버섯 세균갈성색무늬병원균인 Pseudomonas agarici에 대한 길항미생물로 보고된 Alcaligenes sp. HC12 균주의 배양적 특성과 대량 배양을 위한 최적배양 조건을 설정하였다. HC12균주의 생육온도는 $20{\sim}40^{\circ}C$, pH는 6.0 이상에서 왕성한 생육을 보였다. 대량배양을 위한 효율적인 영양원 선발을 위하여 기본배지에 탄소원 fructose 등 18종, 무기질소원 $NH_4Cl$ 등 6종, 유기질소원 peptone 등 6종 그리고 아미노산 asparagine 등 11종을 각각 1%씩 첨가하였고, 무기염류 13종을 첨가하여 각각에 대한 생육에 미치는 영향을 조사하였다. 또한 선발된 각각의 영양성분들에 대한 최적 농도를 조사하기 위하여 각각의 성분을 최소 0.1%에서 최대 4.0%까지 배지에 첨가하여 배양 후 생육정도를 조사하였다. 그 결과, 대량배양을 위한 생육최적조건은 온도 $30^{\circ}C$, pH 9, 탄소원 0.5% dextrine, 유기질소원 1.5% yeast extract, 무기질소원 1.0% $NaNO_3$, 아미노산 1.5% asparagine 그리고 무기염류는 0.5% $KH_2PO_4$에서 왕성한 생육을 보였다.
사과 재배에 피해를 주고 있는 사과 겹무늬썩음병, 탄저병, 라이족토니아병을 복합적으로 방제하기 위한 기초연구로서 각 병원균에 대하여 우수한 길항력을 동시에 가지는 길항미생물을 선발하고 Streptomyces sp. S-1110으로 동정하였다. 분리된 길항미생물은 배양상등액으로 길항물질을 분비하였으며 우수한 열안정성과 pH 안정성을 가지는 특성이 있었으며 각 병원균에 대한 감수성이 조금씩 달라서 2 종 이상의 길항물질이 동시에 생산되어 길항작용을 하는 것으로 추정되었다. 또한 분리균이 생산하는 길항물질을 사과 과실에 직접접종된 사과 겹무늬썩음병과 탄저병의 방제를 위해 실험한 결과 높은 방제력을 보였다. 따라서 분리된 길항미생물은 사과 과수원 및 저장소에서 동시에 수종의 질병방제에 쓰일 수 있는 천연 복합방제제의 개발을 위한 기초 균주로의 가치가 높은 것으로 판단된다.
토양 우점능이 강한 생물학적 방제제 제조를 위해 경북지역 토양에서 길항균주를 분리하고 이들 중 Fusarium oxysporum, Phytophthora capsici 에 강력한 길항능을 보이는 Pseudomonas sp. 4059 를 선발, 동정하였다. Pseudomonas sp. 4059 의 시들음 병균 Fusarium oxysporum, 고추 역병균 Phytophthora capsici 에 대한 길항기작은 내열성 저분자의 항생물질과 철이온을 특이적으로 흡착하는 siderophore의 생산에 의한 것이다. Pseudomonas sp. 4059 는 항진균성 항생물질 Phenazine 생산 유전자를 소유하며 Salkowski test에 양성인 옥신류 생산도 한다는 것을 확인하였다. Pseudomonas sp. 4059 는 bioochemical tests, API test, MicroLogTM system을 통해 Pseudomonas fluorescens (biotype A)으로 98% 상동성을 보였으므로 이를 Pseudomonas fluorescens (biotype A) 4059 로 명명하였다. 선발된 길항균 Pseudomonas fluorescens (biotype A) 4059는 고추를 기주식물로 하였을 때 고추역병균인 Phytophthora capsici가 원인이 되는 고추역병을 in vivo 상에서도 충분히 억제할 수 있는 생물방제능을 나타내었다.
채소 등 작물의 부패균인 Erwinia carotovora subsp. carotovora의 생육을 억제하는 길항세균을 경작지 표토층으로부터 분리하고 배양조건에 따른 억제력변화를 조사하고, 길항관련 유전자의 소재를 확인하였다. 분리균들중 가장 우수한 억제력을 갖는 S4, S14, S65 균주를 최종 선발하고 Pseudomonas 근연종으로 동정하였다. 523 배지를 사용하여 배양조건에 따른 억제력 변화를 조사한 결과 배지초기 pH를 7-8로 조정하여 $30^{\circ}C$에서 3일간 배양하였을 때 가장 높은 억제력을 보였고, 배지성분중 탄소원으로 mannitol과 sorbitol, 무기염으로 CaCl2를 첨가했을 때 효과적이었으나 질소원에 대한 감수성은 낮았다.
Bacterial strain BAS23 was isolated from rice field soil and identified as Bacillus amyloliquefaciens. Based on dual culture method results, the bacterium BAS23 exhibited potent in vitro inhibitory activity on mycelial growth against a broad range of dirty panicle fungal pathogens of rice (Curvularia lunata, Fusarium semitectum and Helminthosporium oryzae). Cell-free culture of BAS23 displayed a significant effect on germ tube elongation and mycelial growth. The highest dry weight reduction (%) values of C. lunata, H. oryzae and F. semitectum were 92.7%, 75.7%, and 68.9%, respectively. Analysis of electrospray ionization-mass spectrometry (ESI-MS) and $^1H$ nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy revealed that the lipopeptides were iturin A with a C14 side chain (C14 iturinic acid), and a C15 side chain (C15 iturinic acid), which were produced by BAS23 when it was cultured in nutrient broth (NB) for 72 h at $30^{\circ}C$. BAS23, the efficient antagonistic bacterium, also possessed in vitro multiple traits for plant growth promotion and improved rice seedling growth. The results indicated that BAS23 represents a useful option either for biocontrol or as a plant growth-promoting agent.
억새즙액을 이용하여 유용한 미생물의 대량배양을 위한 새로운 배지를 개발하고자 본 연구를 수행하였다. 억새즙액의 성분을 조사한 결과 칼륨 (37,952 mg/L), 질소 (14,000 mg/L), 인산 (6,800mg/L), 마그네슘 (5,969 mg/L), 칼슘 (5,910 mg/L) 등이 주성분을 차지하였다. 본 연구를 위하여 먼저 식물병원성균인 뿌리썩음병 원인균인 Rhizoctonia solani, 잿빛곰팡이 병을 일으키는 Botrytis cinerea에 대하여 강력한 저해 활성을 갖는 길항균 G-74를 토양으로부터 분리하였으며, 이 균의 형태관찰과 MIDI 분석을 통하여 Bacillus lentimorbus G-74 균주로 최종 동정하였다. 이 균의 억새즙액 배지에 대한 최적 배양조건을 조사한 결과 30% (V/V) 희석배지, $35^{\circ}C$ 배양온도, 5.0의 초기 배지 pH에서 가장 좋은 성장을 기록하였다. 또한 이 배지에 탄소원으로서 2.0% (W/V)의 corn starch 및 질소 원으로서 1.0% (W/V)의 yeast extract를 추가적으로 첨가하면 최상의 성장을 보여주었으며, 이 경우 대조구인 LB 배지보다도 균체성장이 66% 이상 증가하였다.
An antagonistic bacterium PM-1 which strongly inhyibits the growth of Pyricularia oryzae was isolated and identified as paenibacillus macerans. The antifungal substances of the strain PM-1 showed the broad antifungal spectra against P.oryzae races. Relating to the localization test, it was found that the antifungal substances existed not only in the cytoplasm but also in the culture supernatant, and importantly the antifungal activity of the latter was stronger than that of the former. The extracellular antifungal substances were extremely heat-stable up to $121^{\circ}C$ for 15 min. The substances were optimally produced at $20^{\circ}C$ and pH 10.0 in a potato dextrose broth. The culture filtrate of the strain PM-1 caused a partial swelling of the mycelia of P.oryzae, and it prevents the normal growth of the fungus as well. This result suggested that the antifungal substances secreted by the strain PM-1 potentially inhibited the germination of P.oryzae.
유기농 인증을 받아서 3년 이상이 경과한 농가의 토양을 수집하여 근권 세균을 450균주 분리하였고, 여러 가지 식물 병원균의 균사 생장을 억제하는 세균 KB-401 균주를 선발하였다. KB-401 균주는 특히 감귤 검은점무늬병균(Diaporthe citri)의 균사 생장과 포자 발아를 억제하며, 발아하는 포자에 처리하였을 때 발아관의 선단이 팽윤되는 현상을 관찰할 수 있었다. 본 균주는 생리적인 특성과 16S rDNA의 염기서열을 분석한 결과, Bacillus subtilis로 동정되었다.
This study was to provide the basic data in improving protoplast formation and regeneration of antagonistic bacteria against phytopathogenic fungi and pest. The antagonistic rhizobacterium, BS 101, against Rhizoctonia solrmi and Fusurium oxyspomm was isolated and identified as Bacillus subtilis. Another bacterium for protoplast formation and regeneration was B. thuringiensis subsp. kurstcJtiHD-l (BT 37669) which have insectcidal toxin in the orders Coleopteria, Dipteria etc.. Auxotrophic mutants, BS 1013 and BT 69, were isolated by treating with NTG 300 ug/ml for 40 min. at $37^{\circ}C$, and with NTG 300 ug/ml for 30 min. at $37^{\circ}C$, respectively. The BS 1013 and BT 69 were converted to protoplas by treating with lysozyme 300 ugh1 for 30 min. at 37C, and lysozyme 9 mglml for 60 min. at $37^{\circ}C$, respectively. The fequencies of the protoplast formation of BS 1013 and BT 69 were 90.00 and 92.83% respectively, after 1~2 day at $37^{\circ}C$. The regeneration kequencies of the protoplasts BS 1013 and B T 69 were 0.52 and 0.10%, respectively, after 4~6 days at $37^{\circ}C$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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