• KSBB Journal
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• 제21권6호
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• pp.489-492
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• 2006

분자육종의 목적을 위하여 Agrobacterium을 이용한 Brassica napus 식물의 유전적 형질전환은 폭 넓게 시행되어 왔다. B. napus cv. napus는 유지작물의 하나이면서 이 또한 Agrobacterium을 이용한 형질전환이 가능하다. 본 연구에서는 agroinfiltration방법을 이용시 유채유묘의 형질전환이 낯은 효율로 나타나고 있으며 이는 fluorometric GUS assay에 의하여 판단되었다. 대조적으로 유채유묘에 대하여 sodium hydrosulfite 용액을 agroinfiltration 과정 이전에 처리할 경우 형질전환율이 상당히 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. RT-PCR에 의한 GUS유전자발현의 확인을 통하여 유채유도를 이용한 일시발현체계의 개발가능성을 제시하였다.

• KSBB Journal
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• 제16권5호
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• pp.480-485
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• 2001

국화과에 속하는 다년생 초본식물의 민들레가 Agrobacteria 에 대한 숙주로서의 가능성을 조사하고 여러 가지 유용한 유전자를 민들레로 도입시키기 위해, 민들레잎 절편을 pBI121으로 형질전환된 Agrobacterium tumefaciens LBA4404와 10분동안 공동배양하여 형질전환시킨 후, 1$\mu$M IAA, 1$\mu$M BA. 50 $\mu$g/ML Km과 100$\mu$g/ML Cb이 함유된 MS 배지에서 약 2주후에 multiple shoot를 유가시켰다. 유기된 shoot로 부터 유식식물체를 얻었으며, 형질전환을 확인하기 위해 GUS활성을 측정한 결과 양성 반응을 보였다.

• 한국초지조사료학회지
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• 제26권4호
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• pp.193-198
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• 2006

유용유전자 도입을 통한 신품종 오차드그래스를 개발할 목적으로 Agrobacterium을 이용한 효율적인 형질전환 체계를 확립하였다. 오차드그래스 성숙종자 유래의 캘러스를 standard binary vector인 pIG121Hm을 가지고 있는 Agrobacterium을 이용하여 감염시킨 후 공동배양하여 형질전환 시켰다. Agrobacterium을 이용한 형질전환에 있어서 중요한 인자로 작용하는 AS 첨가와 오차드그래스 품종에 따른 캘러스의 형질전환 효율의 차이를 GUS 유전자의 발현정도로 조사하였다. 'Roughricer' 품종의 형질전환 효율이 가장 우수하였으며, Agrobacterium 감염시에 접종배지와 공동배양배지에 $200{\mu}M$의 AS를 첨가해 주었을 때 형질전환 효율이 증가하는 것으로 나타났다. 50 mg/L의 hygromycin이 첨가된 선발배지에서 살아남은 캘러스로부터 정상적인 식물체가 재분화 되었으며 이들 형질 전환체에 대한 GUS 염색과 PCR 분석을 실시한 결과 발현벡터의 T-DNA 영역이 형질전환식물체의 genome에 성공적으로 도입되었음을 확인할 수 있었다. 본 연구를 통하여 확립된 효율적인 형질전환시스템은 환경스트레스 내성 신품종 오차드그래스의 개발에 유용하게 이용될 수 있을 것이다.

• 생명과학회지
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• 제15권6호
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• pp.1034-1036
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• 2005

배추 종자 및 유묘에 대하여 GUS발현 또는 hepatitis B surface antigen (HBsAg)발현 벡터를 지니는 Agrobacterium tumefaciens LBA4404 세포를 이용하여 진공침윤(agroinfiltration)에 의한 형질전환을 시도하였다. 특히 ELISA를 이용한 HBsAg발현의 정량적 분석에서 agroinfiltration방법은 형질전환효율이 매우 저조하게 나타났다. 그러나 차아염소산나트륨 용액을 발아 전 또는 발아 중인 배추종자에 처리한 후 agroinfiltration을 실시한 경우 형질전환 효율이 $2\~5$배 증가하였다. 따라서 차아염소산나트륨 등의 화학연마제에 의한 종자의 상처발생이 Agrobacterium의 감염을 용이하게 함으로써 배추유묘에서의 일시유전자발현을 증대시키는 것으로 제안되고있다.

• 한국초지조사료학회지
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• 제22권2호
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• pp.101-106
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• 2002

환경 스트레스에 의해 야기되는 활성 산소종에 의한 피해에 내성을 가지는 식물의 개발을 위하여 딸기 유래의 cytosolic ascorbate peroxidase 유전자(ApxSC7)를 Agrobacterium tume-faciens LBA4404를 매개로 형질전환 시켰다. Hygromycin으로 선발된 캘러스로부터 재분화 된 식물체는 야생형과 비교하여 형태적으로 차이를 나타내지 않았다. PCR 및 Southern blot 분석을 통하여 형질전환 식물체의 염색체 내에 ApxSC7 유전자가 integration 되었음을 확인하였다. 담배 잎으로부터 total RNA를 분리하여 Northern blot 분석을 실시한 결과, 도입된 유전자가 형질전환 식물체 내에서 지속적으로 발현된다는 것을 확인하였다.

• 아시안잔디학회지
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• 제18권3호
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• pp.141-148
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• 2004

다양한 Zoysiagrass 4가지 품종들을 식물재료로 사용하여 Agrobacterium만 이용한 방법 그리고 particle bombardment로 배발생캘러스에 상처를 낸 후, Agrobacterium으로 공동배양 시키는 2가지 다른 형질전환 방법을 비교하였다. 예비실험에서 일반적으로 형질전환에 널리 사용되는 kanamycin과 PPT(phospinitricin)의 적적선발농도에 대해서 실험하였는데, kanamycin의 경우 300mg/l 그리고 PPT의 경위 50mg/l의 농도에서 가장 효과적인 선발 효율을 나타내었다. Agrobacterium을 이용한 형질전환은 Agrobacterium을 2일간 배양시킨 다음, 박테리아 농도를 O.D 600nm=1.0-1.2로 맞추고, 배발생캘러스를 30분간 간염 시키는 방법이 효과적이었는데, particle bombardment를 이용하여 캘러스에 상처를 유발시킨 후, Agrobacterium으로 감염시키면 3배 이상 높은 형질전환 수율을 획득할 수 있었다. 이상의 결과는 한국잔디 형질전환에 있어서 particle bombardment과 Agrobacterium을 병행하여 실시한 최초의 보고이고, 이러한 시스템을 기반으로 하여 향후 한국잔디를 포함하여 다른 난지형 및 한지형 잔디의 품종개량에 널리 이용되리라 생각된다.

• 원예과학기술지
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• 제18권6호
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• pp.797-801
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• 2000

본 연구는 고추에서 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질 전환시 형질전환율을 높이기 위하여 A. tumefaciens와의 접종시간과 인위적인 상처처리에 따른 효과를 조사하였던 바 고추 형질전환시 자엽절편체의 재분화는 인위적 상처처리 및 A. tumefaciens 접종시간에 의해 영향을 받았다. 접종시간을 3600초로 한 경우의 재분화는 상처처리에 의해 급격히 감소하였으며 자엽 절편체에 대한 인위적인 상처처리가 20초 또는 120초간의 접종시간처리와 병행됨으로써 형질 전환율을 58-72% 이상으로 높이는 효과를 보였다. 형질전환여부의 확인을 ${\beta}$-glucuronidase 염색법과 npt II primer를 이용한 polymerase chain reaction 분석에 의해 수행 한 바 효과적인 것으로 판단되었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제21권1호
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• pp.55-58
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• 1994

Agrobacterium-based vector를 이용하여 상추를 형질전환 및 재분화 하였다. 즉 $C_{a}$ MV 35S promoter와 GUS 유전자를 reporter로 가지고 있는 pBl121을 Agrobacterium tmfaciens LBA4404에 도입시킨 후 상추의 자엽 절편과 cocultivation을 통하여 형질전환 시키고 재분화 시켰다. Southern 및 Northern 분석을 통하여 형질 전환 및 재분화된 상추에 GUS 유전자가 안정하게 도입되고 식물체내에서 mRNA로 발현됨을 확인하였다. 또한 GUS 유전자가 식물 체내에서 단백질로 발현됨을 확인하기 위하여 상추 잎의 단백질 추출액을 이용하여 분광분석법에 의하여 GUS의 활성을 측정하였다. 시료간의 약간의 차이는 있으나 시료로부터 유의적인 GUS 활성을 확인하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권3호
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• pp.177-181
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• 1998

토마토에서 GUS 유전자를 가진 Agrobacterium을 이용하여 형질전환된 캘러스와 형질전환 되지 않은 캘러스의 peroxidase(POD)와 superoxide dismutase(SOD) 활성 차이를 조사하여 형질전환된 세포의 안전성평가의 기초자료로 삼고자 얻어진 결과는 다음과 같다. JA101 종자로부터 형성된 hypocotyl의 POD, SOD 비활성은 각각 23 unit/mg protein와 2,156 unit/mg protein로 공시품종 중 가장 높은 활성을 나타내었다. Hypocotyl 절편체로부터 유도한 캘러스 생장은 1mg/L 2,4-D의 농도에서 가장 좋았으며, 1 mg/L 2,4-D가 함유된 배지에서 유도된 캘러스에서 POD 와 SOD 비활성은 각각 47 unit/mg protein 와 95,786 unit/mg protein로 높게 나타났다. Agrobacterium과 hypocotyl 절편체와의 공동배양으로부터 형성된 캘러스중 21.6%의 형질전환된 캘러스를 얻을수 있었으며, 형질전환된 캘러스의 POD 비활성은 54 unit/mg protein로 형질전환 되지 않은 캘러스의 64 unit/mg protein보다 낮게 나타났고, SOD 비활성은 형질전환된 캘러스가 30,300 unit/mg protein로 형질전환되지 않은 캘런스의 37,077 unit/mg protein 보다 낮게 나타났다. 형질전환된 캘러스와 형질전환되지 않은 캘러스간의 isozyme pattern 차이는 인정할 수 없었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권4호
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• pp.267-271
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• 2004

국내 고구마 율미 품종의 배발생 캘러스를 Agrobacterium 매개 방법을 이용하여 형질전환 식물체를 개발하였다. 배발생 캘러스를 7일 동안 전배양 한 후 Agrobacterium과 2일 간 공동배양할 경우 일시적인 형질전환 효율이 가장 높았다. Agrobacterium과의 공동배양 후 배발생 캘러스를 1mg/L 2,4-D, 100mg/L kanamycin, 400mg/L claforan 이 첨가된 선발배지에서 4주 간격으로 계대배양하였다. 선발된 kanamycin 저항성 캘러스를 2,4-D를 제거한 선발배지로 옮겨 체세포배를 유도하였으며 이후 소식물체로 발달하였다. Southern 분석으로 1-3 copy의 GUS 유전자가 고구마 염색체내로 도입되었음을 확인하였다. 또한 조직학적 분석으로 GUS 유전자가 형질전환 고구마의 배발생 캘러스, 재분화 식물체의 잎, 엽병, 및 뿌리 조직에서 강하게 발현됨을 알 수 있었다.