• 한국미생물·생명공학회지
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• 제37권4호
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• pp.389-398
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• 2009

본 연구실에서 개발한, 김치에서 분리한 Leu. mesenteroides SY2 유래 pFMBL1 을 바탕으로 구축한 셔틀벡터인, pSJE[7]를 외래유전자 발현에 적합하게 개량한 발현벡터를 구축하였다. Lactococcus lactis LM0230에서 분리한 프로모터 P6C를 pSJE에 도입하였다. P6C 염기서열을 지닌 oligonucleotide 쌍을 따로 제조한 후 annealing을 통해 짧은 DNA 단편을 얻어서 제한효소 처리후 pSJE에 도입하여 pSJE6c를 구축하였다. PSJE6c 효능 검증을 위해서 외래 유전자인 aga와 lacZ를 각각 pSJE6c에 도입하였다. P6C 프로모터와 비교를 위해 고유 프로모터를 지닌 유전자들도 각각 pSJE에 도입하였다. 재조합 plasmid들을 electroporation 방법으로 Lactobacillus brevis 2.14 균주에 도입하고 재조합균주들의 생육곡선과 효소역가 그리고 slot blot으로 전사체 농도를 측정하였다. 결과를 보면 PSJE6c에 클로닝 된 유전자들이 pSJE상의 유전자보다 효소역가들이 약 1.5배에서 2배 정도로 높았다. 전사체 농도 측정 결과도 pSJE6c 들에서 더 많은 전사체가 생성됨을 보여주었다. 이상 결과들은 효율적인 발현벡터들의 사용을 통해서 김치유산균에서 외래유전자 발현 효율을 높일 수 있음을 보여준다.

• 생명과학회지
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• 제24권9호
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• pp.995-1000
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• 2014

바이러스 분리 및 검출 측면에서의 해양바이러스 연구는 높은 빈도의 돌연변이와 유전적 다양성 때문에 한계가 있어 왔다. 현재 해양바이러스를 검출하기 위해 사용되고 있는 방법 중 ELISA를 기반으로 하는 혈청학적 방법이 가장 보편적이다. 혈청학적 방법은 항체의 질과 고도로 정제된 정확한 항원을 요구한다. 최근에 바이러스 외피단백질을 항원으로 이용하고자하는 새로운 실험시스템이 yeast surface display (YSD)를 사용하여 개발되었다. 이 연구에서는 붉바리 신경괴사 바이러스(RGNNV)의 외피단백질 유전자를 YSD와 HA-tagging 시스템을 이용하여 발현시키고 정제하였다. 2개의 RGNNV 외피단백질 유전자 조각(RGNNV1 및 RGNNV2)을 염기서열 데이터베이스에 기초하여 합성하였고, 효모 발현 벡터인 pCTCON로 클로닝하였다. 효모 strain EBY100에서의 RGNNV 외피단백질의 발현은 발현벡터에 의해 코드되는 C-말단의 c-myc tags를 인지하는 형광표지된 항체를 이용하여 flow cytometry로 검출되었다. 발현된 RGNNV 외피단백질은 ${\beta}$-mercaptoethanol 처리 후 Aga1과 Aga2 사이의 이황화결합 절단에 의해 효모표면으로부터 분리되었다. Anti-HA 항체를 사용한 Western blots을 수행하였을 때 각 RGNNV 외피단백질이 정해진 크기에서 검출되는 것이 확인되었다. 이러한 결과는 YSD와 HA-tagging 시스템이 재조합 RGNNV 외피단백질의 발현과 정제에 적용가능함을 나타낸다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제12권3호
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• pp.411-416
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• 2002

Bacillus macerans cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) was expressed on the cell surface of Saccharomyces cerevisiae by fusing with Aga2p linked to the membrane-anchored protein, Aga1p. The surface display of CGTase was confirmed by immunofluorescence microscopy and its enzymatic ability to form ${\alpha}$-cyclodextrin from starch. The maximum surface-display of CGTase was obtained by growing recombinant S. cerevisiae at $20^{\circ}C$ and pH 6.0. S. cerevisiae cells displaying CGTase on their surface consumed glucose and maltose, inhibitory byproducts of the CGTase reaction, to enhance the purity of produced cyclodextrins. Accordingly, the experimental results described herein suggest a possibility of using the recombinant S.cerevisiae anchored with bacterial CGTase on the cell surface as a whole-cell biocatalyst for the production of cyclodextrin.

• Journal of Pharmaceutical Investigation
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• 제23권4호
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• pp.217-223
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• 1993

The combined products of antacid and anti-ulcer agent were prepared with antacid composed of aluminium hydroxide dried gel, magnesium hydroxide and simethicone with a ratio of 1:1:0.1 (M) and anti-ulcer agent, aceglutamide aluminium (AGA). The efficacy of antacid was evaluated in vitro with Fuchs, Johnson-Duncan and Rosset-Rice methods and in vivo using an aspiration method in rat. The addition of anti-ulcer agent did not affect the neutralizing capacity of M significantly. The combined products with the M/AGA ratios of 2.3:1 and 3.4:1 produced the maximum pH of $4.0{\sim}5.8$ and the duration time of $64{\sim}137$ min in vitro test. The in vivo neutralizing test in rats showed the rapid increase of gastric pH up to 3.5 within 30 min and the gastric pH of $4{\sim}6$ was kept for 5 hr.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제16권3호
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• pp.360-367
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• 2006

The endoinulinase gene (inu1) from Pseudomonas mucidolens was expressed on the cell surface of Saccharomyces cerevisiae by fusing with Aga2p linked to the membrane anchored protein, Aga1p. The inu1 gene of P. mucidolens was subcloned into the surface display vector, pCTcon (GAL1 promoter). The constructed plasmid, pCTENIU (8.5kb), was then introduced to S. cerevisiae EBY100 cells and the yeast transformants selected on synthetic defined media lacking uracil and inulin-containing media. The inu1 gene under the control of the GAL1 promoter was successfully expressed in the yeast transformants, and the surface display of endoinulinase confirmed by immunofluorescence microscopy, along with its enzymatic ability to form inulooligosaccharides (IOSs) from inulin. The total endoinulinase activity reached about 2.31 units/ml when the yeast transform ants were cultivated on a YPDG medium. To efficiently hydrolyze the inulin, various reaction conditions were examined, including the pH, temperature, and inulin source. The optimized conditions were then determined as follows: pH, 7.0; temperature, $50^{\circ}C$; inulin source, Jerusalem artichoke. Under the optimized condition and 46 units of endoinulinase per g of inulin, IOSs started to be produced after 10 min of enzymatic reaction. The highest yield, 71.2% of IOSs, was achieved after 30 h of reaction without any significant loss of the initial enzyme activity. As a result of the reaction with inulin, IOSs consisting of inulobiose (F2), inulotriose (F3), inulotetraose (F4), and inulopentaose (F5) were produced, and F4 was the major product.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제46권5호
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• pp.447-453
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• 2003

목 적 : 당뇨병 산모의 빈도가 증가함에 따라 이들에서 태어난 신생아에서 거대아, 대사성 합병증, 선천성 기형 및 분만 손상 등의 주산기 유병률이 높아 문제가 되고 있다. 본 연구는 당뇨병 산모아에서 출생 체중에 따른 주산기 합병증 및 주산기 인자에 차이가 있는지 알아보고자 하였다. 방 법: 1996년 1월부터 2002년 3월까지 전남대학교병원에서 입원하였던 단태 임신의 당뇨병 산모와 그 신생아 중, 부당 경량아와 재태 연령 30주 미만의 환아를 제외한 301례를 대상으로 하여 산모에서는 체중과 신장, 분만력, 당화 혈색소치, 당뇨병의 분류 및 치료를, 그리고 신생아에서는 대사성 합병증, 분만 손상 및 심기형을 포함한 선천성 기형에 대해 의무 기록지를 통하여 후향적으로 분석하였으며, 대상아를 부당 중량아군(1군, 162명)과 적정 체중아군(2군, 139명)으로 나누어 합병증 및 주산기 인자의 차이를 조사하였다. 결 과: 대사성 합병증은 저마그네슘혈증(37.5%), 황달(21.3%), 저혈당증(11.0%) 및 저칼슘혈증(7.0%) 순이었으며, 분만 손상은 59명(19.6%), 동반된 선천성 기형은 동맥관 개존을 포함하여 75명(24.9%)이었고 심기형이 가장 많았다. 부당 중량아군(1군)과 적정 체중아군(2군) 두 군간의 주산기 합병증을 비교해 본 결과, 1군에서 2군에 비해 황달의 빈도(27.7% vs. 16.7%, P<0.05)와 저혈당증 빈도(15.6% vs. 7.4%, P=0.02), 빈호흡의 빈도(10.6% vs. 3.6%, P<0.05) 및 분만 손상의 빈도(24.1% vs. 14.5%. P<0.05)가 의의 있게 높았으며, 심실 중격이 두터웠다($5.5{\pm}3.1mm$ vs. $4.7{\pm}1.1mm$, P<0.05). 당뇨병 산모아의 출생 체중에 영향을 줄 수 있는 주산기 인자를 비교해 본 결과, 1군에서 산모의 키와 임신 전 체중 및 임신 기간 중 체중 증가가 의의 있게 컸고(모두 P<0.01), 산모가 임신 기간 동안 임신성 당뇨를 인지하지 못했던 경우가 더 많았다(21.7% vs. 6.6%, P<0.01). 결 론 : 당뇨병 산모아에서 출생 체중군에 따른 주산기 합병증은 부당 중량아군에서 적정 체중아군에 비해 황달, 저혈당증 및 분만 손상의 빈도가 의의 있게 높았고 심실 중격 두께가 두터웠으며, 산모의 키가 더 크고 임신 전 체중 및 임신 기간 동안 체중 증가가 컸으므로, 부당 중량아를 분만할 수 있는 고위험 임산부에 대한 주의 깊은 검사와 관리가 필요하리라 사료된다.

• 한국의학물리학회지:의학물리
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• 제12권1호
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• pp.59-70
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• 2001

부신수질 크로마핀세포는 아세틸콜린에 반응하여 카테콜아민을 분비한다. 카테콜아민이 분비되기 위하여는 세포외 칼슘이 절대적으로 필요한데 이는 막전압 의존성 칼슘통로를 통하여 칼슘이 세포 속으로 유입되어야 분비기전이 시작됨을 시사한다. 부신수질 크로마핀 세포를 단일세포로 분리한 후 패치클람프 테크닉을 적용하여 여러 종류의 칼슘통로가 존재한다는 것이 알려져 있으나 아직 종이 달라짐에 따라 다른 칼슘통로가 존재하는 지 여부가 확실하지 않다. 그러므로 본 연구에서는 흰쥐 부신수질 크로마핀 세포를 대상으로 하여 단일 세포 패치클람프 테크닉을 적용하여 이 세포에 존재하는 다양한 칼슘통로의 존재를 확인하고자 하였다. L형 칼슘통로 억제제인 nicardipine, N형 칼슘통로 억제제인 $\omega$-CgTx GVIA, P형 칼슘통로 억제제인 $\omega$-AgaTx IVA를 사용하여 L형, N형, P형 칼슘통로가 흰쥐 부신수질 세포에 존재함을 확인하였고 개개의 칼슘통로가 전체 칼슘전류에 기여하는 정도는 L형 >N형> P형이었다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권1호
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• pp.43-45
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• 2013

Background: The aim of this epidemiological study was to establish the laterality of breast cancer (BC) and its association with size, receptor status of the primary tumor and bone metastasis (BM) in a local population. Materials and Methods: This retrospective study included cases of BC from Jan-2009 to Dec-2011 who were referred for metastatic work up or follow up survey with Technetium-99m MDP bone scan (BS) to the Nuclear Medicine Department of Karachi Institute of Radiotherapy and Nuclear Medicine (KIRAN). A total of 384 patients out of 521 were included and all reviewed for age, primary tumor size (PTS), laterality, receptor status like estrogen receptor (ER) progesterone receptor (PR) and Her-2-Neu receptor, presence or absence of BM with sites of involvement and time interval between diagnosis of BC and appearance of BM. Results: The left to right sided BC proportion was significantly higher than unity (59%:41%; p<0.001). The right sided BC was observed in younger age group (46:52 years; p<0.0001) and with a smaller PTS than the left sided (3.43:4.15 cm; p<0.0001). The patients with BM had relatively higher negative receptor status with a significant predominance of right sided BC. The overall incidence of BM on BS was 28% and relatively higher in right than left breast (33%:24% p=0.068). The average number of BM sites was also significantly greater for the right side (6:4, P<0.0001). The % cumulative risk of BM in right breast was noted at significantly smaller PTS than left side with log rank value of 5.579; p<0.05. The Kaplan Meier survival plot for event free survival of BM in left sided BC was significantly higher than for the right side (log rank value=4.155, p<0.05), with an earlier appearance of BM in right BC. Conclusions: 1) A left sided predominance of BC was seen in local population; 2) right sided BC had a more aggressive behavior with extensive and earlier appearance of BM at relatively younger age, smaller PTS and receptor (s) negativity.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권1호
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• pp.183-188
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• 2013

Background: Breast cancer (BC), the most common female cancer in Pakistan, is associated with a very high mortality. However, the roles of individual risk factors for BC among Pakistani women are still controversial. To assess potential risk factors for BC, a matched case-control study was conducted in two tertiary care hospitals of Karachi, Pakistan. Materials and Methods: The study population included 297 pathologically confirmed incident cases of BC patients diagnosed between January 2009 and December 2010. 586 controls without any history of BC were matched on hospital and ${\pm}5$ years of ages. Results: Positive family history of BC (MOR=1.72; 95%CI: 1.10, 2.80 for first degree vs. none), single marital status (MOR=1.55; 95%CI: 1.10, 2.39 for single/divorced/widowed women vs. married women), older age at menopause (MOR=3.92; 95%CI: 2.52, 6.18 for menopausal women aged below 45 years, MOR=6.42; 95%CI: 3.47, 11.98 for menopausal women above 45 years of age compared with premenopausal women) conferred an increased risk of BC for women. Increasing parity decreased the risk of BC (MOR=0.90; 95%CI: 0.85, 0.97 for each live birth). Intake of Vitamin D supplements (MOR=0.30; 95%CI: 0.12, 0.81 for ${\leq}3$ years and MOR=0.27; 95%CI: 0.13, 0.56 for >3 years) was protective compared to non-users of Vitamin D. Conclusions: This study confirmed only few of the recognized risk factors in Pakistani women. The protective effect of Vitamin D is important from public health perspective and needs to be further explored through a randomized controlled trial.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제13권2호
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• pp.287-291
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• 2003

Botulinum neurotoxin type A (BONT/A) is an extremely potent toxin, which is produced by Clostridium botulinum. The light chain of this protein (BONT/A LC), which is known as a zinc endopeptidase, cleaves SNAP-25 involved in the exocytosis process. In this work, the expression of recombinant BoNT/A LC in E. coli is described. The BONT/A LC gene of C. botulinum contains a high frequency of the arginine AGA and isoleucine ATA codons that are rarely used in genes of E. coli, hampering the translation of recombinant protein. The argD and ilex tRNA genes were cloned into pACYC184 vector, resulting in pAAD131X plasmid. The translational stress of the toxin gene related to codon bias was reversed by fupplernentation of the AGA arginyl tRNA of T4 phage and AUA isoleucyl tRNA of E. coli. This system may be applicable for the expression of a variety of AT-rich heterologous genes in E. coli.