Kim, Yeon-Hyang;Park, Bok-Ryun;Cheong, Hee-Sun;Kwon, Oh-Hwan;Kim, Dae-Que;Kim, Soung-Soo
BMB Reports
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제32권2호
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pp.140-146
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1999
When murine fibrosarcoma L929 cells, a TNF-sensitive cell line, were treated with recombinant human tumor necrosis factor-$\alpha$ (rhTNF-$\alpha$), the activities of glycolytic regulatory enzymes and lactate dehydrogenase increased up to 100-150% compared to the control L929 cells after TNF treatment. By using various metabolic inhibitors and activators, it was found that cAMP-dependent protein kinase is responsible for the increase of activities of the glycolytic enzymes. The activities of glycolytic regulatory enzymes and lactate dehydrogenase of TNF-resistant A549 cells, a human lung carcinoma cell line, did not increase significantly compared to TNF-sensitive L929 cells upon TNF treatment. In contrast, the pyruvate carboxylase activities of A549 cells, but not L929 cells, increased up to 30~40% after TNF treatment. The data suggest that pyruvate carboxylase activity may contribute to the compensation of energy loss mediated by TNF treatment in TNF-resistant A549 cells.
Histone deacetylase (HDAC) 억제제가 새로운 항암치료제 후보물질로서 유용성이 높은 것으로 평가되지만, 아직까지 인체폐암세포에 관한 연구는 상대적으로 미미한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 폐암세포에 미치는 HDAC 억제제의 항암작용 기전을 조사하기 위하여 A549 인체폐암세포주를 대상으로 암세포의 증식에 미치는 대표적인 HDAC 억제제인 tichostatin A (TSA)에 의한 영향을 세포주기 조절관련인자 중심으로 조사하였다. TSA의 처리에 의하여 A549 폐암세포의 증식은 처리 농도 의존적으로 억제되었으며, 심한 형태적 변형을 동반하였다. 저농도 처리군에서는 TSA 농도가 증가할수록 세포주기 G1기의 빈도가 증가하였으나, 고농도 처리군에서는 G2/M기에 속하는 세포의 빈도가 증가되었다. 또한 apoptosis 유발의 간접적인 지표가 되는 sub-G1기에 속하는 세포의 빈도 역시 TSA 처리 농도 의존적으로 매우 증가되었다. 이러한 TSA의 A549 폐암세포 증식억제 효과는 cyclins 및 CdkS의 발현 억제, 종양억제유전자인 p53 및 Cdks 억제제인 p21과 p27의 발현 증가와도 연관성이 있었다. TSA의 항암 기전을 규명하기 위해서는 더 많은 연구가 부가적으로 필요하겠지만, 본 연구의 결과들에 의하면 TSA는 강력한 인체폐암세포의 증식 억제 및 항암작용이 있음을 시사하여 준다고 할 수 있다.
Voacanga globosa (Blanco), a plant endemic to the Philippines, is traditionally used especially by indigenous people of Bataan in the treatment of ulcers, wounds and tumorous growths. This study aimed to provide scientific evidence to therapeutic properties by determining cytotoxic and pro-apoptotic activity of HPLC fractions from leaves on HCT116 human colon carcinoma and A549 human lung carcinoma cell lines. Ethanolic extraction was performed on V globosa leaves followed by hexane and ethyl acetate partitioning. Silica gel column chromatography and high performance liquid chromatography (HPLC) produced MP1, MP2 and MP3 fractions. Cytotoxic activity of the fractions was determined through MTT assay against the cancer cell lines HCT116 and A549 and the non-cancer AA8 Chinese hamster ovarian cell line. Pro-apoptotic activities of the most active fractions were further assessed through DAPI staining, TUNEL assay and JC-1 mitochondrial membrane potential assay with HCT116 cells. While the MPI fraction exerted no significant activity against all cell lines tested, MP2 and MP3 fractions demonstrated high toxicity against HCT116 and A549 cells. The MP3 fraction induced formation of apoptotic bodies, condensed DNA and other morphological changes consistent with apoptosis of HCT116 cells and TUNEL assay showed significant increase in DNA fragmentation over time. In these cells, the MP3 fraction also induced mitochondrial membrane destabilization, which is generally associated with the beginning of apoptosis. Phytochemical analysis demonstrated the presence only of saponins and terpenoids in the MP3 fraction. The results indicate that the MP3 fraction exerts cytotoxic activity on HCT116 cells via induction of apoptosis triggered by loss of mitochondrial membrane potential crucial for cell survival.
본 논문은 야채수프의 인간 암세포 증식 억제효과를 살펴보는 데 목적이 있다. 본 연구는 일반적으로 사용되는 야채수프 (VS)와 브로콜리가 들어간 야채수프 (VSB), 토마토가 들어간 야채스프 (VST)를 이용하여 암세포 증식 억제효과를 살펴보았다. 인간 암세포주는 위암 (AGS)세포주, 급성 전골수성 백혈병 (HL-60)세포주, 폐암 (A549) 세포주를 사용하였으며 MTS방법으로 암세포 증식 억제를 확인하였다. 위암 세포주는 VSB, VST에서 암세포 증식 억제효과가 있었으며 VS에 비해 유의성이 있었다. 급성 전골수성 백혈병 세포주는 VST에서 유의성 있는 억제를 보였으며 폐암 세포주는 VSB에서 VS보다 탁월한 효과를 보였다. 혼합 야채스프는 기능성 소재로 활용과 융복합적인 웰리스를 위한 기초 자료로 활용이 가능하다고 사료된다.
연구배경: 종양괴사인자(Tumor necrosis factor; TNF)는 다양한 생물학적인 작용을 가지며 종양 세포에 대한 세포 독성은 그 대표적인 기능중의 하나이다. TNF-$\alpha$는 생체외에서(in vitro) 몇몇 종양 세포주에 대하여 항암제, 특히 topoisomerase II targeted chemotherapeutic agent의 세포 독성 효과를 상승적으로 증가시키는 것이 알려져 있다. 최근 암세포에 대한 cytokine 유전자 요법에서 TNF는 중요한 대상으로 여겨지고 있으며, 유전자 이입에 의해 암조직이 TNF를 생성하게 될 경우 암 증식 억제 효과가 있음이 보고되고 있다. 연구자는 암세포에 TNF-$\alpha$ 유전자를 이입하여 자신이 TNF-$\alpha$를 생성하도록 형질을 변환시킨 암세포는 topoisomerase II 억제 항암제에 대한 김수성에 변화가 있을 것이라는 가설을 수립하였고 이를 검증하고자 본 연구를 수행하였다. 본 연구에서는 생체외로(in vitro) TNF-$\alpha$ 유전자를 이입하여 TNF-$\alpha$를 생성하는 암세포주에서 topoisomerase II targeted drug에 대한 항암제 감수성 효과가 모세포주에 비하여 증대될 수 있는지를 알아 보고자하였다. 방법: TNF-$\alpha$에 감수성을 보이는 것으로 알려진 인체 중피종 세포주인 NCI-H2058 세포주 및 생쥐의 섬유육종 세포주인 WEHI164 세포주와 인체 비소세포 폐암 세포주인 A549 세포주를 배양하여, 먼저 임상에서 흔히 폐암의 항암 화학 요법 치료에 널리 쓰이는 대표적인 topoisomerase II targeted chemotherapeutic drug인 etoposide(VP-16)와 doxorubicin(adriamycin)을 가하였을 때 관찰된 세포 독성을 MTT assay로 측정하고, 각 모세포주(parenta1 cell line)에 TNF-$\alpha$의 유전자를 이입시켜서 형절 변환한 세포주(transformed cell line)에 대하여 각각 동일한 항암제를 가하였을 때 관찰된 세포 독성의 정도를 같은 방법으로 측정하여, 그 결과를 비교 분석하였다. 또한 모세포주에 외부에서 TNF를 가하여 전처치한 후 동일한 항암제를 가하였을 때의 세포독성을 관찰하여 비교 분석하였다. 결과: H2058 세포주에서는 TNF-$\alpha$ 유전자를 이입한 세포주 topoisomerase II targeted drug을 가하였을 때, 항암제 감수성이 모세포주에 같은 항암제를 가하였을 때에 비하여 의미있게 증가함을 관찰할 수 있었으나(p<0.05), WEHI 세포주와 A549 세포주에 있어서는 TNF-$\alpha$ 유전자를 이입한 세포주에서 모세포주에 비하여 항암제 감수성이 증가하지는 않았다. 결론: TNF-$\alpha$ 유전자의 이입이 topoisomerase II targeted chemotherapeutic drug에 대한 항암제 감수성을 증가시키는 효과는 세포주에 따라 다양한 결과를 보이는 것을 알 수 있었으며, 적어도 선택된 특정 종류의 호흡기계 암세포에 있어서는 TNF-$\alpha$ 유전자의 이입으로 항암제 감수성(chemosensitivity)을 증가시킬 수 있을 것으로 사료된다.
다량의 시료를 빠르게, 적은 격비로, 간다히 검색할수 있는 예비선별법을 찾던중, ccDNA와 sulforhodamine B를 각각 사용한 미생물배양액내의 신규항암후보물질의 탐색을 시도하였다. cccDNA법으로는 3.3%가 positive 반응을 나태내었으며, SRB assat에서는 A549와 SK-OV-3에 활성을 나타내는 4개의 발효여액을 확인한수 있었다.
In the present study, in order to investigate the anti-proliferative phenomenon of PLME, the effects of mycelial extract of Phellinus linteus (PLME) on the growth of human lung carcinoma cell line A549 was examined. We studied on the effects of PLME on the release of nitric oxide (NO) in mouse macrophage Raw 264.7 cells. Treatment of PLME to A549 cells resulted in the growth inhibition, morphological change and induction of apoptotic cell death in a dose-dependent manner as measured by MTT assay. We found that PLME stimulated a dose-dependent increase in NO production. These findings suggest that PLME enhances the anti-tumoral activity of macrophage and may be a potential therapeutic agent for the control of human lung carcinoma cells.
Effects of ionizing radiation alone and combined with chemotherapy on tumor growth and it's clonal specificity monitored by changes in distribution of chromosome number were studies in A549 ceil line originated from human adenocarcinoma of the lung. Radiation (300 rad, 600 rad and 900 rad) were delivered with or without 5-FU. Forty eight hours later, 57.5% of growth inhibition of cell w8s seen in cells treated with 5-FU concentration of $0.4{\mu}g/ml$ for 24hr exposure. Cell survival curves after radiation with and without 5-FU were made. Chromosomal analysis of cells in metaphase in control, and in cells treated with 300 rad of radiation, or $0.4{\mu}g/ml$ of 5-FU treatment, and combined treatment of both were done to examine the changes in ploidy and number of chromosome. Radiation combined with S-FU enhanced growth inhibition of A549 cells. However, no evidence of synergegic effects in growth. inhibition was observed in the cells treated with the combination therapy. Pattern of chromosomal distribution of survived cells were shifted from hyperploidy to hypoploidy by single dose of radiation (300 rad). As radiation dose increased a large number of hypoploidy cells were observed. Following treatment of cells with 5-FU, chomosomal distribution of survived cells were also shifted to hypodiploidy which were seen in cells treated with radiation, The ceil treated with 5-FU and fellowed by radiation within 24 hrs had cell with increased number of hypodiploidy cells. Almost same type of chromosomal changes were reproduced in cells treated with combined treatment with radiation and 5-FU. Minor differences were that cells with fewer number of chromosome were more frequent in cells treated with combined therapy. Further increase in cells of hypoploidy (93%) having 1-10 chromosome were induced by additional radiation. Therefore, the enhanced therapeutic effect of 5-FU combined with radiation of A549 cells appeared to be additive rather than synergistic.
Application of a generalized equivalent circuit including the electrode condition for the Hebb-Wagner polarization in the frequency domain proposed by Jamnik and Maier can provide a consistent set of material parameters, such as the geometric capacitance, partial conductivities, chemical capacitance or diffusivity, as well as electrode characteristics. Generalization of the shunt capacitors for the chemical capacitance by the constant phase elements (CPEs) was applied to a model mixed conducting system, $Ag_2S$, with electron-blocking AgI electrodes and ion-blocking Pt electrodes. While little difference resulted for the electron-blocking cell with almost ideal Warburg behavior, severely non-ideal behavior in the case of Pt electrodes not only necessitates a generalized transmission line model with shunt CPEs but also requires modelling of the leakage in the cell approximately proportional to the cell conductance, which then leads to partial conductivity values consistent with the electron-blocking case. Chemical capacitance was found to be closer to the true material property in the electron-blocking cell while excessively high chemical capacitance without expected silver activity dependence resulted in the electron-blocking cell. A chemical storage effect at internal boundaries is suggested to explain the anomalies in the respective blocking configurations.
브라질 기원인 신령 버섯 (A. blazei murill)은 강력한 항암 및 면역강화 작용을 가진 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 신령버섯 수용성 추출물(water extracted A. blazei Murill, WEAB)이 A549 인체 폐암세포 증식에 미치는 영향을 조사하였으며, 증식억제와 연관된 기전 해석을 시도하였다. WEAB가 처리된 A549 세포는 처리 농도 의존적으로 생존율이 감소되었으며, WEAB 처리는 암세포의 다양한 형태적 변형을 유발하였다. Flow cytometry 분석 결과로서 WEAB 처리에 의한 A549 폐암세포의 증식억제는 세포주기 G2/M arrest 및 apoptosis 유발과 직접적으로 연관성이 있음을 알 수 있었다. WEAB가 처리된 암세포에서 전사 및 번역 수준에서 cyclin A 발현의 감소 및 Cdk inhibitor p21 발현의 증가 현상이 관찰되었으나, cyclin B1, Cdk2, Cdc2, Wee1, Cdc25c 및 p53 등의 발현에는 큰 변화가 관찰되지 못하였다. 또한 WEAB의 처리는 COX-2 선택적 발현 저하를 유발하였으나, telomere 조절 관련 유전자들의 발현에는 큰 영향을 주지 못하였다. 이상의 결과는 신령버섯 추출물이 강력한 항암 및 암 예방 효능의 잠재력을 가지고 있음을 의미하며, 이에 관한 지속적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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