Je, Jae-Young;Park, Pyo-Jam;Byun, Hee-Guk;Kim, Se-Kwon;Kim, Jong-Bae;Chang, Soo-Hyun
한국어업기술학회:학술대회논문집
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한국어업기술학회 2002년도 추계 수산관련학회 공동학술대회발표요지집
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pp.191-192
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2002
Angiotensin I converting enzyme [EC 3.4.15.11 (ACE) is important in the maintenance of blood pressure. The enzyme removes histidyl-leucine from angiotensin I to form the blood-vessel-constricting octapeptide, angiotensin II, and degrades vasodilative bradykinin in blood vessels and stimulates e release of aldosterone in the adrenal cortex. (omitted)
An angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitor was isolated and partially purified from bovine blood plasma. Bovine blood plasma was obtained after removing blood cells by centrifugation, followed by the addition of anticoagulant to whole bovine blood. To precipitate plasma proteins, bovine blood plasma was treated with 4% trichloroacetic acid (TCA) as a final concentration .An ACE inhibitor was isolated from TCA supernatnat, using ultrafiltration, gel permeation chormatography, and reverse-phase high pressure liquid chromatogrpahy. The ACE inhibitor purified from TCA supernatant had IC50 values of 9.4$\mu$M.
An angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory substance was isolated and purified from Lycium chinense Miller. A crude water extract of Lycium chinense Miller was prepared by adding it to water shaking at $25^{\circ}C$ for 1 hr, followed by centrifugation at 8000 ${\times}$ g for 30 min. The crude extract was then filtered using YM-3 and YM-1 membranes. An ACE inhibitor was isolated using consecutive chromatographic methods including: ion exchange chromatography, gel permeation chromatography, and FPLC. The inhibitor was identified to have a molecular mass of 862 daltons by mass spectrometry.
Inhibition of angiotensin converting enzyme (ACE) activity is one of the common antihypertensive methods functioned by drugs such as captopril, lisinopril and enalapril to serve as inhibitors of ACE. This study was designed to compare the effects of enalapril, an angiotensin-converting enzyme inhibitor and GLM002, an oriental medicine, on tail systolic pressure, aorta and plasma properties in spontaneously hypertensive rats (SHR) after 4 weeks of treatment. During the treatment, blood pressure was depressed to normal in GLM002 and enalapril groups. The treatments of enalapril and GLM002 were discontinued in 4 weeks. One week after the treatment stop, systolic blood pressure was smoothly increased in both groups; the increment of blood pressure was slightly greater in GLM002-SHR, but the increment of plasma ACE activity was proportionately similar in each group. In the aspects of the triglyceride, HDL and total cholesterol level, those levels were slightly different among each group. We also conducted clinical dosage of GLM002 to the patients who have mild and severe hypertension for approximately 7 weeks. Clinical treatments also showed remarkable efficiencies on blood pressure (systolic blood pressure, diastolic blood pressure), complete blood count (CBC) routine, differ count (NEUTRO, LYM, MONO, EOS and BASO) and R-chemistry. We conclude that GLM002, like already proven enalapril, plays a role as an angiotensin-converting enzyme inhibitor, and can be suggested as a drug candidate for curing hypertension.
전통된장으로부터 안지오텐신전환효소(angiotensin converting enzyme; ACE)를 저해하는 물질을 추출하여 그 구조를 밝혀냈다. ACE 저해물질을 열수추출한 다음 gel permeation chromatography (GPC)를 통하여 ACE 저해작용이 큰 두 개의 큰 획분을 받았다. 앞획분은 90%와 70%의 ACE 저해효과를 나타내었으나 단일물질로 분리되지 않아 계속하여 역상 HPLC를 통하여 순수 분리를 하였다. 그러나 앞획분은 순수분리되지 않아 결국 2차원 전기영동/TLC를 통하여 분리한 결과 분자량이 759.63인 아미노기를 갖고 있는 비펩타이드 물질임이 밝혀졌다. 뒷획분은 다른 조건의 HPLC(reverse column과 $NH_2$, column)를 이용하여 순수분리에 성공하였다. 이중 ACE 저해효과가 큰 물질은 분자량 271.33인 dipeptide인 arginine-proline임을 밝혀냈다. 이물질의 ACE $IC_{50}$은 $92\;{\mu}M$이었다. 본 연구 결과는 대부분 ACE 저해물질이 3개 내지 7개 등의 긴 펩타이드임을 감안할 때, 짧은 dipeptide로 ACE 저해펩타이드가 한국의 전통된장에서 생산할 수 있음을 보여주고 있다.
Lactobacillus plantarum is used for fermentation of fish products, meat and milk. However, the utilization of these bacteria in egg processing has not been done. This study was designed to evaluate the potential of fermented egg albumen as a functional food that is rich in angiotensin I-converting enzyme inhibitors activity (ACE-inhibitor activity) and is antihypertensive. A completely randomized design was used in this study with six durations of fermentation (6, 12, 18, 24, 30, and 36 h) as treatments. Six hundred eggs obtained from the same chicken farm were used in the experiment as sources of egg albumen. Bacteria L. plantarum FNCC 0027 used in the fermentation was isolated from cow's milk. The parameters measured were the total bacteria, dissolved protein, pH, total acid and the activity of ACE-inhibitors. The results showed that there were significant effects of fermentation time on the parameters tested. Total bacteria increased significantly during fermentation for 6, 12, 18, and 24 h and then decreased with the increasing time of fermentation to 30 and 36 h. Soluble protein increased significantly during fermentation to 18 h and then subsequently decreased during of fermentation to 24, 30, and 36 h. The pH value decreased markedly during fermentation. The activities of ACE-inhibitor in fermented egg albumen increased during fermentation to 18 h and then decreased with the increasing of the duration of fermentation to 24, 30, and 36 h. The egg albumen which was fermented for 18 h resulted in a functional food that was rich in ACE-inhibitor activity.
본 연구는 70여종의 국내산 해조류중 가장 높은 ACE 저해 활성을 보였던 김(Porphyra yezoensis, 서천)의 산가수분해물로부터 ACE 활성 저해 펩타이 드를 분리하여 그 특성을 조사하였다. ACE 저해물질의 분획은 균일하게 파쇄한 김을 2.5 N HCl로 산 가수분해한 후 중화하여 한외여과로 분자크기 3 kDa 이하의 물질로 분리하였다. 분자크기 3 kDa이하의 물질에 대하여 column chromatography(Amberlite XAD 8, DEAE-Toyopearl, Sephadex LH-20)와 reverse phase HPLC(C18)를 순차적으로 수행하여 ACE 저해제인 PY3--II-b-h5물질을 분리하였다. PY30-II-b-h5는 분자크기는 약 580 dalton으로 glycine(24.5%), arginine(56.8%), proline(18.8%)의 아미노산 조성을 갖는 저분자 펩타이드였으며, ACE의 저해양상은 경쟁적 저해작용을 하였고, IC50 값은 10.6$\mu\textrm{g}$/mL 이었다.
본 연구는 우리나라 전통 발효식품인 장류, 김치류 및 젓갈류로부터 angiotensin converting enzyme 저해활성이 우수한 젖산균을 분리하고자 하였다. 젖산균을 분리하기 위한 선택배지로서 bromocresol purple (BCP) 한천배지를 사용하여 1차적으로 젖산균을 분리하였으며, 그 중 angiotensin converting enzyme 저해활성이 우수한 균주를 최종 선발하였다. 분리된 젖산균을 16S rRNA 유전자 염기서열 분석으로 동정한 결과 Lactobacillus brevis ATCC $14869^T$와 99.7%의 유사도를 나타냄에 따라 L. brevis HLJ59로 명명하였다. L. brevis HLJ59는 내산성의 경우 pH가 2.0, 3.0으로 보정된 DeMan Rogosa Sharpe 액체배지에서 접종 후 각각 90분, 30분이 경과하였을 때 배양초기와 비교 시 약 99% 감소하는 결과를 보였으나, 담즙산(Bile extract)의 경우 1% 첨가 시에도 생육에 저해를 받지 않는 것으로 조사되어 L. brevis HLJ59 균주는 담즙산에 대한 내성이 우수한 균주임을 확인하였다. 항생제 내성의 경우 20종의 항생제를 paper disc법으로 조사한 결과 본 균주는 cephalosporin계의 cefoxatin (30 ${\mu}g$), ceftnaxone (30 ${\mu}g$), penicillin계의 penicillin (10 units), quinolones계 cprofloxacin (5 ${\mu}g$), nalidixic acid (30 ${\mu}g$), lincosamid계의 lincomycin (2 ${\mu}g$) 및 기타 chloramphenicol (30 ${\mu}g$)에 대해서는 내성을 가지고 있음을 확인하였다.
한국의 전통 대두 발효식품 청국장이 정장, 혈액순환 개선 둥의 기능성식품으로 부각되고 있다. 청국장은 발효가 되면서 미생물, 효소, 다양한 생리활성물질이 크게 증가하며, 그 중에는 peptide류도 포함된다. 청국장 Peptide류의 형성은 SDS-PAGE 분석을 통해 확인할 수 있었다. 청국장의 수용성 아미노산중, Tyr, Gln-Lys, Trp, Gln, Lys-Pro 등이 주요성분으로 발견되었고, Lys-Pro (0.083 mg/100 g 시료)가 HPLC에 의해 분리되었다. Lys-Pro은 angiotensin I-converting enzyme (ACE)저해효과 $(IC_{50}=32.1{\mu}m)$를 지니고 있었다. 고혈압군이 분말청국장 20 g을 복용하고 2시간 지났을 때, 수축기 혈압은 15 mmHg, 이완기 혈압은 8 mmHg떨어지는 강하효과가 있었다. 청국장은 ACE 저해제와 혈압강하효과를 갖고 있기 때문에 혈액순환개선에 상당한 도움을 주는 기능성 식품으로 개발될 수 있을 것이다.
항고혈압 효능이 우수하며 부작용이 없는 새로운 고혈압 예방 소재를 개발하고자 한국 식품연구원에서 분리, 동정한 48종의 효모들의 PD broth 배양 농축물들을 대상으로 angiotensin 전환효소(ACE) 저해활성을 조사하여 활성이 우수한 효모들을 선정한 다음 ACE 저해물질의 생산 최적 조건을 검토하였다. ACE 저해활성은 Saccharomyces cerevisiae Y183-3 균주의 PD broth 배양 농축물이 71.8%의 가장 높은 ACE 저해활성을 보여 최종 우수 균주로 선발하였다. 그리고 이 Y183-3 효모를 $30^{\circ}C$에서 36시간 PD broth에 배양했을 때 ACE 저해물질이 가장 많이 생산되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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