• 미생물학회지
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• 제35권3호
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• pp.218-225
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• 1999

Aspergillus nidulans 의 DNA 로부터 Saccharomyces cerevisiae에서 스스로 복제가능하고, 형질전환율도 삽입벡터에 비해 10\sup 4\ 배정도 높여주는 절편을 분리한 바 있다. A. nidulans에서 ANRI 의 일부를 포함한 pILJ16-4.5는 삽입벡터인 pILJ16보다 170배 정도 높은 형질전환 효율을 보였으며, S.cerevisiae와 마찬가지로 plasmid 상태로 회수가능했다. A.nidulans 페소내에서 2-3 copy 정도로 염색체와는 별개로 존재하는 것으로 나타났으며, 재형질전환능력도 있었다. ANRI은 미토콘드리아의 DNA에서 유래한 절편으로 밝고, ARS 공통절편과 유사한 절편도 11곳에 존재한다. $\Phi$X174와 SV40 DNA에서 gyrase 가 결합하는 부위의 공통편인 YRTGNYNNY도 6곳에 존재하며, ColE1에서 gyrase가 결합하는 b site와 일치하는 절편도 하나 포함하고 있으며, ABF1 결합 부위이 공통절편과 유사한 절푠$TCN_7ACG$ 도 하나 포함하고 있다. 이를 토대로 ANRI은 A.nidulans의 형질전환 후 회수가 가능한 replicating vector 개발에 이용할 수 있다.

• 한국균학회지
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• 제40권4호
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• pp.224-228
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• 2012

A. nidulans ${\alpha}$-COP과 상호작용하는 단백질을 동정하기 위하여 ${\alpha}$-COP을 암호하는 유전자를 bait로 yeast two-hybrid 스크리닝용 A. nidulans cDNA 라이브러리를 탐색한 결과, COPI 소낭의 구성요소 중 하나인 ${\varepsilon}$-COP을 암호화하고 있는 유전자를 동정하고 $aneA^+$($\underline{A}$spergillus $\underline{n}$idulans $\underline{e}$psilon-COP, $AN{\varepsilon}$-COP)으로 명명하였다. $aneA^+$ 유전자는 총 296개의 아미노산을 암호화하고 있으며, 다른 균류의 ${\varepsilon}$-COP과 높은 상동성을 보였다. Yeast two hybrid 시스템으로 두 단백질 간의 상호작용 부위를 분석한 결과, ${\alpha}$-COP의 COOH 도메인과 ${\varepsilon}$-COP의 C-말단부가 필수 부위였으며, ${\alpha}$-COP N-말단의 WD 도메인과 ${\varepsilon}$-COP의 TPR 부위는 두 단백질 간의 결합을 촉진하는 조절부위로 밝혀졌다. 또한 사상균인 A. nidulans와 효모류인 S. cerevisiae에서 ${\alpha}$-COP과 ${\varepsilon}$-COP 간 작용양상이 유사한 것으로 보아, COPI 소낭의 구성요소인 ${\alpha}$-COP과 ${\varepsilon}$-COP 간의 상호작용 기전은 진핵세포 내에서 진화적으로 잘 보존되어 있는 것으로 추정되었다.

• Journal of Microbiology
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• 제39권2호
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• pp.95-101
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• 2001

In an effort to develop an efficient expression and secretion system for heterologous proteins in Aspergilius nidulans, the PCR-amplified coding sequence for alkaline pretense (AlpA) of A. oryzae was cloned into a fungal expression vector downstream of A. nidulans aicA (alcohol dehydrogenase) promoter to yield pRAAlp. Transformation of A. nidulans with pRAAlp gave stable transformants harboring various copy numbers (3 to 10) of integrated alpA gene, from among which 6 representatives were selected. On a medium containing 0.8% ammonium sulfate that represses the expression of the host's own pretense, the alcA prumoter-controlled AlpA expression was strongly induced by threonine but repressed by glucose. The level of AlpA secretion was highest (approximately 666 mU/ml) in transformant ALP6 containing the largest copy number integrated alpA. However, the level of AlpA secretion was not necessarily proportional to the copy numbers of the integrated alpA genes. The N-terminal sequence or the secreted mature AlpA was determined to be Gly-Leu-Thr-Thr-Gln-Lys-Ser and its molecular mass to be approximately 34 kDa, indicating that AlpA is properly processed by the removal of 121 N-terminal amino acids.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제36권3호
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• pp.189-194
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• 2008

Phospholipase B(PLB) families는 phospholipase(PL), lysophospholipase(LPL) 그리고 lysophospholipase-transacylase(LHA)의 활성을 공유하고 있는 효소이다. 본 연구에서는, 사상성 진균인 Aspergillus nidulans에서 최초로 lipase motifs를 보유하고 있는 단백질 Phospholipase B를 인코딩하는 유전자(plb A)를 클로닝하였다. plb A는 다양한 PLB 효소들의 lipase 보존영역들의 염기서열 정보에 근거하여 제작한 probe를 이용하여 A. nidulans genomic DNA library로 부터 분리하였다. Phospholipase B 유전자의 염기서열을 결정한 결과 626아미노산으로 구성된 단백질을 코드하고 있었다. PlbA는 Penicillium notatum의 PLB와는 72%의 높은 상동성을 나타내었으나, 다른 생물유래의 PLA와는 낮은 상동성을 나타내었다.

• 한국환경과학회지
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• 제17권11호
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• pp.1221-1226
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• 2008

A variety of fungal species are known to degrade cyanide through the action of cyanide hydratase, a specialized nitrilases which hydrolyze cyanide to formamide. This work is a report on two unknown and un-characterized members from Neurospora crassa and Aspergillus nidulans. Recombinant forms of three cyanide hydratases (CHT) originated from N. crassa, Gibberella zeae, and A. nidulans were prepared after their genes were cloned with N-terminal hexahistidine purification tags, expressed in E. coli and purified using immobilized metal affinity chromatography. These enzymes were compared according to their pH activity profiles, and kinetic parameters. Although all three were similar, the N. crassa CHT has the widest pH range of activity above 50% and highest turnover rate ($6.6{\times}10^8min^{-1}$) among them. The CHT of A. nidulans has the highest Km value of the three nitrilases evaluated in here. Expression of CHT in both N. crassa and A. nidulans were induced by the presence of KCN, regardless of any presence of nitrogen sources. These data can be used to determine optimal procedures for the enzyme uses in the remediation of cyanide-containing wastes.

• 자연과학논문집
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• 제11권1호
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• pp.45-54
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• 1999

4-NQO에 대한 감수성을 이용한 A.nidulans uvs 유전자들의 epistatic grouping은 자외선 및 MMS의 감수성을 이용한 grouping과 동일한 결과를 보였다. 한편, MMS에 대한 감수성을 기준으로 분류한 epistasis group에서 uvsA는 UvsF group 유전자인 uvsF 및 uvsH와 synergistic interaction을 보였으며, uvsA;uvsB 및 uvsA;uvsC 이배체는 uvsB, uvsC의 반수체와 동일한 감수성을 나타내었다. Germination한 뒤 4시간 후의 자외선 감수성을 기준으로 한 uvsI의 epistatic grouping은 conidia 상태에서 자외선을 쬐어 조사한 grouping과 유사하여, uvsH, uvsC, uvsB와 synergistic interaction을 보였다. 하지만, quiescent conidia 상태에서의 additive effect를 보인 uvsI와 uvsF 돌연변이체는 4h germination 후에는 epistatic interaction을 나타내었다. uvsI 돌연변이체의 Intergenic-intragenic recombination frequency는 야생주와 유사하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제31권5호
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• pp.676-685
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• 2021

RNA-binding proteins are involved in RNA metabolism and posttranscriptional regulation of various fundamental biological processes. The PUF family of RNA-binding proteins is highly conserved in eukaryotes, and its members regulate gene expression, mitochondrial biogenesis, and RNA processing. However, their biological functions in Aspergillus species remain mostly unknown in filamentous fungi. Here we have characterized the puf genes in the model organism Aspergillus nidulans. We generated deletion mutant strains for the five putative puf genes present in the A. nidulans genome and investigated their developmental phenotypes. Deletion of pufA or pufE affected fungal growth and asexual development. pufA mutants exhibited decreased production of asexual spores and reduced mRNA expression of genes regulating asexual development. The pufE deletion reduced colony growth, increased formation of asexual spores, and delayed production of sexual fruiting bodies. In addition, the absence of pufE reduced both sterigmatocystin production and the mRNA levels of genes in the sterigmatocystin cluster. Finally, pufE deletion mutants showed reduced trehalose production and lower resistance to thermal stress. Overall, these results demonstrate that PufA and PufE play roles in the development and sterigmatocystin metabolism in A. nidulans.

• Journal of Microbiology
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• 제34권1호
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• pp.25-29
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• 1996

Since sequencing of randomly selected cDNA clones has been known to be a powerful approach to obtain information on gene expression pattern in specific cells or tissues, we have analyzed a 3'-directed cDNA library of vegetative mycelia of A. nidulans by single-pass sequencing of hundreds of randomly selected clones. Sequencing of 292 cDNA clones yielded 209 gene signatures (GSs) probably representing highly or lesser expressed genes in the vegetative mycelia. Among the 209 GSs, 25 (79 cDNA clones) appeared more than once and 184 only once. One GS appeared at a highest frequency of 6 times, 2 GSs5 times, 4 GSs 4 times, a GSs 3 times and 16 GSs twice. About 6.6% GSs comprizing of 13 GSs showed alternative polyadenylation. Among 23 redundant GSs, three were common in both mycelia and sexual organs, and 22 were probably mycelia-specific. Out of 209 GSs, 36 were identified in GenBank showing of 70% or greater similaritis. Only six GSs were for A. nidulans genes, and 13 GSs were of DNA or genes encoding cytoplasmic or organellar proteins. This pattern is similar to those in the human HepG2 cell line and in human colonic mucosa, although very few genes for nuclear proteins and for protein synthesis were in A. nidulans.

• Mycobiology
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• 제43권1호
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• pp.31-36
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• 2015

We have previously isolated ${\varepsilon}$-COP, the ${\alpha}$-COP interactor in COPI of Aspergillus nidulans, by yeast two-hybrid screening. To understand the function of ${\varepsilon}$-COP, the $aneA^+$ gene for ${\varepsilon}$-COP/AneA was deleted by homologous recombination using a gene-specific disruption cassette. Deletion of the ${\varepsilon}$-COP gene showed no detectable changes in vegetative growth or asexual development, but resulted in decrease in the production of the fruiting body, cleistothecium, under conditions favorable for sexual development. Unlike in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae, in A. nidulans, over-expression of ${\varepsilon}$-COP did not rescue the thermo-sensitive growth defect of the ${\alpha}$-COP mutant at $42^{\circ}C$. Together, these data show that ${\varepsilon}$-COP is not essential for viability, but it plays a role in fruiting body formation in A. nidulans.

• 미생물학회지
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• 제38권2호
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• pp.103-106
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• 2002

사상균류의 세포자체로부터 직접 PCR을 하는 방법은 세포벽 파괴의 어려움 때문에 모든 곰팡이에 적용될 수 없다. 극초단파 조사는 사상균류의 DNA를 추출함에 있어서 그 유용함이 이미 검중된 바 있는데, 본 논문에서는 극초단파 조사를 이용하여 Aspergillus nidulans의 포자로부터 손쉽게 주형 DNA를 얻어 PCR증폭하는 방법을 소개하고자 한다. 본 실험에서는 극초단파 조사시간과 PCR에 필요한 주형 DNA의 양 등을 최적화하였으며, 이렇게 수행된 PCR결과는 single copy유전자를 대상으로도 약 3 kb크기의 산물가지 증폭 가능하여, 형질전환체를 선별하기에 충분한 크기의 산물들도 효과적으로 얻어짐을 보여주었다. 따라서 이 방법은A. nidulans의 형질전환체를 보다 손쉽게, 시간을 절약하여 선별할 수 있는 효과적인 방법이라 생각된다.