganisms. For this research, we first isolated an antagonistic bacterium G-74 from soil, which showed strong growth inhibition against two phytopathogenic fungi, Rhizoctonia solani and Botrytis cinerea, and identified as Bacillus lentimorbus G-74 based on the morphological characteristics and MIDI analysis. Culture conditions for G-74 strain in the M. purpurascens juice medium were optimized. Dilution rate of the medium, temperature and initial pH for the optimum growth of G-74 strain were 30% (V/V), $35^{\circ}C$ and 5.0, respectively. It was found that additions of 2.0% (W/V) corn starch as a carbon source and 1.0% (W/V) yeast extract as a nitrogen source in this medium increased B. lentimorbus G-74 growth to 66% more efficient than Luria Bertani medium.
An antagonistic bacterium PM-1 which strongly inhyibits the growth of Pyricularia oryzae was isolated and identified as paenibacillus macerans. The antifungal substances of the strain PM-1 showed the broad antifungal spectra against P.oryzae races. Relating to the localization test, it was found that the antifungal substances existed not only in the cytoplasm but also in the culture supernatant, and importantly the antifungal activity of the latter was stronger than that of the former. The extracellular antifungal substances were extremely heat-stable up to $121^{\circ}C$ for 15 min. The substances were optimally produced at $20^{\circ}C$ and pH 10.0 in a potato dextrose broth. The culture filtrate of the strain PM-1 caused a partial swelling of the mycelia of P.oryzae, and it prevents the normal growth of the fungus as well. This result suggested that the antifungal substances secreted by the strain PM-1 potentially inhibited the germination of P.oryzae.
Rhizo-bacteria were isolated from organic-farming soils to select antagonistic agent for controlling citrus melanose disease. Among several antagonistic bacteria, KB-401 effectively inhibited mycelial growth of several plant fungal pathogens, including the pathogen of citrus melanose, Diaporthe citri. KB-401 also inhibited spore germination of the fungal pathogen. The tip of germ tube was swollen when conidia of D. citri were co-culture with KB-401 in PD broth amended 1% glucose. KB-401 was identified as Bacillus subtilis through the investigation for physiological characters and the analysis of nucleotide sequences of 16S rDNA.
Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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v.17
no.1
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pp.11-18
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1997
This study was to provide the basic data in improving protoplast formation and regeneration of antagonistic bacteria against phytopathogenic fungi and pest. The antagonistic rhizobacterium, BS 101, against Rhizoctonia solrmi and Fusurium oxyspomm was isolated and identified as Bacillus subtilis. Another bacterium for protoplast formation and regeneration was B. thuringiensis subsp. kurstcJtiHD-l (BT 37669) which have insectcidal toxin in the orders Coleopteria, Dipteria etc.. Auxotrophic mutants, BS 1013 and BT 69, were isolated by treating with NTG 300 ug/ml for 40 min. at $37^{\circ}C$, and with NTG 300 ug/ml for 30 min. at $37^{\circ}C$, respectively. The BS 1013 and BT 69 were converted to protoplas by treating with lysozyme 300 ugh1 for 30 min. at 37C, and lysozyme 9 mglml for 60 min. at $37^{\circ}C$, respectively. The fequencies of the protoplast formation of BS 1013 and BT 69 were 90.00 and 92.83% respectively, after 1~2 day at $37^{\circ}C$. The regeneration kequencies of the protoplasts BS 1013 and B T 69 were 0.52 and 0.10%, respectively, after 4~6 days at $37^{\circ}C$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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