We investigated the value of mitochondrial small subunit rRNA gene (mt SSU rDNA) PCR-RFLP as a taxonomic tool for Acanthamoeba isolates with close inter-relationships. Twenty-five isolates representing 20 species were included in the analysis. As in nuclear 18s rDNA analysis, two type strains (A. astronyxis and A. tubiashi) of morphological group 1 diverged earliest from the other strains, but the divergence between them was less than in 18s riboprinting. Acanthamoeba griffini of morhological group 2 branched between pathogenic (A. culbertsoni A-1 and A. healyi OC-3A) and nonpathogenic (A.palestinensis Reich, A. pustulosa GE-3a, A. royreba Oak Ridge, and A lenticulata PD2S) strains of morphological group 3. Among the remaining isolates of morphological group 2, the Chang strain had the identical mitochondrial riboprints as the type strain of A. hatchetti. AA2 and AA1, the type strains of A. divionensis and A. paradivionensis, respectively, had the identical riboprints as A. quina Vil3 and A. castellanii Ma. Although the branching orders of A. castellanii Neff, A. polyphaga P23, A. triangularis SH621, and A. lugdunensis L3a were different from those in 18S riboprinting analysis, the results obtained from this study generally coincided well with those from 18S riboprinting. Mitochondrial riboprinting may have an advantage over nuclear 18S rDNA riboprinting beacuse the mt SSU rDNAs do not seem to have introns that are found in the 18S genes of Acanthamoeba and that distort phylogenetic analyses.
Using phytoplasma universal primer pair Pl and P7, a fragment of about 1.8 kb nucleotide sequences of 16S rRNA gene and 16S-23S rRNA intergenic spacer region, and a portion of 23S rRNA gene of jujube witches'broom (JWB) and mulberry dwarf(MD) phytoplasmas were determined. The nucleotide sequences of JWB and MD were 1,850 bp and 1,831 bp long, respectively. The JWB phytoplasma sequence was aligned with the homologous sequence of MD phytoplasma. Twenty-eight base insertions and nine base deletions were found in the JWB phytoplasma sequence compared with that of MD phytoplasma. The similarity of the aligned sequences of JWB and MD was 84.8%. The near-complete 16S rRNA gene DNA sequences of JWB and MD were 1,529 bp and 1,530 bp in length, respectively, and revealed 89.0% homology. The 16S-23S rRNA intergenic spacer region DNA sequences were 263 bp and 243 bp in lengths respectively, while homology was only 70% and the conserved tRNA-lle gene of JWB and MD was located into the intergenic space region between 16S-23S rRNA gene. The nucleotide sequences were 77 bp long in both JWB and MD, and showed 97.4% sequence homology. Based on the phylogenetic analysis of the two phytoplasmas, the JWB phytoplasma belongs to the Elm yellow phytoplasma group (16S rV), whereas, the MD phytoplasma belongs to the Aster yellow group (16S rI).
JIN Long-Guo;KIM Myung-Sook;CHOI Jae-Suk;CHO Ji-Young;JIN Duck-Hee;HONG Yong-Ki
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.36
no.1
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pp.35-38
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2003
Nuclear 18S ribosomal RNA gene (185 rDNA) from the aquaculturable seaweed Porphya tenera (Bangiales, Rhodophyta) was amplified using the polymerase chain reaction and its sequence was analysed. Complete 185 rDNA has an 1,822 bp exon and a 510 bp intron. The G+C contents of exon and intron were $48.68\%\;and\;54,90\%,$ respectively. The exon sequence showed $99.6\%$ homology to the GebBank accession number AB029880 of the Japanese P. tenera. The intron region that is inserted upstream between 568 and 1,079 showed $43.6\%$ homology to the AB029880.
Ihn-Sil Kwak;Chang Woo Ji;Won-Seok Kim;Dongsoo Kong
Korean Journal of Ecology and Environment
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v.55
no.4
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pp.352-359
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2022
Recently, with the development of genetic technology, interest in environmental DNA (eDNA) to study biodiversity according to molecular biological approaches is increasing. Environmental DNA has many advantages over traditional research methods for biological communities distributed in the environment but highly depends on the established base sequence database. This study conducted a comprehensive analysis of the habitat status and classification at the genus level, which is mainly used in eDNA (12S rRNA, 16S rRNA, 18S rRNA, COI, and CYTB), focusing on Korean registration taxon groups (phytoplankton, zooplankton, macroinvertebrates, and fish). As a result, phytoplankton and zooplankton showed the highest taxa proportion in 18S rRNA, and macroinvertebrates observed the highest ratio in the nucleotide sequence database in COI. In fish, all genes except 18S rRNA showed a high taxon ratio. Based on the Korean registration taxon group, the gene construction of the top 20 genera according to bio density observed that most of the phytoplankton were registered in 18S rRNA, and the most significant number of COI nucleotide sequences were established in macroinvertebrates. In addition, it was confirmed that there is a nucleotide sequence for the top 20 genera in 12S rRNA, 16S rRNA, and CYTB in fish. These results provided comprehensive information on the genes suitable for eDNA research for each taxon group.
The chromosome number was identified and fluorescence in situ hybridization(FISH) mapping of 5S and 45S rDNAs were conducted for C. minima and C. lanceolata in the genus Codonopsis from Jeju island. In this study, we have confirmed that the somatic metaphase chromosome number determined as 2n=2x=16 was the same as the findings from the previous studies. While the conventional staining method makes it rather difficult to distinguish satellite chromosomes due to high degree of variability, FISH analysis produced the exact number and location of 5S and 45S rDNAs. Both species in the genus Codonopsis have a pair of 5S rDNA and their gene loci were observed on chromosome 3. Although two pairs of 45S rDNAs (one on chromosome 1 and the other on chromosome 8) were identified in both species, the 45S rDNA signals on chromosome 8 in C. minima were significantly weaker than those on chromosome 1. In addition, the 45S rDNA signals on chromosome 1 in C. lanceolata showed that the chromosome is non-homologus. In this study, we have determined cytogenetic characteristics of C. minima and C. lanceolata according to their gene replication patterns.
Oxytricha multilineata, Mixophrya pantanalensis pantanalensis, and Caudiurostyla sinensis were isolated from soil samples collected from Cheongju-si and Yeoju-si, confirmed as new to South Korea. Oxytricha multilineata was distinguished from other congeners by seven dorsal kineties and dorsal bristles about 15 ㎛ long. Mixophrya pantanalensis pantanalensis was characterized by five to seven lithosomes and six dorsal kineties. Caudiurostyla sinensis was characterized by colorless cortical granules present, 10-14 midventral pairs, 7-9 left and 6-9 right marginal rows and four or five dorsal kineties. We determined the ribosomal DNA sequences (including 18S rDNA, ITS1, 5.8S rDNA, ITS2, and partial 28S rDNA) from above three species. And the genetic distances were compared with their congeners.
Jin Long Guo;Kim Myung Sook;Choi Jae Suk;Cho Ji Young;Jin Hyung Joo;Hong Yong Ki
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.35
no.6
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pp.633-638
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2002
Nuclear 18S ribosomal RNA gene (185 rDNA) from the aquaculturable seaweed Porphya yezoensis (Bangiales, Rhodophyta) was amplified using the polymerase chain reaction and its sequence was analysed. Complete 185 rDNA has an 1823 bp exon and a 514 bp intron. The G+ C contents of exon and intron were $48\%$ and $51.4\%$, respectively. The exon sequence showed $99.5\%$ homology to the GenBank accession number AB013177 of the Japanese p. yezoensis. The intron region that was inserted upstream between 568 and 1083 showed $93.4\%$ homology to the AB013177.
For the phylogenetic study of the genus Trichaptum, nuclear ribosomal DNA sequences from eight strains of four Trichaptium species were examined. Phylogenetic trees were constructed using molecular data on 18 rDNA and 5.8S rDNA and thei ITSs. Parsimony analyses of the Trichaptum species showed that T. biforme and T. laricinum made a monophyletic group respectively, suggesting that each species is phylogenetically independent. However, T. abietum represented a polyphyletic group and T. fusco-violaceum formed a polytomous group, suggesting that these species could be in the process of evolutionary differentiation. Examination of base substitutions of the 18S rRNA gene reveals that the C-T transition is most predominant and that there is a stronger transition bias between closely related organisms rather than between distantly related ones.
Seo, Han-Gill;Seo, Jung Soo;Ryu, Min Kyung;Lee, Eun Hye;Jung, Sung Hee;Han, Hyun-Ja
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.48
no.5
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pp.731-738
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2015
Nematode infection in the epithelial tissue of cultured rockfish Sebastes schlegeli was first reported in 2012. Since then, nematode infections have caused serious economic losses in rockfish aquaculture on the west coast of Korea. Taxonomic and life cycle information for this parasite are currently unknown. In this study, 18S rRNA and cytochrome c oxidase subunit I (COI) genes were used for molecular identification and polymerase chain reaction (PCR) to detect the invisible stages of this parasite. Nucleotide sequences of the 18S rRNA of the rockfish nematode showed 98% identity with that of Philometra morii. Therefore, this rockfish nematode was classified to the Philometridae family. However, we could not identify it to genus level using 18S rRNA. Its COI nucleotide sequences shared 85% and 82% identities with those of Bursaphelenchus sinensis and Philometra overstreeti, respectively. In addition, two gene-specific primer sets were designed based on the 18S rRNA gene to detect the intermediate host and nematode larvae. These primers were specific to this rockfish nematode without cross-reacting to other pathogens. The detection limit of the PCR assay using these primers was 1,000 copies of nematoda plasmid DNA. Therefore, the PCR assay described here is suitable for the detection of nematode DNA within rockfish. In addition, this PCR assay could be used to detect nematode larvae and the intermediate host.
Acanthamoeba is a free-living amoeba that causes human infections, and recently the incidence of amoebic keratitis has increased among contact lens wearers. In order to investigate Acanthamoeba contamination of contact lens storage cases, a short survey was performed on 57 contact lens wearers, and Acanthamoeba was found in one contact lens storage case. To diagnose Acanthamoeba, the 18s small subunit ribosomal DNA (18s rDNA) gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR), and subsequently, the isolate was identified as A. lugdunensis. This species was originally isolated from a freshwater pool in France, and was reported recently to be a cause of amoebic keratitis. This observation indicates the need for a large survey to investigate the extent of Acanthamoeba contamination, and suggests that contact lens wearers be aware of the importance of hygiene and of the implications of Acanthamoeba infection.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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