산사(Crataegus pinnatifida Bunge) 중의 생리활성물질이 이상지질혈증에 있어서 간 조직 및 간 기능 대사효소의 활성 변화 등에 생리적 효능이 있을 것으로 판단되어 Sprague Dawley계 수컷 흰쥐를 이용하여 실험을 수행하였다. 대조군인 NND군, 대조군에 산사 추출물을 섭취시킨 NNDH 군, 이상지질혈증군인 CDD 군, 이상지질혈증군에 산사 추출물을 섭취시킨 DDH 군으로 나누어 5주간 실험 사육하였다. ALP(alkaline phosphatase), LDH(lactate dehydrogenase), AST(aspartate aminotransferase) 및 ALT(alanine aminotransferase) 활성은 모두 동일한 경향을 나타내었다. NND 군과 NNDH 군 간에는 유의적인 차이가 없었다. 이상지질혈증군인 CDD 군이 가장 높은 활성을 보였고, 이상지질혈증군에 산사 추출물을 섭취시킨 DDH 군에서 감소하는 것으로 나타났다. 간장의 조직학적 검사는 NND 군과 NNDH 군에서는 어떠한 이상 소견도 발견하지 못하였으나, CDD 군에서 지방 세포의 수와 크기증가, 지방 변성 및 염증 세포 등이 관찰되었고, DDH 군에서 지방 세포의 수와 크기가 줄어들었으며, 지방 변성 등이 감소된 것을 관찰할 수 있었다. 따라서 산사 추출물은 지방세포 분화 억제 및 지방 분해 작용과 간 기능 개선 효과 있는 것으로 추정되며, 간 보호 기능성 물질로서 활용 가능성이 우수할 것으로 사료된다.
본 연구에서는 수온 증가에 따른 말전복 (Haliotis gigantea) 과 둥근전복 (H. discus discus) 헤모림프의 생리 및 면역학적 변화를 관찰하기 위하여 위 두 전복을 20, 22, 24, 26 및 $28^{\circ}C$ 수온에 각각 4 일간 노출시켰다. 노출 결과, 헤모림프의 totalo-protein (TP), glucose, calcium (Ca) 은 둥근전복 (H. discus discus)이 말전복 (H. gigantea) 보다 높은 값을 보였으나, magnesium (Mg), alkaline phosphatase (ALP) 두 전복에서 유사한 값을 보였다. 그리고 면역인자인 PO에서는 둥근전복 (H. discus discus)이 더 높게 나타났다. 수온 증가에 따른 헤모림프의 TP, glucose, Mg, AST, ALT 및 ALP는 유의적인 변화가 나타나지 않았다. 하지만 헤모림프의 Ca 농도는 둥근전복 (H. discus discus)에서 $24^{\circ}C$ 이상, 말전복 (H. gigantea)에서는 $26^{\circ}C$ 이상의 수온에서 유의적 증가를 보였다. 그리고 면역인자인 phenoloxidase (PO) 는 둥근전복 (H. discus discus)은 $22^{\circ}C$ 이상 말전복 (H. gigantea) 에서는 $26^{\circ}C$ 이상의 수온에서 유의적 감소를 나타내었다. 결론적으로 말전복 (H. gigantea)은 $24^{\circ}C$ 이상에서 혈액학적 변화를 보였고, $26^{\circ}C$ 이상에서 면역학적 변화를 보였다. 둥근전복 (H. discus discus)은 $26^{\circ}C$ 이상에서 혈액학적 변화를 보였고, $22^{\circ}C$ 이상에서 면역학적 변화를 나타내었다.
It is commonly acknowledged that bone morphogenic protein (BMP-2) functions as a potential osteogenic inducer in bone formation. Recently, several papers reported that bone marrow-derived stem cell (BMSC) from human is not responsive to BMP-2 in comparison to high capacity of BMP-2 in the osteoinduction of stromal cell derived from bone marrow of rodent animals such as rat or mouse. In this study, we characterized BMSC derived from 11 years old donor for the responsiveness to rhBMP-2, dexamethasone (Dex) and 1,25-dihydroxyvitamin D (vitamin D), in order to analyze their function in the early osteogenesis. The effect of over mentioned agents was evaluated by means of assessing alkaline phosphatase (ALP) activity/staining, RT-PCR analysis and von Kossa staining. In addition, we analyzed the meaning of expressed several osteoblastic markers such as alkaline phosphatase, collagen typeI, osteopontin, bone sialoprotein and osteocalcin with relation to either differentiation or mineralization. Only in the presence of Dex, human BMSC could commit osteoblastic differentiation and matrix mineralization, and either BMP-2 or vitamin D treatment was not able to induce. But BMP-2 or Vitamin D showed potential synergy effect with Dex. ALP and bone sialoprotein were clearly expressed in response of Dex treatment compared to weak expression of osteopontin in early osteogenesis. Therefore, we expect that this study will contribute partly to elucidiating early osteogenesis mechanism in human, but variations among bone marrow donors must be considered through further study.
This study was carried out to investigate the effects of Korean safflower(Carthamus. tinctorious L.) seed powder supplementation on bone metabolism during the recovery of rib-fracture induced by surgical operation in rats. Male Sprague-Dawley rats of 10 weeks old, weighing 370$\pm$5g, were divided into two groups after arrival : the control group(C group, AIN-76 semifurified diet) and safflower seed group(S group, AIN-76 semifurified diet+10% safflower seed powder). They were fed experimental diets for 12 days before the rib fracture operation and for 30 more days after the operation. A number 9 rib was fractured surgically and sham-operation was also performed. After the rib-fracture operation, rats were sacrificed on the 8th, 11th, 16th, 21st, and 30th day, respectively. The body weights were decreased on the 8th day after operation in both groups but recovered gradually thereafter. The fractured sections of the S group were more strongly adhered and more rapidly repaired than those of C group. Effects of safflower seed powder supplementation on indices of bone metabolism during the repairing of rib-fracture can be summarized as following. There were no differences between C and S group. In the levels of PTH and calcitonin, which regulate the concentration of plasma calcium. However, PTH level on the 8th day was significantly higher than that on the 16th day in control group. There were also no differences between groups or within groups in the levels of calcitonin. Osteocalcin levels, one of the bone-formation indices, were similar in two groups. Activities of total-ALP in plasma were highest at the 8th day in both groups and decreased thereafter, except on the 30th day in control group. The activities of bone-specific ALP that is directly related to bone calcification, showed higher levels in the S group than in the C group throughout the experimental period. They were significantly increased in the S group on the 11th, 16th, and 21st days. In comparisons of plasma calcium and phosphate levels, Ca levels were tended to be lower in the S group than in the C group and P levels showed the opposite trend. It seems that the fractured ribs were more rapidly repaired in rats supplemented with safflower seed powder than in control rats, possibly due to stimulation of bone calcification from increased activity of bone-specific ALP. (Korean J Nutrition 31(6) : 1049-1056, 1998)
S-2 (3-aminopropylamino)ethylphosphorothioic acid (WR-2721)이 방사선에 대한 방어 효과에 미치는 영향을 규명 하고자 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐를 대조군, WR-2721 단독투여 군 (200mg/kg), X-선 단독조사군, WR-2721투여 (200mg/kg)후 X-선 조사한 병용군으로 나누어 X-선 8 Gy선량을 전신 조사한 후 1, 3, 7, 10일 간에 각각 혈액을 채취하여 효소활성 치와 glucose함량 변화를 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. X-선 단독조사군에서는 ALP와 AST의 활성치가 대조군에 비하여 감소하였으나 WR-2721을 병용한 군에서는 그 감소폭이 줄어들었고, ALT와 LDH의 활성치는 X-선 단독조사군에서 대조군에 비하여 증가하였고, WR-2721을 병용한 군에서는 그 증가폭이 감소되었다. 또한 glucose치의 변동은 X-선 단독 조사군에서 대조군에 비하여 유의성 있게 증가하였으나 WR-2721을 병용한 군에서는 그 증가폭이 감소되었다. 이로 미루어 보아 WR-2721이 X-선으로부터 생체내 주요 장기들을 보호하는 작용이 있음을 시사하고 있다.
본 연구는 0.03%의 카페인 함유 식이를 폐경모델인 난소절제쥐에서 6주간 섭취시켜 골밀도와 골무기질함량에 미치는 영향을 아래와 같이 요약하였다. 1) 체중증가량은 난소절제군이 Sham군에 비해 유의적으로 높았으며 각 군내에서 카페인 섭취에 따른 차이는 없었다. 2) 혈 중 칼슘 농도는 난소절제군내에서 카페인군이 대조군보다 유의적으로 낮게 나타났다. 3) 혈 중 ALP는 Sham군과 난소절제군 모두에서 카페인 군이 대조군보다 높은 경향을 나타내었다. 혈중 Osteocalcin은 Sham 군과 난소절제군, 그리고 각 군내에서 카페인 섭취여부에 따라 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 4) 요 중 칼슘 및 인의 농도, 요 중 Deoxypyridinoline(DPD)와 crosslinks value는 Sham 군과 난소절제군, 그리고 각 군내에서 카페인 섭취여부에 따라 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 5) 척추골밀도는 Sham군에 비해 난소절제군이 유의적으로 낮았고, 난소절제군내에서 카페인 첨가군과 대조군간에 차이가 없었다. 6) 대퇴골밀도와 대퇴 골무기질 함량은 Sham군과 난소 절제군 간의 차이는 없었고, 각 군내에서 식이에 따른 차이도 없었다. 따라서 카페인 0.03% caffeine 섭취는 난소절제쥐에서 6주간 섭취 시킨 경우 척추와 대퇴골밀도에 부정적 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
Objectives This study investigated the effect of purified safflower (Carthamus tinctorius Linne) and safflower seed (Carthamus tinctorius L. seed; CS) extract, using hot water and ethanol extract methods , on the osteogenic differentiation of MC3T3E1 cells.Methods The safflower and safflower seed were extracted with hot water and ethanol. The samples were concentrated by a rotary evaporator and then freeze-dried using a freeze-dryer. The MC3T3E1 cells were propagated and maintained in DMEM (Gibco) containing 10% FBS and a 1% antibiotic antimycotic solution. To induce osteogenic differentiation, the cells were treated for 14 days with DMEM with 10 mM β-glycerophosphate and 50 μM ascorbic acid. Extract doses were confirmed by the results of an MTT assay, and treatment of the extracts was performed in a differentiation medium every two days. The ALP staining and activity were tested after osteogenic differentiation for five days, and after 14 days, osteogenic differentiation was determined by alizarin red S staining. The mRNA expressions of osteogenic-related genes were quantified using quantitative real-time PCR.Results In the results of the MTT assay, all concentrations of safflower extracts had no toxicity in the MC3T3El cells. But in the groups of 100 ng/ml and 200 ng/ml concentrations of safflower seed extracts, the cell viability was significantly reduced by up to 40-50%. So we fixed the treatment concentration of the extract at 50 ng/ml. In the ALP and alizarin red S staining, all extract groups increased osteogenic differentiation compared with the control group. The water-safflower extract group showed the highest mRNA level of Alp, Runx2, and Dlx5 genes. The mRNA level of Ocn, an osteogenic gene related to late-stage differentiation, in the ethanol-safflower extract group increased the mineralization more significantly than in other groups.Conclusions These data suggest that the extract of safflower increases the osteoblastic differentiation activates of MC3T3E1 cells like the extract of safflower seed. The water-extract and ethanol-extract of safflower have effects on different stages of osteogenesis in MC3T3El. Not only safflower seed but also safflower will be useful therapeutic reagents for age-associated chronic diseases such as osteoporosis.
Bone morphogenetic proteins (BMPs)는 다양한 세포기능을 조절하는 중요한 사이토카인 중 하나이다. 최근 BMP와 일주기 유전자들이 연관되어 있다는 연구결과들이 보고되고 있지만 조골세포에서 일주기 유전자인 Per1의 역할은 아직 명확하지 않다. 본 연구에서는 조골세포 분화에서 Per1의 역할을 조사하였다. MC3T3-E1 세포에서 BMP2 처리에 의해 Per1 mRNA 발현과 luciferase 활성이 증가하는 것을 확인하였다. 또한 Per1 과발현 실험을 통해서 Per1 유전자가 Runx2, ALP, OC의 발현을 증가시켰으며 ascorbic acid와 ${\beta}$-glycerophosphate에 의한 ALP 염색과 석회화가 Per1 과발현에 의해 더욱 증가하는 것을 확인하였다. 이상의 결과는 일주기 리듬을 조절하는 Per1 유전자가 조골세포의 분화를 촉진하는 인자로 작용함을 시사한다.
Background : Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in most of the tissue matrix, taking part in their regeneration when injury or damage occurs. The aim of this study was to investigate the presence of cells with pluripotential characteristics in human subchondral bone and the capacity of these cells to differentiate to osteoblast. Methods : Human subchondral bone were digested with collagenase. Isolated cells were cultured with a-MEM, 15% FBS, 10-8M dexamethasone and 50 ng/mL ascoric acid. Cells from 0 day(isolated cells), 7 day (first subculture) and 14 days (third subculture) were used to carry out phenotypic characterization experiments flowcytometry analysis with 11 monoclonal antibodies) and osteogenic differentiation experiments. Osteogenic differentiation of cells was assessment by quantification of bone extracellular matrix components by following analysis: alkaline phosphatase(ALP) stains to detect ALP activity, RT-PCR and western blot to detect osteocalcin (OCN), osteopontin (OPN) and type I collagen(Col I), and Alizarin red stains to detect calcium deposition. Results : Flowcytometry analyses showed that in our population more than 98% of cells were positive for MSC markers: SH-2(CD105, 99%), CD29 (95%), CD73 (95%). Cells were negative for hematopoietic markers (CD11b, CD34, and CD45). Furthermore, cells showed positive stain to multipotent markers such as CDl17 (c-kit) (15.1%), and CD166 (74.9%), and cell adhesion molecules such as CD54 (78.1%) and CD106 (63.5%). The osteogenic specific marker analyses showed that the culture of these cells for 7 and 14 days stimulates ALP, OCN, OPN and Col I synthesis by RT-PCR and Western blot analysis. Also, after 14 days in the culture of MSCs induces mineralization by Arizarin red stain. Conclusion : In this work, we demonstrated a new and efficient method for osteoblastic differentiation of human subchondral bone stem cells. As MSCs takes part in reparative processes of adult tissues, these cells could play an important role in osteogenesis.
본 연구에서는 실험동물에 민들레 열수추출물 식이를 급여한 후, GalN으로 간손상을 유발함으로써 그 예방효과를 혈액중의 생화학적 변화 및 간조직의 효소적인 변동을 통해서 규명하고자 하였다. GalN의 투여로 현저히 증가하였던 AST, ALT의 활성은 민들레 열수추출물 투여로 억제되었으나 군간의 차이는 보이지 않았고 ALP의 활성과 TBARS 함량은 3%의 추출물을 급여한 군에서 유의적인 감소를 보였다. GalN의 투여로 현격하게 높아졌던 혈중 $TNF-{\alpha}$의 농도 또한 감소하는 경향을 확인하였으나 유의적인 차이는 보이지 않았다. GalN의 투여로 억제되었던 catalase, GSH-reductase, Mn-SOD의 활성은 민들레 추출물 투여로 유의적인 회복이 관찰되었으나 GSH-px의 활성은 그 경향만을 확인할 수 있었다. 조직 검경을 통해 민들레 열수추출물의 간염 예방효과를 확인한 결과 GalN으로 인해 유발된 광범위한 간세포의 괴사와 변성, 지방변성 등이 민들레 열수추출물식이로 다소 감소하는 것을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과로 민들레 열수추출물은 AST, ALT와 ALP의 활성 및 산화적 스트레스를 감소시키고 활성산소 해독계에 관여하는 효소의 활성을 증가시킴으로써 GalN으로 인한 간 손상을 예방하는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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