Kim, Minjae;Kim, Jongrae;Kim, Sanghee;Jin, EonSeon
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제30권11호
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pp.1777-1784
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2020
To increase the availability of microalgae as producers of valuable compounds, it is necessary to develop novel systems for gene expression regulation. Among the diverse expression systems available in microalgae, none are designed to induce expression by low temperature. In this study, we explored a cold-inducible system using the antifreeze protein (AFP) promoter from a polar diatom, Chaetoceros neogracile. A vector containing the CnAFP promoter (pCnAFP) was generated to regulate nuclear gene expression, and reporter genes (Gaussia luciferase (GLuc) and mVenus fluorescent protein (mVenus)) were successfully expressed in the model microalga, Chlamydomonas reinhardtii. In particular, under the control of pCnAFP, the expression of these genes was increased at low temperature, unlike pAR1, a promoter that is widely used for gene expression in C. reinhardtii. Promoter truncation assays showed that cold inducibility was still present even when pCnAFP was shortened to 600 bp, indicating the presence of a low-temperature response element between -600 and -477 bp. Our results show the availability of new heterologous gene expression systems with cold-inducible promoters and the possibility to find novel low-temperature response factors in microalgae. Through further improvement, this cold-inducible promoter could be used to develop more efficient expression tools.
Heart fatty acid-binding protein gene (H-FABP) is an important candidate gene for meat quality. One of the objectives of this study was to screen single nucleotide polymorphisms (SNP) of chicken H-FABP gene among 252 individuals that included 4 Chinese domestic chicken breeds (Fengkai Xinghua (T04), Huiyang Huxu (H), Qingyuan Ma (Q), Guangxi Xiayan (S1)), 2 breeds developed by the Institute of Animal Science, Guangdong Academy of Agricultural Sciences (Lingnan Huang (DC), dwarf chicken (E4)) and one introduced broiler (Abor Acre (AA)). Another objective of this study was to analyze the associations between polymorphisms of the H-FABP gene and fat deposition traits in chickens. PCR-SSCP was used to analyze SNPs in H-FABP and 4 SNPs (T260C, G675A, C783T and G2778A) were detected. Associations between polymorphic loci and intramuscular fat (IMF), abdominal fat weight (AFW) and abdominal fat percentage (AFP) were analyzed by ANCOVA method. The results showed that the T260C genotypes were significantly associated with IMF (p = 0.0233) and AFP (p = 0.0001); the G675A genotypes were significantly associated with AFW, AFP (p<0.01) and IMF (p<0.05); at the C783T locus, AFW and AFP differed highly between genotypes. However, the G2778A loci did not show any significant effect on fat deposition traits in this study. In addition, we found that there were some differences between AFP and definite haplotypes through a nonparametric statistical method, so the haplotypes based on the SNPs except G2778A loci were also significantly associated with IMF, AFW (g) (p<0.05) and AFP (%) (p<0.001). Significantly and suggestively dominant effects of H4H4 haplotype were observed for IMF and the H2H3 was dominant for AFW (g) and AFP (%). The results also revealed that H5H7 haplotype had a negative effect on IMF, while the H5H6 had a positive effect on AFW (g) and AFP (%).
Objective: To assess the diagnostic and prognostic value of AFP and des-gamma-carboxyprothrombin (DCP) in combination and alone for hepatocellular carcinoma. Materials and Methods: A case control study carried out in the Department of Biochemistry of Manipal College of Medical Sciences, Pokhara, Nepal between $1^{st}$ January 2010 and $31^{st}$ December 2011. The variables collected were age, gender, BMI, total proteins, albumin, AST, ALT, total bilirubin, DCP, AFP. Approval for the study was obtained from the institutional research ethical committee. Estimation of AFP was performed by ELISA reader for all cases. Analysis was done using descriptive statistics and confidence interval (CI). The data was analyzed using Excel 2003, R 2.8.0 Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) for Windows Version 16.0 (SPSS Inc; Chicago, IL, USA) and the EPI Info 3.5.1 Windows Version. Results:The mean age of HCC cases was $53.6{\pm}14.93$ yrs. The percentage of females was less than males in both cases (23%) and controls (29%). The specificity of DCP reached 100% when its values was equal or greater than 150 (MAU/ml) for 0, 3, 6, 9, 12 months preceding the diagnosis of HCC. Similarly, the specificity for AFP was also nearly 100% when its value was equal or greater than 200 ng/ml 0, 3, 6, 9, 12 months earlier to the finding of HCC. The specificity of DCP (${\geq}40MAU/mL$) and AFP(${\geq}20$ ng/mL) in combination was 93%, 97%, 95%, 96%, 97% in respect to 0, 3, 6, 9, 12 months prior to the diagnosis of HCC. Conclusion: The combination of both DCP and AFP will improve the finding of initial HCC and the sensitivity of these markers was utmost at the time of HCC identification and noticeably lesser at former time points.
비표지 방식의 압전 마이크로캔틸레버 질량센서를 이용하여 간세포암의 혈청표지물질인 알파태아단백(alpha fetoprotein, AFP)을 정상 농도인 10 ng/ml까지 정량적으로 검출하였다. 압전 마이크로캔틸레버 질량센서는 캔틸레버의 질량변화에 의하여 센서의 공진주파수가 변화되는 원리를 이용하여 센서에 붙은 물질의 질량을 측정하며, 센서의 공진주파수는 컨덕턴스 스펙트럼을 이용하여 전기적으로 측정한다. 제작된 센서는 공진 주파수가 약 1.34 MHz, 질량 민감도가 약 175 Hz/pg이며 단백질이 붙을 때 캔틸레버의 표면 스트레스 변화에 대한 센서의 공진 주파수 변화를 줄일 수 있도록 설계되어 질량센서로써 신뢰도를 높였다. 'Dip and dry' 방법으로 캔틸레버의 프로브 영역을 시약과 반응시켜서 AFP 항체를 고정화하고 AFP 항원을 검출하는 실험을 수행하였다. 10 ng/ml과 50 ng/ml농도의 항원에서 10분간 항원-항체 면역반응을 시켰을 때 센서에 검출된 항원의 질량이 각각 6.02 pg과 10.67 pg이다.
Objective: To explore the application of joint detection of serum AFP, CA19-9, CA125 and CEA in identification and diagnosis of cholangiocarcinoma (CC). Materials and Methods: The levels of serum AFP, CA19-9, CA125 and CEA of both 30 patients with CC and 30 patients with hepatocellular carcinoma (HCC) were assessed. Receiver operating characteristic (ROC) curves were used to evaluate the diagnostic effects of single and joint detection of those 4 kinds of tumor markers for CC. Results: The levels of serum CA19-9, CA125 and CEA in CC patients were higher than that in HCC patients,whereas that of serum AFP was significantly lower s. The area under ROC curve of single detection of serum AFP, CA19-9, CA125 and CEA were 0.05, 0.86, 0.84 and 0.83, with the optimal cutoff values of 15.4 ng/ml, 125.1 U/ml, 95.7 U/ml and 25.9 ng/ml, correspondingly, and the percentage correct single diagnosis was <79%. With joint detection, the diagnostic effect of combined AFP, CA19-9, CA125 and CEA was the highest, with an area under the ROC curve of 0.94 (95%CI 0.88~0.99). Conclusions: Single detection of serum CA19-9, CA125 and EA is not meaningful. The sensitivity, specificity, the rate of correct diagnosis and the area under ROC curve of joint detection of AFP, CA19-9, CA125 and CEA are highest, indicating that the joint detection of these 4 tumor markers is of great importance in the diagnosis of CC.
Rehmannia glutinosa is one of the most important medicinal crops in Korea. However, various plant pathogens, including Fusatium spp., cause great damage on R. glutinosa and result in enormous economic losses. This study was conducted to breed Fusarium-resistant plants by using Agrobacterium tumefaciences and AFP (anti-fungal protein) gene. The plant material used was a native accession of R. glutinosa. The PCR analysis was conducted to verify transgenicity. Based on the PCR analysis, nptII band was observed in transgenic plant genome. Southern blot and AFP protein analyses also showed the expression of this gene in transgenic plants. Expression of AFP in transgenic plants offers the possibility of developing resistance to fungal infection.
Purpose Alpha fetoprotein(AFP) is a fetal serum protein that increases in germ cell tumors derived from liver cancer or egg yolk. AFP test has been used for screening of liver cancer, determination of tumor stage, determination of therapeutic effect, and fetal congenital malformations. The purpose of this study was to compare the results of the four kits, identify the advantages and disadvantages of each kit, and select the appropriate kits for our laboratory. Materials and Methods Blood samples were obtained from 89 patients attending the Seoul national university hospital. Experiments were carried out in accordance with manufacturer's instructions of four companies(A, B, C, D). The precision, recovery, linearity, and sensitivity test were performed for each kit. Results In case of the precision within the measurement, the CV value of the C kit was less than 5% at the low, middle, and high concentrations. The A, B and D kit's the CV value was less than 5% at the concentrations except the low concentration. The recovery rates of the A, B, C, and D kits were $100{\pm}15%$, $100{\pm}30%$, $100{\pm}16%$ and $100{\pm}14%$, respectively. All kits showed good linearity. Sensitivity was measured as 0.5 IU/mL for A, 0.4 IU/mL for B, 0.98 IU/mL for C, and 0.3 IU/mL for D. Conclusion The CV values of the four kits were within 10%, and the correlation coefficients were close to 1 for $R^2=0.978$, $R^2=0.992$ and $R^2=0.8957$. As a result, they are clinically available. Therefore, each laboratory should select the appropriate kit for their experiment's environment.
목적 : 건진센터 종양 검사가 정상범위 내에서 재검기준이 명확히 설정되어 있지 않아 검사자마다 각자의 재검기준에 따라 재검을 시행함에 따라 재검상의 편차가 크고 일괄적이지 못했다. 이를 개선하기 위해 정상치이하값에서의 재검기준을 마련하고 정상치이하인 값에서 trend 결과를 관리할 수 있는 본원 OCS QC (order communication system quality control)프로그램을 이용하여 건진 센터 종양 검사의 결과보고오류에 개선을 하고자 한다. 대상 및 방법 : 2009년 2월부터 3월까지 본원 건진 센터에서 종양 검사(AFP, CEA, CA19-9, CA125, PSA)를 실시한 환자들을 대상으로 하였다. 우선 각 검사의 정상범위에서 Inter assay CV%를 구하여 screening 기준 값을 설정하였다. OCS QC program에 진료과, 대상 검사종목, screening 기준 값을 입력하여 기준 값에 벗어난 결과는 색깔에 반전을 주었다. 1차로 5가지종양 검사를 전 결과대비 ${\pm}$ 30% 기준을 벗어난 screening 건수를 구하였고 2차로 각각의 종양 검사에 대해 전 결과 대비 AFP는 ${\pm}$ 60%, CEA와 CA19-9는 ${\pm}$50%, CA125와 PSA는 ${\pm}$40%로 기준 값을 상향조정하여 screening 건수를 구하였으며 정상치 이하에서의 재검기준도 설정하여 비교하였다. 결과 : 1차 screening 건수 백분율은 30~40%의 결과를 얻었고, 2차 screening 건수 백분율은 AFP 26.1%, CEA 18.9%, CA19-9 17.3%, CA-125 18.7%, PSA 21.0%로 평균 20%의 screening 백분율을 얻었다. 정상치 이하에서의 재검기준은 AFP 5.0이하$\leftrightarrow$10.0이상, CEA 1.0이하$\leftrightarrow$3.0이상, 2.0이하$\leftrightarrow$4.0이상, CA19-9와 CA-125 10.0이하$\leftrightarrow$30.0이상, PSA 1.0이하$\leftrightarrow$2.0이상으로 정하였으며 평균 20.4%의 screening 백분율에 재검기준을 적용시켜 실제 재검사 건수를 얻었다. 2달 동안 재검사 건수는 AFP 0건, CEA 15건, CA19-9 3건, CA-125 2건, PSA 5건이었다. 결론 : OCS QC 프로그램을 이용하여 시스템적인 재검기준을 마련함으로 검사자간 재검 실시 편차의 감소가 있었고 정상치 이하 값에서 결과보고오류에 대해 개선이 있을 것으로 사료된다.
Our purpose of this paper is to introduce and study some properties related to approximations by points. More precisely, we introduce strongly AP, strongly AFP, strongly ACP, and strongly WAP properties which are stronger than AP, AFP, ACP, and WAP respectively. Also they are weaker than strongly Fr$\acute{e}$chet property. And we study general properties and topological operations on such spaces and give some examples.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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