• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제15권2호
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• pp.135-147
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• 1988

To compare the stimulation effect of the ratio in follicle stimulating hormone and luteinizing hormone in induction of multiple follicular growth, the serum $E_2$ level, the diameter of follicle, number of aspirated follicles and cleavage rate of in vitro fertilized preovulatory oocytes as well as the pregnancy rate were evaluated. Forty one patients with irreparable tubal disease were stimulated by hMG(n=24) or FSH/hMG(n=17) for the purpose of in vitro fertilization and embryo transfer. The following results were obtained. 1. Serum estradiol($E_2$) levels on the day of hCG administration were $921.0{\pm}353.3\;pg/ml$ in hMG group and $1272.9{\pm}1060.6\;pg/ml$ in FSH/hMG group. The serum $E_2$ value of hMG group was significantly lower than that of FSH/hMG group. 2. The diameter of leading follicle by ultrasonogram on the day of hCG administration were $16.2{\pm}2.0\;mm$ in hMG group and $16.2{\pm}2.6\;mm$ in FSH/hMG group. No significant difference of follicle diameter between two groups was demonstrated. 3. The number of follicles with diameter above 10 mm by sonogram on the day of hCG injection were $3.91{\pm}2.32$ in hMG group and $6.52{\pm}3.86$ in FSH/hMG group. There was significant difference of number of follicles between two groups, (p< 0.01). 4. The number of oocytes found per patient at aspiration were $2.59{\pm}1.00$ in hMG group and 3. $76{\pm}2.31$ in FSH/hMG group. There was significant difference of number of aspirated oocytes between two groups. (p< 0.05). 5. The detection rate of preovulatory oocyte at aspiration were 68.4%(39/57) in hMG group (n=22) and 77.6%(38/49) in FSH/hMG group (n=13). 6. The cleavage rate of preovulatory oocyte at 44 hours after insemination were 74.4%(29/39) in hMG group(n=22) and 81.6%(31/38) in FSH/hMG group (n=13). When only hMG was used, one pregnancy was established in 15 patients to whom 29 zygotes were transferred. And a full term normal female baby was delivered by elective cesarean section. In the FSH/hMG group, five pregnancies out of 9 transferred patients were confirmed by serum ${\beta}-hCG$. Two pregnancies were spontaneously aborted before the 6th week of pregnancy. One patient aborted her baby at the 18th week of pregnancy because of incompetent internal os of the cervix. Two patients delivered two full term babies by elective cesarean section. From the above findings, paralell with the increase in the ratio of exogenous follicle stimulating hormone to luteinizing hormone, an increase in oocyte recovery was observed as well as an improvements in pregnancy rate. It was concluded that FSH enrichment early in the follicular phase had a beneficial effect in the controlled ovarian hyperstimulation.

• 한국수정란이식학회지
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• 제21권3호
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• pp.177-182
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• 2006

본 연구는 $MGA+PGF_{2{\alpha}}$ 투여에 의한 발정 동기화 방법이 한우의 혈청 $P_4$ 수준, 발정 발현율과 수태율에 미치는 영향을 규명하고자 수행하였다. 첫째로, 한우 미경산우에서 $MGA+PGF_{2{\alpha}}$ 투여가 혈청 $P_4$ 수준에 미치는 영향을 조사하기 위하여 한우 미경산우 10두 및 프리마틴 1두에 대하여 MGA를 1일 0.5 mg을 14일간 오전 배합 사료에 섞어 급여하였으며, 19일이 경과한 후에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25 mg을 투여하였다. MGA feeding 후 혈청 $P_4$ 농도 수준을 분석하기 위하여 MGA 급여 기간과 급여 종료 후 발정이 관찰될 때까지는 3일 간격, $PGF_{2{\alpha}}$ 투여 시, 발정 및 인공 수정 시, 인공 수정 후 15일째 및 2개월째에 혈액을 채취하였다. 한우 미경산우의 혈청 $P_4$ 수준은 MGA급여 7일 이후부터 상승하기 시작하여 투여 9일차에는 5.4 ng/ml로써 이후 상승된 상태에서 유지되었다. $PGF_{2{\alpha}}$ 투여시점인 33일차에는 7.6 ng/ml 수준으로 피크를 나타냈고, 투여 2-3일이 경과하고 발정이 발현됨에 따라 1.4 ng/ml로 급강하하는 양상을 보였다(p<0.05). 그러나 프리마틴의 경우에는 시험 기간 동안 P4수준의 변화가 인정되지 않았다. 둘째로, 한우 미경산우 및 경산우 194두를 이용하여 상기한 $MGA+PGF_{2{\alpha}}$ 투여 방법(n=104)과 대조군으로 $PGF_{2{\alpha}}$ 투여(11일 간격 2회 투여, n=90)에 따른 발정 발현율 및 수태율을 비교하였다. 발정 발현율은 대조군인 $PGF_{2{\alpha}}$ 투여군 72.2%에 비해 $MGA+PGF_{2{\alpha}}$ 투여군에서 91.3%로써 유의적으로 높았다(p<0.05). 인공 수정 후 수태율은 $MGA+PGF_{2{\alpha}}$ 투여군이 $PGF_{2{\alpha}}$ 투여군에 비해 1회 수정 수태율(51.1 vs. 59.6%), 2회 수정 수태율(77.8 vs. 84.6%) 및 전체 수태율(88.9 vs. 94.2 %)이 유의적으로 높았다(p<0.05). 본 연구의 결과는 $MGA+PGF_{2{\alpha}}$를 이용한 발정 동기화 방법은 $PGF_{2{\alpha}}$ 투여법에 비해 높은 발정 동기화율 및 수태율을 나타냄으로서 한우의 번식 능력 향상에 적절히 활용될 수 있음을 보여준다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제21권1호
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• pp.13-20
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• 2006

본 연구의 목적은 요를 통해 hFSH를 발현하는 형질 전환 소의 생산이다. 요의 분비와 관련 있는 유전자로서 mUII promoter를 사용하여 hFSH유전자를 구성했다. 태아섬유아세포(KbFF)는 임신 45일령의 태아(male)에서 채취하였다. hFSH gene은 pcDNA3(neo) vector와 같이 KbFF 세포에 electroporation 방법으로 transfection하였다. 유전자를 transfection한 세포는 G-418로 2주 동안 배양하였고, 선발된 colony는 PCR로 확인하였다. 핵이 제거된 난자는 hFSH가 transfection된 세포와 transfection 되지 않은(control) 세포를 이용하여 핵이식하였다. 48시 간 후 hFSH가 transfection된 세포는 68.7%의 수정란이 난할되었으며, 8일 후 15.7%의 수정란이 배반포로 발달하였다. 그러나 대조구에서는 67.6%가 난할되었으며, 24.5%가 배반포로 각각 발달하였다. 이들 배반포에서 apoptosis 분석 결과 hFSH 유전자가 transfection된 또는 transfection되지 않은 대조구에서 유의적인 차이는 보이지 않았다. 배반포는 53두의 수란우에 이식하여 두 마리의 산자가 생산되었으나(1.9%) hFSH가 transfection되지 않은 것으로 나타났다. 이 결과는 선발된 hFSH colony에서 transfection되지 않은 세포가 혼합되어 있었다는 것을 나타내 주고 있으며, colony의 선발과 검증에 더 많은 연구의 필요성이 있음을 나타내준다.

• 대한수의학회지
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• 제30권2호
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• pp.123-127
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• 1990

모성 및 부성 genome의 기능을 알아보기 위하여 미세조작기법과 Sendai virus를 이용한 핵융합 기술을 이용하여 2개의 자성전핵만으로 구성된 2배체의 gynogenetic 수정란을 그리고 2개의 웅성전핵만으로 구성된 2배체의 androgenetic 수정란을 인위적으로 작출하였다. 이들의 작출효율은 biparental 수정란에서는 56%, gynogenetic 수정란에서는 50% 그리고 androgenetic 수정란에서는 56% 이었다. 이들을 체외에서 배양한 결과 gynogenetic 및 androgenetic 수정란은 2-세포기 이후에는 biparental 및 intact 수정란에 비하여 그 발달능이 매우 저조하였으나 이들 중 25% 이상이 포배까지 발달한 수 있음을 확인하였다. Gynogenetic 및 androgenetic 수정란을 동기화된 수란생쥐의 난관내에 이식하였던 바, androgenetic 수정란은 전혀 착상 되지 않았으나, gynogenetic 수정란에서는 착상이 확인되었다. 핵이식기법으로 인위조작된 2배체의 biparental 수정란으로부터 28마리의 생쥐 신생자를 생산하였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제24권3호
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• pp.347-353
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• 1997

본 실험은 초자화 동결된 생쥐 배반포기배의 융해 후 배양조건 및 이식방법이 난자의 생존에 미치는 효과를 조사하고자 실시하였다. 체외수정후, M16배양액에서 4일동안 배양하여 얻어진 생쥐 배반포기배는 EFS40 (40% ethylene glycol, 18% Ficoll, 0.5 M sucrose가 함유된 PBS)으로 초자화동결하였다. 실험 I에서는 융해 후 배양조건에 따른 난자들의 체외/체내 생존율을 조사하였다. 융해된 난자가 M16과 4 mg/ml 소혈청알부민과 20 가지 아미노산이 함유된 m-CR1 (2% BME 아미노산 용액, 1% MEM 아미노산 용액) 및 단층배양이 유도된 난구세포 (10% FBS가 함유된 m-CR1배양액)에서 각각 배양되었을 때, 융해 후 24시간째 체외 생존율은 배양조건에 따라 차이가 없었다(75.6, 83.1, 82.4%). 그러나 체내 발달율에 있어서 임신 15일째 생존 산자율은 39.0, 49.0, 38.1%로서 유사한 성적을 나타냈으나, 전체 착상율에 있어서는 m-CR1 (80.4%)에 배양되었을 때, M16 (51.2%), 난구세포와 공배양시 (57.1%)보다 유의하게 높은 생존율을 보였다(p<0.05). 실험 II에서는 수정란 이식 방법에 따른 체내 발달율을 조사하였다. 배반포기배를 융해 후 체외배양없이 곧바로 가임신 2, 3일째 대리모에 이식을 실시하였을 때, 가임신 2일째 대리모에서는 임신징후를 얻지 못하였고, 가임신 3일째 대리모에서는 50.0%의 착상율과 15.4%의 정상산자율을 얻었다. 그러나, 이러한 결과는 융해 후, 16시간 배양하여 가임신 3일째 대리모에 이식 (73.5, 57.1%)하는 경우보다 유의하게 낮은 결과였다(p<0.05). 실험 III에서는 초자화 동결된 배반포기배의 융해 후 배양시 발달이 늦어진 수정란의 이용효율을 극대화시키기 위해 융해한 4일째 초기, 5일째 초기, 5일째 팽창 배반포기배의 체외/체내 생존율을 조사하였다. 가장 높은 체외 생존율은 5일째 팽창 배반포기배 (78.3%)에서 얻었으나, 체내 발달율 (산자율, 착상율)에 있어서는 4일째 초기 배반포기배 (33.3, 66.7%)의 경우가, 5일째 팽창 배반포기배(29.0, 38.7%)의 경우보다 높았다(p<0.05). 따라서 본 연구의 결과는 배양조건과 수정란 이식방법에 따라 초자화 동결된 배아의 체외/체내 발달율을 높일 수 있으며, 발달이 늦은 배반포기배의 체내 발달율은 체외 배양시간이 길어질수록 낮아짐으로, 5일째 팽창 배반포기배보다 4일째 초기 배반포기배를 동결하는 것이 더 유용하다는 것을 알 수 있었다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제22권2호
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• pp.115-119
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• 2007

본 연구는 젖소에 있어서 인공수정 후 외인성 progesterone과 estradiol을 병용 투여하거나 progesterone을 단독 투여하는 경우에 젖소의 번식 성적에 미치는 영향을 조사하기 위하여 대조군, CIDR에서 estradiol 캡슐을 부착시킨 progesterone과 estradiol 병용 투여군(P4+E2군) 및 CIDR에서 estradiol 캡슐을 제거한 progesterone 단독 투여군(P4군)로 구분하여, 인공수정 후 14일째에 질내에 삽입한 후 삽입한 날로부터 7일째에 제거하였다. 수태된 개체에 대해서는 수태율을 분석하였고, 수태되지 않은 개체에 대해서는 수정 후 수태까지의 일수, 수태당종부 횟수, 수태가 되지 않은 경우의 차기 발정에 따른 발정강도 및 CIDR 삽입 기간 동안 및 제거한 후의 혈중 progesterone 농도를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. P4+E2군 및 P4군에 따른 수태율에 있어서는 대조군의 경우 15.4%였고, P4+E2군의 경우 60.0% 및 P4군 38.9%로 P4+E2군의 수태율이 가장 높은 경향을 나타내었다. 2. 혈청 중 P4 농도 측정을 위하여 처리 후 0일째(발정 주기 14일째), 2일째(발정 주기 15일째), 3일째(발정주기 17일째), 6일째(발정 주기 20일째), 8일째(발정 주기 1일째), 9일째(발정 주기 2일째), 10일째(발정 주기 3일째), 13일째(발정 주기 6일째)에 채혈하여 측정한 결과, 처리 후 8일째(발정주기 1일째), 9일째(발정주기 2일째) 및 13일째 (발정 주기 6일째)에는 P4+E2군이 대조군 비임신군 및 대조군 임신군에 비하여 유의적으로 높은 경향을 나타내었다.(p<0.05).

• 한국수정란이식학회지
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• 제19권2호
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• pp.127-132
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• 2004

한우 종모우의 고환둘레와 정액성상 그리고 후대희 성장 및 도체성적과의 관계를 구명하기 위하여 4~8세 한우 종무우 92두를 공시하였으며 8,628개의 종모우 정액성상 그리고 종모우 후대 814e의 성장 및 도체성적을 이용하였다. 종모우의 고환둘레는 38.7${\pm}$3.73 cm, 1차 정액량, 정자농도 및 총정자수는 각각 5.63mL, 17.9${\times}10^8$/mL 및 100.34${\times}10^8$/ejaculation 이었고 2차 정액량, 정자농도, 및 총정자수는 각각 5.32mL, 15.0${\times}10^8$/mL 79.4${\times}10^8$/ejaculation 이었다. 고환둘레는 정액량(1st : ${\gamma}$=0.27, P<0.05 ; 2nd : ${\gamma}$ = 0.19, P < 0.10), 정자농도(1st : ${\gamma}$=0.21, P<0.05 ; 2nd : ${\gamma}$ = 0.28, P < 0.01)와 정의 상관관계를 나타내었다. 종모우 후대들의 생체중은 6, 12, 18, 그리고 22개월령에 각각 49.2, 281.1, 436.3 그리고 534.4kg 이었고 일당증체량은 0.81 kg/day이었다. 그리고 도체중, 배최장근단면적, 등지방두께, 그리고 근내지방도는 각각 313.8 kg, 77.9 cm, 0.62 cm and 2.47 이었다. 종모우의 고환둘레가 클수록 후대들의 6(${\gamma}$=0.08, P<0.10), 12(${\gamma}$=0.18, P<0.10), P<0.10), 18(${\gamma}$=0.21, P<0.10), 22개월령(${\gamma}$=0.20, P<0.10)의 생체중, 일당증체량(${\gamma}$=0.25, P<0.05) 그리고 배최장 근단면적(${\gamma}$=0.19, P<0.10)이 높은 경향을 보였다. 그러나 종모우의 고환둘레와 후대들의 근내지방도 및 등지방두께와는 뚜렷한 상관관계를 보이지 않았다. 본 연구의 결과는 종모우의 고환둘레와 정액성상 그리고 후대들의 성장률과 긍정적인 관계가 있는 경향을 보였지만 추가적인 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제20권3호
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• pp.271-277
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• 2005

정상적으로 자연 분만한 Cocker spaniel 개 8두를 대상으로 분만 후 자궁의 수복상태를 관찰하기 위하여 육안적 질 분비물의 배출 및 초음파 진단장치를 이용하여 자궁의 형태, 에코 정도 및 크기의 변화상 등을 검사한 바 8두 모두 자궁의 수복이 정상이었다. 분만 후 자궁의 형태는 초음파 종단면에서 착상부가 비착상부에 비해 종대되어 나타나는 염주상을 보였으나 분만 후 25.60$\pm$2.51일 이후에는 착상부와 비착상부가 유사한 크기인 관상으로 관찰되었다. 초음파 횡단면에서는 초승달 모양 또는 다각형과 같이 부정형으로 관찰되었으나 16.00$\pm$2.12일 이후에는 원형으로 관찰되었다. 또한 분만 후 자궁직경의 변화상은 분만 후 1일에 착상부의 직경은 24.20$\pm$2.06mm, 분만 후 7일에는 13.18$\pm$0.84 mm로 현저하게 감소하였으며, 비착상부의 직경은 분만후 1일에는 14.26$\pm$2.22mm, 분만 후 7일에는 9.81$\pm$0.70mm로 감소하였다. 분만 후 36일에는 착상부 7.46$\pm$0.43mm, 비착상부 6.69$\pm$0.81mm로서 착상부 와 비착상부 직경의 차이가 크지 않았으나 이후 착상부와 비착상부의 직경이 완만하게 감소하여 분만 후 68일에는 6.02$\pm$0.23mm로 직경의 변화가 거의 없으며 저에코한 구조물로 관찰되었다. 자궁 수복완료 시기는 질 분비물의 배출기간 그리고 초음파 검사에 의한 자궁의 형태,조직의 에코정도 및 자궁의 직경 등을 종합하여 볼 때 분만 후약 68일이 라 생각되며 또한 각 시기별 특징적인 초음파상이 관찰되었다. 따라서 본 연구의 결과는 Cocker spaniel 개의 분만 후 정상 수복과 수복부전을 감별하고 다른 산욕기 질환을 진단하는데 응용될 수 있으며 다른 견종에서도 응용할 수 있는 임상적 자료로 활용될 수 있을 것으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제13권2호
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• pp.101-112
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• 1986

It is now common practice to attempt ovarian hyperstimulation in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) to promote the development of multiple preovulatory follicles and to maximize the number of mature egg available. There are several drugs for hyperstimulation such as clomiphene citrate only, clomiphene citrate and human menopausal gonadotropin (HMG) and HMG only. Accumlated experience has shown that the hyperstimulation of the ovary in IVF-ET results in high pregnancy rate. But the hyperstimulation of the ovary in IVF-ET may cause the hyperandrogenism, so we must consider the adverse effect on pregnancy rate of the hyperandrogenism. Little is known about the functional significance of androgen for the follicular growth, however, the hyperandrogenism might interfere with oocyte maturation. The aim of the present investigation was to determine the serum profiles of estradiol, androstenedione and testosterone during the hyperstimulated menstrual cycles in IVF. The results were summarized as follows: 1. There was a gradual increase in the mean levels of serum estradiol, androstenedione, and testosterone approaching follicular maturation. 2. The mean serum estradiol levels in the hyperstimulated groups were significantly higher than that in the control group in late follicular phase and ovum retrieval (ovulation) day (p<0.01). 3. The mean serum androstenedione levels in the clomiphene citrate groups were significantly higher than that in the control group in late follicular phase (p<0.01). There was no statistically significant different in the mean serum androstenedione levels between the control group and the HMG group (p>0.05). 4. There was no statistically significant difference in the mean levels of testosterone among each group (p>0.05). 5. There was no statistically significant different in the mean levels of estradiol, androstenedione and testosterone between the fertilized patients and non-fertilized patients in clomiphene citrate and HMG group (p>0.05).

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권2호
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• pp.239-249
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• 1999

The role of amino acids in culture media for IVF-ET was examined in a total of 76 cycles. Patients received clomiphene citrate (CC) followed by hMG or GnRH-a combined with gonadotropins (FSH/hMG) for controlled ovarian hyperstimulation. Severe male (<$4{\times}10^6$ motile sperm) or age factor (>39 y) patients were excluded in this study. Pregnancy was classified as clinical if a gestational sac or fetal cardiac activity was seen on ultrasound. No significant differences were found in age, duration of infertility, follicle size, the level of $E_2$ on the day of hCG injection, the mean number of oocytes retrieved, total motile sperm count, fertilization rate and the mean number of embryos transferred between bHTF (without amino acids) and mHTF (with amino acids) groups. However, total ampules of gonadotropins were higher (p<0.01) in mHTF group than bHTF group. Significantly (p<0.05) more clinical pregnancies were recorded in mHTF group (13/30) compared with bHTF group (9/46). The multiple pregnancy rates were 11.1% in bHTF group and 7.7% in mHTF group. There were one ectopic pregnancy in mHTF group and one heterotopic pregnancy in bHTF group. Abortion rates were 22.2% in bHTF group and 7.7% in mHTF, respectively. The ongoing pregnancy or livebirth rate was significantly (p<0.05) higher in mHTF group (12/30) than bHTF group (7/46). These results suggest that the addition of amino acids in culture media is essential for culture of zygotes in vitro and adjustment of energy substrates in phosphate-free culture media appears to be beneficial for human IVF-ET procedure.