Partial mitochondrial 16S rDNA and COI gene were amplified using PCR and sequenced for four species of oysters in Korea. Phylogenetic relationships among them were inferred from their aligned sequences by neighbor-joining method. The sequence comparison data of two mitochondrial genes showed that the genetic distinction between two oyster genera (Crassostreo and Ostrea) was obvious. Phylogenetic analysis based on the nucleotide sequences and A+T percentage of two genes indicates that C. gigas and C. nippona strongly formed a sister group and then C. ariakensis was clustered with the clade although that based on amino acid sequences of COI gene by neighbor-joining method represented different phylogenetic tree.
Bacterial 16S rRNA gene sequences have been widely used for the studies on molecular phylogeny, evolutional history, and molecular detections. Bacterial genomes have multiple rRNA operons, of which gene sequences sometimes are variable. In the present study, heterogeneity of the Vibrio 16S rRNA gene sequences were investigated. Vibrio 16S rRNA sequences were obtained from GenBank databases, considering the completion of gene annotation of Vibrio genome sequences. These included V. cholerae, V. harveyi, V. parahaemolyticus, V. splendidus, and V. vulnificus. Chromosome 1 of the studied Vibrio had 7~10 copies of the 16S rRNA gene, and their intragenomic variations were less than 0.9% dissimilarity (more than 99.1% DNA similarity). Chromosome 2 had none or single 16S rRNA gene. Intragenomic 16S rRNA genotypes were detected at least 5 types (V. vulnificus #CMCP6) to 8 types (V. parahaemolyticus #RIMD 2210633, V. harveyi #ATCC BAA-1116). These suggest that Vibrio has high heterogeneity of the 16S rRNA gene sequences.
Phylogenetic relationships and DNA polymorphism among local populations of two Korean gobiidae species: Boleophthalmus pectinirostris and Scartelaos gigas were investigated based on 12S and 16S mitochondrial DNA and mitochondrial cytochrome b DNA sequences. DNA polymorphisms of B. pectinirostris between Suncheon and Gunsan populations were 100% identity from 434 bp segment of 12S rRNA gene and from 444 bp segment of mitochondrial cytochrome b genes, and 99.6% (2 bp different) identity from 484 bp segments of 16S rRNA genes. These results indicated the long period of geographic isolation between two populations of B. pectinirostris in Korea caused such high degrees of DNA polymorphisms. Based on the phylogenetic tree constructed from the two gobiid species in Korea, two genetically distinct groups of B. pectinirostris and S. gigas groups were recognized.
Bacteria causing fermentation in Oriental melon were identified as three independent groups on the basis of 16S rDNA sequence analysis. The 16S rDNA sequence of the strain CM2105 showed the highest identity (99.6%) with that of Microbacterium phyllosphaerae, and also indicated high sequence identity to that of M. holiorum (99.5%). The 16S rDNA sequences of the strain CM2101 and CM2121 matched at the high sequence similarity (98.9%, 98.8, respectively), to that of Pseudomonas pavonacea, and the DNA sequence of CM2126 showed high sequence identity to that of P. costantinii (99.5%), and P. grimontii (99.0%). The 16S rDNA sequence of the strain CM2113 showed the highest identity (99.7%) with that of Enterobacter cloacae. The 16S rDNA sequences, the physiological and biochemical analysis suggested that the strain CM2105 belonged to Microbacterium phyllosphaerae, CM2101, CM2121 and CM2126 to Pseudomonas spp., CM2113 to Enterobacter cloacae.
An effective computer program for assembling fragments in DNA sequencing has been developed. The program, called SeqEditor (Sequence Editor), is usable on the pcrsonal computer systems of MS-Widows which is the mosl popular operating system in Korea. It c'm recd several sequence file formats such as GenBak, FASTA, and ASCII. In the SeqEditor program, a dynamic programming algorihm is applied to compute the maximalscoring overlapping alignment between each pjlr of fragments. A novel feature of the program is that SeqEdilor implemnents interaclive operation with a graphical user interface. The performance lests of the prograln 011 fragmen1 data from 16s and 18s rDNA sequencing pi-ojects produced saiisIactory results. This program may be useful to a person who has work of time with large-scale DNA sequencing projects.
Culture-independent 16S rDNA-DGGE profiling and phylogenetic analysis were used to examine the predominant bacterial communities associated with the two sponges, Dictyonella sp. and Spirastrella abata from Jeju island. The culture-independent approach involved extraction of total bacterial DNA, PCR amplification of the 16S ribosomal DNA using primer pair 341f-GC and 518r, and separation of the amplicons on a denaturing gradient gel. Denaturing gradient gel electrophoresis banding patterns indicated 8 and 7 bands from the two sponge species, Dictyonella sp. and Spirastrella abata, respectively. There were not common major bands in two different sponges. Comparative sequence analysis of variable DGGE bands revealed from 93% to 98% similarity to the known published sequences. The dominant bacterial group of Dictyonella sp. belonged to uncultured Gammaproteobacteria, while, that of Spirastrella abata belonged to uncultured Alphaproeobacteria and Firmicutes. DGGE analysis indicated predominant communities of the sponge-associated bacteria differ in the two sponges from the same geographical location. This result revealed that bacterial community profiles of the sponges were host species-specific.
Culture-dependent RFLP and culture-independent DGGE were employed to investigate the bacterial community associated with the marine sponge Spirastrella abata. A total of 164 bacterial strains associated with the sponge were cultivated using Zobell and Natural sea salt media. PCR amplicons of the 16S rDNA from the bacterial strains were digested with the restriction enzymes HaeIII and MspI, and then assigned into different groups according to their restriction patterns. The 16S rDNA sequences derived from RFLP patterns showed more than 95% similarities compared with known bacterial species, and the isolates belonged to four phyla, Proteobacteria (Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria), Actinobacteria, Firmicutes, and Bacteriodetes, of which Alphaproteobacteria was dominant. DGGE fingerprinting of 16S rDNAs amplified from the sponge- derived total gDNA showed five major DGGE bands, and their sequences showed more than 96% similarities compared with available sequences. The sequences derived from DGGE bands revealed high similarity with the uncultured bacterial clones. DGGE revealed that bacterial community consisted of four phyla, including Proteobacteria (Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria), Actinobacteria, Spirochetes, and Chloroflexi. Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, and Actinobacteria were commonly found in bacteria associated with S. abata by both RFLP and DGGE methods; however, overall bacterial community in the sponge differed depending on the analysis methods.
Culture-dependent RFLP and culture-independent DGGE were employed to investigate the bacterial community associated with the marine sponge Asteropus simplex collected from Jeju Island. A total of 120 bacterial strains associated with the sponge were cultivated using modified Zobell and MA media. PCR amplicons of the 16S rDNA from the bacterial strains were digested with the restriction enzymes HaeIII and MspI, and then assigned into different groups according to their restriction patterns. The 16S rDNA sequences derived from RFLP patterns showed more than 94% similarities compared with known bacterial species, and the isolates belonged to five phyla, Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria Actinobacteria, Bacteroidetes, and Firmicutes, of which Gammaproteobacteria was dominant. DGGE fingerprinting of 16S rDNAs amplified from the sponge-derived total gDNA showed 12 DGGE bands, and their sequences showed more than 90% similarities compared with available sequences. The sequences derived from DGGE bands revealed high similarity with the uncultured bacterial clones. DGGE revealed that bacterial community consisted of seven phyla, including Alphaproteobacteria, Betaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Deltaproteobacteria, Actinobacteira, Chloroflexi, and Nitrospira. Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, and Actinobacteria were commonly found in bacteria associated with A. simplex by both RFLP and DGGE methods, however, overall bacterial community in the sponge differed depending on the analysis methods. Sponge showed more various bacterial community structures in culture-independent method than in culture-dependent method.
In order to investigate the diversity of bacterial community in the mud flat of Sunchon Bay, Chunnam province, diversity of amplified 16S rDNA was examined. Total DNA was extracted from sediment soils and 16S rDNAs were amplified using PCR primers based on the universally conserved sequences in bacteria. Clonal libraries were constructed and 111 clones were examined by amplified rDNA restriction analysis (ARDRA) using HaeIII. Clones were clustered based on restriction patterns using computer program, GelCompar II. One hundred different RFLP types were detected from 111 clones. The 20 clones were selected and sequenced according to dendrograms derived from ARDRA, to cover most of the bacterial diversity in the clone libraries. None of the clones were identical to any representatives in the Ribosomal Database Project small subunit RNA databases and GenBank. All sequences showed between 77 and 96.8% similarity to the known 16s rRNA sequence from cultured organisms. The 20 clones sequenced fell into seven major lineages of the domain Bacteria: alpha-, delta-, gamma-Proteobacteria, low G+C Gram positive bacteria, high G+C Gram positive bacteria, Sphingobacteria (Cytophaga) and Cyanobacteria (chloroplast). Among the clones, the Proteobacteria were dominant.
The 16S rDNA sequences of nine strains, two type strains of validated Microbispora species and a strain of invalidated Microbispora species, and six soil isolates, were determined and compared with those of representatives of the family Streptosporangiaceae. The phylogenetic analysis indicated that all of the validated species of the genus Microbispora consistently formed a monophyletic unit and were well separated from the other genera of the family Streptosporangiaceae. All the isolates were placed to the genus Microbispora, whereas an invalidated Microbispora species, Microbispora griseoalba IMSNU $22049^{T}$ (= KCTC $9314^{T}$), was closely related to members of the genus Nocardia.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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