• 한국가금학회지
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• 제30권3호
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• pp.191-196
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• 2003

1. S. choleraesuis, S. typhimurium, S. dublin에서 순수 분리한 flagella protein의 분자량은 각각 53.4 kDa, 51 kDa, 54.6 kDa으로 나타났다. 2. 산란계의 혈청 중 항체역가 수준은 면역 후 2주경 부터 급격히 증가하기 시작하였고 난황 중 항체역가의 수준은4 주경 부터 급격히 증가하기 시작하였다. 6주와 8주경 이 후 부터는 난황항체역가가 혈청 항체역가보다 높은 수준을 유지하거나 계속 증가하였다. 3. Salmonella flagella protein을 면역원으로 산란계에 면역하여 생산된 난황항체는 150,000배 희석 시 각각의 Salmonella 균주에서 특이적으로 각각의 항원에 반응하였다. 4. 난황 1 ml당 IgY의 함량은 약 31 mg∼33 mg이었으며, IgY의 함량은 단백질 함량의 약27%를 차지하는 것으로 나타났다. 5. 실험실조건하에서 난황항체의 항원결합능력을 조사한 결과 동결건조한 WSF을 2∼4 mg/ml첨가 시 균체의 농도가 $10^{9}$ CFU/ml에서 $10^{5}$∼$10^{6}$ CFU/ml로 급격하게 감소하였다.다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권2호
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• pp.175-178
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• 2004

Collagen에 의해 유도되는 류마티스 관절염을 저해하는 효과가 있는 인간 histone 단백질 Hl.5 (hHl.5)를 산화스트레스 유도성 SWPA2 프로모터에 연결하여 형질전환 담배(Nicotiana tabacum L. cv Bright Yellow-2) 배양세포주를 개발하였다. hH1.5 유전자는 Agrobacterium 매개 형질전환 방법으로 담배 BY-2 배양세포에 도입되었다. 형질전환 캘러스는 150mg/L kanamycin과 300mg/L claforan이 포함된 변형된 MS 선발배지에서 선발하여, PCR분석으로 hHl.5 유전자의 도입을 확인하였다. 형질전환 현탁배양세포에서 hH1.5 단백질의 발현은 northern 분석과 Western 분석으로 확인하였는데, 담배배양세포에서 재조합hHl.5 단백질 (42 kDa)은 인간의 것 (32 kDa)과는 다른 크기의 단백질이 확인되었다. 금후 재조합 hH1.5 단백질의 자세한 특성규명이 요구된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제30권4호
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• pp.299-307
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• 1992

뇌 유구낭미충증 진단에는 영상진단을 가장 널리 이용하고 있으나 낭미충증의 영상진단은 감염충체수, 감염경과 기간, 감염위치 및 포도낭미충 존재여부 등에 따라 소견이 매우 다양하므로 감별진단에 도움이 되는 혈청학적 진단이 요구된다. 이때에 이용하는 혈청학적 진단 방법은 특이항체를 혈청이나 뇌척수액에서 증명하는 것이나 몇 가지 경우에 위음성 반응을 나타내어 민감도가 낮은 결점이 있다. 민감도가 낮은 경우를 해결하는 방법으로시, 또 기생충에서 유래하는 특이항원을 측정함으로써 항체측정 때 나타나는 교차반응을 최소화하고, 충체검 출에 준하는 진단방법으로서 유구낭미충 특이항원을 환자 혈청 및 뇌척수액에서 측정하는 연구를 시도하고 있다. 이 연구에서는 유구낭미층중 환자에서 이중항체-효소면역 측정 법을 실시하여 유구낭미충의 낭액 항원의 구성 단백질을 측정하였다. 항원반응용 항체로는 낭액으로 감작시킨 토끼혈청과, 낭액을 구성하는 단백질중 150 kDa 에만 반응하는 단클론항체를 이용하였다. 이중항체-효소면역측정 법으로는 150 kDa단백질을 8ng/ml까지 측정할 수 있었고, 61ng/m1 이상에서는 농도에 따른 흡광도 차이가 적었다. 이 방법으로 스파르가눔, 간흡충, 폐흡충, 요꼬가와흡충, 간질, 고래회충 제 3기유충 및 선모충 등의 생리식염수 추출액을 검색한 바 모두 음성반응이어서 특이도가 높다고 판단하였다. 뇌 유구낭미충증으로 진단한 환자 255명의 혈청 351개를 측정한 바 측정 가능범위 에 미치지 못하여 모두 음성이었다. 환자 212명에서 얻은 뇌척수액 276개 중 31개 (11.2%)는 양성이었다. 이와 같이 민감도가 낮아 항인측정법은 진단용으로 이용하기 어렵다고 생각하였다. 뇌척수액에서 150kDa단백질이 증 멸된 환자는 프라지관텐 치료 후 2일이 경과한 경우, 그리고 약제치료에도 불구하고 임상결과가 불량하여 결국 외과적으로 충체를 제거한 바 낭벽이 초점 성으로 변성된 포도낭미충에 감염되었던 환자의 뇌척수액에서 불규칙하게, 양적으로는 일정하지 않게 출현하였다. 150kDa 단백질은 뇌 낭종성 병변에서 채취한 낭미충 낭액에서도 측점할 수 있었다. 그리고 150kDa단백질의 농도가 61 ng/ml이상인 뇌척수액이나 외과적으로 얻은 낭액으로 SDS-폴리아크릴아미드 전기영동을 실시하여 150kDa 단백질의 subunit인 15, 10, 7kDa를 증명할 수 있었다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제31권10호
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• pp.2992-2994
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• 2010

• 한국식품과학회지
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• 제31권2호
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• pp.553-557
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• 1999

혈전용해능을 가진 균류 (버섯류) 5종 Daedaleopsis styracina, Trichaptum abietium, Coriolus versicolor, Pisolithus tinctorius 그리고 Tricholomopsis decora 등을 선발하여 혈전용해효소 활성을 측정하였고, 기질 특이성을 조사하였다. 버섯 추출액을 조제하여 혈전 용해도를 측정한 결과 plasmin 1.0 unit 보다 $3{\sim}4$배의 높은 활성을 보였으며, 그 중 Pisolithus tinctorius이 가장 높은 활성(4.71 plasmin unit)을 나타내었고, Tricholomopsis decora가 Plasmin에 대한 기질 N-p-Tosyl-Gly-Pro-Lys p-nitroanilide에 대해 가장 높은 특이성(1.32 plasmin unit)을 보였다. 버섯의 균사체로부터 추출한 효소를 SDS-fibrin zymography 활성확인법에 의해 분석한 결과 분자량이 54와 61 kDa의 공통된 활성을 가지는 단백질을 확인하였으며, Trichaptum abietium는 100 kDa의 그리고 Tricholomopsis decora는 84 kDa의 강한 활성을 가지는 혈전용해효소를 확인하였다.

• 한국식품과학회지
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• 제31권1호
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• pp.83-90
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• 1999

천연 고분자 물질인 chitosan을 효소 가수분해시켜 수용성이며, 이미 이취가 없고 점성이 낮은 chitosan 분해물을 제조하여 식품첨가물로서의 이용가능성을 평가하고자 하였다. Chitosan의 효소적 분해 반응조건을 chitosan : enzyme이 1 : 0.3, $40^{\circ}C$, 20hr으로 정하였을 때 56%의 각 분획별$(M.W.\;3{\sim}100\;kDa)$ 수율을 얻을 수 있었다. 수용성 chitosan의 용해도는 작은 분자량(3 kDa 이하)일수록 증가하였으며, 점도는 분자량이 클수록 증가하였고, 고분자량(100 kDa 이상)에서는 pH가 높을수록 점도가 증가하였다. 지방 결합능력은 저분자$(3{\sim}30\;kDa)$ chitosan에서는 약 500%의 지방결합능력을 나타내었고, 30 kDa 이상의 고분자량에서는 약 800%의 지방결합능력을 나타내었다. 유화 안정성은 저분자의 수용성 chitosan일수록 낮은 유화안정성을 나타내었고, 냉동-해동 안정성은 분자량에 관계없이 안정적으로 나타났다. 표면색도는 각 분자량대별로 별 차이가 나타나지 않았다. Cholesterol 결합능력은 $3{\sim}0.2\;kDa$의 chitosan 분해물질이 가장 작은 결합력(24.7%)을 보였고, 나머지 chitosan 분해물질은 비슷한 결합력을 보였다. 수용성 chitosan의 관능적 특성은 분자량$(3{\sim}100\;kDa)$이 작을수록 쓴맛과 떫은맛의 강도가 현저히 낮게 나타났고, 큰 분자량(100 kDa 이상)에서는 비린내가 감지되었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제36권3호
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• pp.183-190
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• 1998

간흡충 성충의 cDNAlibrary를 제작하고, 간흡충 감염 토끼 혈청으로 강한 양성 반응을 보이는 클론 (pBCs31) 한 개를 면역선별하였다. 이 클론이 28 kDa의 재조합단백을 encoding하는 것을 면역이적법으로 확인하였다. 클론된 유전자는 30개의 일정한 염기서열이 16번 반복된 후 320개의 다른 염기가 이어져 있었다. 이 반복되는 염기서열의 연역된 아미노산서열은 AQPPKSGDGG이었 다. 이 재조합항원을 이용한 효소면역검사법은 간흡충 감염 사람 혈청에 높은 특이도를 보였다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제21권9호
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• pp.1244-1251
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• 2008

The aim of the present study was to delineate the expression and secretion of insulin-like growth factor (IGF) system components by pig liver cells. Hepatocytes were prepared from 3-wk-old weanling piglets following a two-step collagenase perfusion procedure, after which the cells were incubated for 24 or 48 h at a density of $2{\pm}10^5$ cells per 35-mm dish in 2-ml Williams' medium E. The cells were found to express the genes encoding IGF-I, IGF-binding proteins (IGFBPs)-2 and -3 and acid-labile subunit (ALS) by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) following the culture. However, IGF-I was localized to hepatocytes by immunohistochemical analysis, whereas IGFBP-3 was localized to endothelial cells, but not to hepatocytes. This indicated that the IGFBP-3 gene expression detected by RT-PCR was likely to have been contributed by unidentified non-parenchymal cells that had not been removed during the hepatocyte preparation. The conditioned culture medium (CCM) of the cells contained immunoreactive IGF-I and IGF-II, with the latter being seven-fold more abundant than the former. The CCM also contained 43-, 40-, 34-, 31-kDa doublet and 26-kDa IGFBPs as examined by Western ligand blotting. The 40-, 34- and 31-kDa doublet IGFBPs were approximately three-fold as abundant as the 43- and 26-kDa IGFBPs. Moreover, the 43- and 40-kDa doublet and the 34-kDa IGFBPs were immunoprecipitable with IGFBP-3 and IGFBP-2 antibodies, respectively. Overall, these results are similar to those known in the rat, which suggests that the IGF system components are likely to be expressed and secreted in pig liver in a manner similar to that in rat liver.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제31권4호
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• pp.321-330
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• 1993

Fibricola seoulensis의 피낭유충을 흰쥐에게 경구 감염시켜 3, 4, 5. 6, 7일 별로 부 검 회수하여 생리 식염수로 씻은 후, 10% neutral formalin buffer에 고정 후 세척하였다. Acetylcholinesterase 염색은 기질로 acetylthiocholine iodide를 사용한 효소조직화학적 방법으로 피낭유충과 여러 성장 과정에 있는 충체의 신경계 분포 발달과정을 관찰하고 억제제로는 eserine, iso-OMPA, BW284C51를 사용하였다. 신경계는 피낭유충과 성충의 전반부 부위의 인두와 구흡반과 후반부의 배설 신경총을 연결하는 3쌍의 종주신경간과 그들을 연결하는 횡신경 연합과 환상신경 연합으로 구성되어 있으며, 다수의 환상신경 연합은 충체표면 가까이에 위치한 종주신경간과도 연결되어 있다. 충체 발달의 모든 단계에서 구흡반 및 복흡반, 인두, 신경계에 acetylcholinesterase와 nonspeciaccholinesterase의 염색반응이 관찰되었다. F. seoulensis의 acetylcholinesterase 동위효소 유형은 분자량 69 kDa. 132 kDa의 2개의 분획이 분리되었으며 그 중 69 kDa 분획대가 주분획을 이루었다.

• BMB Reports
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• 제31권4호
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• pp.364-369
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• 1998

Insect plasma protein is abundant in the hemolymph of holometabolous insect larvae and is used as a source of amino acids and energy for construction of adult structures during metamorphosis. In order to understand the mechanism of decomposition of larval plasma proteins by hemocyte protease, we tried to purify a cysteine protease from the hemocyte lysate by using Carbobenzoxy-L-Phenylalanyl-L-Arginine-4-Methyl-Coumaryl-7-Amide (Z-Phe-Arg-MCA) as substrate and to identify plasma proteins that are selectively susceptible to the purified protease. Here, we describe the purification and characterization of a cysteine protease that specifically hydrolyzes the plasma protein of the coleopteran insect, Tenebrio molitor, larvae. The molecular mass of this enzyme was 25 kDa, as determined by SDS-PAGE under reducing conditions. The amino acids sequence of its $NH_{2}-terminus$ was determined to be Leu-Pro-Gly-Gln-Ile-Asp-Trp-Arg-Asp-Lys-Gly. This sequence contained Pro, Asp, and Arg residues, conserved in many papain superfamily enzymes. The specific cysteine protease inhibitors, such as E-64 and leupetin, inhibited its hydrolytic activity. One plasma protein with a molecular mass of 48 kDa was selectively hydrolyzed within 3 h when the purified enzyme and plasma proteins were incubated in vitro. However, the 48 kDa protein was not hydrolyzed by the purified 25 kDa protease in the presence of E-64. Western blotting analysis at various developmental stages showed that the purified enzyme was detected at larvae, pupae, and adult stages, but not the embryo stage.