고령사회에서 노년기 건강의 큰 문제로 대두되고 있는 골다공증은 특히 폐경 후 여성들에게서 가장 그 발생빈도가 높게 나타났으며, 현재 골다공증 예방 및 치료에 사용되고 있는 약제는 대부분 골흡수 억제제로써 진행된 골소실을 회복 시킬 수는 없기 때문에 골형성 증가를 통한 골다공증 예방과 치료에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 산양삼(cultivated wild Panax ginseng, CWP)에 대한 연구는 다수가 원기회복, 자양강장 및 면역증강 효과 등에 대한 것이나 골대사에 미치는 영향에 대한 연구는 거의 없는 실정이다. 이에 본 연구에서는 산양삼 추출물이 조골세포에서 골관련 유전자 발현에 미치는 영향을 확인함으로써 골다공증 예방 및 치료 효과를 갖는 천연 소재로의 활용 가능성을 검토하고자 하였다. 산양삼 추출물 처리가 조골 세포의 증식에 미치는 영향을 알아보기 위해 MTT assay를 실시하였고, MC3T3-E1 세포생존률은 FBS가 첨가되지 않은 배양액만 처리한 대조군과 산양삼 추출물을 처리한 실험군 모두에서 동일한 수준으로 나타났으며 이로써 산양삼 추출물의 안전성을 확인할 수 있었다. 또한 산양삼 추출물을 처리한 실험군과 대조군과의 세포증식률을 비교하였을 때 산양삼 추출물 50 ㎍/mL 농도 처리군에서 유의적으로 세포증식이 촉진되었으며 25 ㎍/mL과 100 ㎍/mL 농도 처리군에서도 대조군보다 높은 경향을 나타내었다. 산양삼 추출물이 조골 세포의 활성에 미치는 영향을 알아보기 위해 조골세포의 분화초기 표지인자인 ALP활성을 측정하였으며 그 결과 모든 산양삼 추출물 처리군이 대조군과 비교하여 유의적으로 높은 활성을 나타내었으며 특히 산양삼 추출물 50 ㎍/mL 농도 처리군에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 산양삼 추출물의 농도에 따른 석회화 형성도를 확인하기 위해 무기질화된 세포의 기질을 alizarin red로 염색하였고 산양삼 추출물을 처리한 실험군과 대조군과의 석회화 형성도를 비교하였을 때 산양삼 추출물 50 ㎍/mL 농도 처리군에서 유의적으로 석회화 형성이 촉진되었으며 25 ㎍/mL과 100 ㎍/mL 농도 처리군에서도 대조군보다 높은 경향을 나타내었다. 산양삼 추출물이 MC3T3-E1 조골세포에서 골 형성 관련 유전자 발현에 미치는 영향을 확인하기 위해 Runx2, ALP, OPN, OCN등의 유전자를 정량 real-time PCR을 통해 분석하였으며 대조군과 비교하여 모든 산양삼 추출물 처리군에서 농도 의존적이고 유의적으로 골 형성 관련 유전자발현이 증가되었다. 따라서 산양삼추출물이 골 형성 관련 유전자인 Runx2, ALP, OPN, OCN 발현을 증가시켜MC3T3-E1 조골세포의 분화를 촉진하고, 골 석회화 형성 촉진에 기여하였을 것으로 사료된다. 그러나 산양삼 추출물이 골형성과 관련하여 어떠한 기전으로 유전자의 발현을 조절하였는지에 대한 유전자 및 단백질 수준의 추가적인 연구와 산양삼 추출물의 분화 촉진과 석회화 형성능이 산양삼의 사포닌계 진세노사이드 성분의 영향인지에 대한 후속 연구가 필요할 것으로 사료된다.
결명자의 에탄올 추출물이 사염화탄소를 투여한 흰쥐의 간 손상에 미치는 영향을 알아보기 위하여 정상군, 사염화탄소 대조군, 결명자 에탄올 추출물 0.25%첨가군 및 0.5% 첨가군으로 나누어 5주간 사육한 후 혈청중 간기능관련 효소의 활성변화, 혈청 및 간장의 지질 및 지질과산화물의 함량, 간조직중의 catalase, superoxide dismutase, glutathione peroxidase의 활성변화를 관찰하였다. 체중증가량 및 식이섭취량은 각군간 유의적 차이가 없었고, 간중량은 정상군에 비해 사염화탄소 처리군에서 증가하였으며, 혈청지질함량및 간조직중의 지질함량에는 각군간 유의차가 없었다. 사염화탄소 대조군의 AST, ALT활성은 정상군에 비하여 2배이상 유의하게 증가하였으나 결명자 에탄올 추출물 처리군은 대조군에 비하여 유의하게 감소하였으며 추출물의 첨가농도가 증가할수록 더 많이 감소하였다. ALP, ${\gamma}-GTP$의 활성도 같은 경향을 나타내었으며, TBARS함량도 대조군에 비하여 결명자 에탄올 추출물투여군이 유의하게 낮아졌다. 간조직중의 catalase활성은 사염화탄소투여에 의해 유의하게 활성이 감소되었다가 추출물투여군에서 증가하는 경향을 나타내었으며 SOD활성에는 유의차가 없었다. GHS-Px활성은 사염화탄소 투여에 의해 높아진 대조군의 효소활성이 추출물투여군에서 유의하게 낮아짐을 볼 수 있었으며 추출물의 농도가 높을수록 더 많이 감소하였다. 이상의 실험결과 사염화탄소의 투여로 인해 높아진 혈청중의 간기능 관련 각종 효소 및 지질좌산화물의 함량이 결명자 에탄올 추출물을 투여함으로써 감소되었으며 추출물의 첨가농도가 증가함에 따라 그 효과가 뚜렷한 것으로 보아 결명자 에탄올 추출물이 흰쥐에 있어서 사염화탄소 처리로 인한 간 손상을 감소시키는 효과가 있는 것으로 판단되었다.
Purpose: The purpose of this study is to find out the effects of bisphosphonates (BPs) on the proliferation and the alkaline phosphatase (ALP) activity of human bone marrow derived mesenchymal stem cells (hMSCs), and thus state its correlation with bisphosphonate related osteonecrosis of the jaw (BRONJ). Methods: hMSCs was obtained by collecting and culturing cancellous bone fragments from a patient undergoing iliac bone graft. Alendronate (Aln) and Pamidronate (Pam), Ibandronate (Ibn) were added to the culture media in the concentration from $10^{-3}$ M to $10^{-11}$ M and cell toxicity, viability were measured. For ALP activity evaluation, Aln and Pam were added to the culture media in the concentration from $5{\times}10^{-7}$ M to $1{\times}10^{-8}$ M and were cultured for 1 week, 2 weeks and 3 weeks. ALP activity data were standardized using protein assay. Control groups were prepared for each examination. Results: Aln, Pam and Ibn all failed to increase the proliferation of hMSCs. With 1 week, 2 weeks of $5{\times}10^{-8}$M of Aln treatment, the ALP activity increased. Pam treatment increased the ALP activity with 2 weeks of $5{\times}10^{-8}$ M and$1{\times}10^{-8}$M. Also Ibn treatment increased the ALP activity with 2 weeks of $5{\times}10^{-8}$ M and $1{\times}10^{-8}$ M. Conclusion: It is considered that BPs are not capable of improving the proliferation of hMSCs. Also, after a transient increase in the ALP activity with the lower concentration of BPs, the activity decreased again. Therefore, in patients on long-term medication of BPs, the proliferation and osteoblast differentiation of hMSCs are restrained, and thus delayed wound healing and increase in BRONJ complications may occur.
정자기장이 MC3T3-E1 세포의 골생성능력에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여 MC3T3-E1 세포를 4well 세포배양접시에 $SmCo_5$ 영구자석을 이용하여 76.4mT의 정자기장을 가한 상태에서 5일, 7일, 11일, 15일 및 21일간 배양한 후 세포의 ALP 활성도를 측정하고 Alizarin red S 염색을 통하여 골결절양상을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. $\cdot$정자기장을 가한 군중 7일군, 11일군 및 15일군에서 MC3T3-E1세포의 ALP활성도가 대조군에 비해 낮게 나타났으며 (p<0.01) 그중 11일군에서 가장 억제효과가 많았다. $\cdot$Alizarin red S 염색을 통한 골결절 양상은 11일군까지는 실험군과 대조군 모두에서 염색양상이 나타나지 않았고 15일군에서 대조군은 소량의 골결절이 염색되었으며 실험군은 골결절 염색이 되지 않았으며 21일군에서는실험군과 대조군 모두에서 골결절이 염색되었으나 대조군에서 약간 더 염색된 양상을 나타내었다.
S-2 (3-aminopropylamino)ethylphosphorothioic acid (WR-2721)이 방사선에 대한 방어 효과에 미치는 영향을 규명 하고자 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐를 대조군, WR-2721 단독투여 군 (200mg/kg), X-선 단독조사군, WR-2721투여 (200mg/kg)후 X-선 조사한 병용군으로 나누어 X-선 8 Gy선량을 전신 조사한 후 1, 3, 7, 10일 간에 각각 혈액을 채취하여 효소활성 치와 glucose함량 변화를 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. X-선 단독조사군에서는 ALP와 AST의 활성치가 대조군에 비하여 감소하였으나 WR-2721을 병용한 군에서는 그 감소폭이 줄어들었고, ALT와 LDH의 활성치는 X-선 단독조사군에서 대조군에 비하여 증가하였고, WR-2721을 병용한 군에서는 그 증가폭이 감소되었다. 또한 glucose치의 변동은 X-선 단독 조사군에서 대조군에 비하여 유의성 있게 증가하였으나 WR-2721을 병용한 군에서는 그 증가폭이 감소되었다. 이로 미루어 보아 WR-2721이 X-선으로부터 생체내 주요 장기들을 보호하는 작용이 있음을 시사하고 있다.
옥수수 글루텐 가수분해물(corn gluten hydrolysates, CGH)의 알코올 대사 및 간 기능 보호효과에 대한 효과를 알아보았다. 즉, 흰쥐에게 4주간 시료를 함유한 알코올을 경구투여함에 의해 간 손상을 유도시키고, 혈액 중 생화학적 간 기능 지표(ALP, GOT, GPT), 간세포 내 항산화 효소(SOD, GPX, catalase)와 지질과산화물(MDA) 및 알코올 대사와 관련된 효소(ADH, ALDH, MEOS)의 활성을 조사하였다. 또한 알코올 섭취에 따른 경시적인 ethanol과 acetaldehyde 농도에 대한 시료의 효과를 분석하였다. 알코올성 간 손상을 입은 흰쥐의 체중변화 및 간 중량에 대한 에탄올 투여 및 CGH의 효과는 보이지 않았으며, 식이섭취량은 정상군에 비해 CGH 섭취군에서 유의적으로 감소하였다. 알코올 섭취로 증가된 혈중 ALP 활성은 CGH 처치로 30% 감소한 반면, GOT 및 GPT 활성은 유의적인 변화를 보이지 않았다. 알코올성간 손상에 따른 체내 항산화 반응계 중 catalase 효소활성은 알코올 투여군에 비해 CGH 처리군에서 79%까지 유의적으로 감소하였다. ADH 활성은 유의적인 차이를 보이지 않았으나, ALDH 활성은 알코올 투여 대조군에 비해 CGH군에서 20% 정도 유의적으로 증가하였다. 특히, CGH는 MEOS활성에 대해 농도 의존적으로 작용하여 3% CGH을 급여한 그룹에서는 알코올 투여 대조군에 비해 20%까지 활성이 감소하는 결과를 보였다. 알코올 단회 투여에 따른 경시적인 혈액 중 ethanol 농도는 유의적인 차이가 없었다. 그러나 acetaldehyde 농도는 CGH 투여에 의해 급격히 감소하였고, 시간에 따른 곡선 하 면적으로 환산한 결과, 약 60% 정도 감소한 효과를 보였다. 이상과 같이, CGH는 알코올대사과정 중 ALDH 및 MEOS 활성에 작용하여 체내 알코올성 간 손상에 대한 간 기능 보호효과와 함께 ethanol 대사산물인 acetaldehyde의 체내 배출을 촉진시키는 기능성 소재로 활용이 가능함을 알 수 있었다.
Carbon tetrachloride ($CCl_4$) has been used to treat a variety of parasitic infection in both large and small animals, including Fasciola hepatica. Recently, we can easily contest with carbon tetrachloride in air, food, water, rain and Industry area etc. and it is using in order to induce liver injury in laboratory. In this study. we investigated activitis of LDH, ALP, AST and ALT and amount of cholesterol, triacylglycerol, glucose and BUN in mice serum exposed to $CCl_4.$ The mice divided Into a Naive control(A), corn oil control(B) and experimental group(C, D). Naive control group(A) was given feed and water only. Corn oil control group(B) was given corn oil 1ml /100g of body weight(B.W). Experimental group(C) was given carbon tetrachloride 1ml /100g B.W. ($CCl_4$: corn oil=1:20(V /V) ), Experimental group(D) was given carbon teterachloride 1ml /100g B.W. ($CCl_4$: corn oil=1:10(V /V) ). The results obtained were summarized as follows : 1) The body weight was declined after the l0th day In mice exposed to carbon tetra-chloride. 2) The total protein level in serum was significantly in mice exposed to carbon tetra-chloride($P{\leq}0.05$). The albumin and A /G ratio was decresed significantly in mice exposed to carbon tetrachloride($P{\leq}0.01$) 3) All of the activity of LDH, AST, ALT and ALP in mice serum exposed to carbon tetra chloride inclosed significantly activity of LDH ($P{\leq}0.05$), inclosed significantly activity of AST($P{\leq}0.05, \;p {\leq}0.01$), inclosed significantly activityof ALT 3nd ALP($P {\leq}0.05,\;p {\leq}0.01$). 4) The amount of cholesterol and triacylglycerol, lipid metabolite products in serum was inclosed in case of cholesterol but did not change in case of triacylglycerol.
현재 우리나라는 고령화 사회에 접어들었으며, 이와 함께 골 대사 질환이 큰 문제로 대두되고 있다. 그 중 가장 흔하게 발생하는 골다공증은 여러 요인에 의해 발생하고 있으며 이의 예방 및 치료를 위한 소재 개발 연구가 활발하게 진행되고 있다. 그러나 곤충을 소재로 한 골다공증 예방 및 치료 연구는 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 골 형성 촉진 효능을 가진 새로운 소재 개발을 위해 갈색거저리 유충 오일의 MG-63 조골세포의 분화 촉진 효과를 연구하였다. 조골세포에서 갈색거저리 유충 오일의 독성 및 증식 효과를 평가하기 위하여 MTS assay를 진행한 결과 $80{\mu}g/ml$ 농도까지 세포 독성이 나타나지 않았으며, 48시간 배양했을 때 $40-80{\mu}g/ml$ 농도에서 120% 정도의 세포 증식 효능을 확인 하였다. 갈색거저리 유충 오일이 조골세포 분화에 미치는 영향을 확인하기 위하여 5일간 갈색거저리 유충 오일을 MG-63 조골세포에 처리한 후 ALP 활성을 측정하였다. 그 결과 $80{\mu}g/ml$ 농도에서 무처리 군에 비해 약 180%의 조골세포 분화 촉진 효능을 관찰 하였다. 이 결과는 ALP staining에서도 유사하게 나타났다. mRNA 발현량의 변화를 측정한 결과, Alpl과 Runx2 유전자 발현량이 증가하였고, 단백질 발현량을 측정했을 때에도 유사한 결과를 확인하였다. 이를 통해 ALP와 Runx2 유전자 및 단백질 발현에 의해서 ALP 활성이 증가하고 조골세포 분화가 촉진되었을 것으로 판단되며, 갈색거저리 유충 오일을 이용한 골 형성 촉진에 따른 골다공증 예방 및 치료 기능성 소재 개발에 대한 가능성을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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