Recombinant interferon alpha-2a is an active formula for the treatment of various cancer cells like malignant melanoma and a variety of virus infection diseases like acute or chronic hepatitis. The bioassay system based on the measurement of virus inhibitory activity by interferon has been used for interferon analysis with low repeatability. Here, we developed the HPLC assay to measure reproducibly interferon alpha-2a protein content which is replaceable to the reported bioassay. This method separated interferon alpha-2a from its oxidized forms and human serum albumin used as excipients. The regression coefficient using interferon alpha-2a EP CRS is more than 0.9 in the range from 5 ${\mu}g/ml$ to 200 ${\mu}g/ml$. The recovery result in the range from 15 ${\mu}g/ml$ to 60 ${\mu}g/ml$ is $97{\sim}104%$ and the precision is $0.2{\sim}1.7%$. The interferon alpha contents of 5 products are about 30 ${\mu}g/ml$.
Objective : Interferon-alpha and Rivabirin are much used at the same time to treat Chronical C viral hepatitis. But interferon caused lots of unexpected side effects, Acupuncture Treatment for them will be an alternative plan. Methods : We first posed questions to a 4 year-old man who ha skin flare, fatigue, itching, insomnia, pronounced a diagnosis based on overall of symptoms and signs and then treated Acupuncture, Moxibustion and Electroacupuncture. We acupunctured a BL17, BL18, BL20 and removed it at once. We electroacupunctured at GV20, Yin tang(Ex-HN3) form 20 minutes, acupunctured at Bi yi(鼻翼, Extra-point), S36, P6. Pizhengge(脾定格) was acupunctured for 10 minutes. Results : The symptoms of fatigue, insomnia, itching are reduced after acupuncture treatments and they made a person keep interferon treatment on. Conclusions : We confirmed that acupuncture treatments make a patient of chronic C viral hepatitis reduce and improve side effects of interferon treatment. We should keep on studying the various and efficient method of acupuncture treatment to improve living quality and treatment efficiency of patients.
We attempted to modulate the overall protein expression rate through the addition of a repressor against the araBAD promoter system of Escherichia coli, in which glucose was used as a repressor. Therefore, 0.5% L-arabinose was initially contained as an inducer in culture medium, and either 2% glucose or 2% glycerol was used as a carbon source, and it was found that the expression of recombinant interferon-${\alpha}$ could be observed at the beginning of the batch culture when glycerol was used as a carbon source. However, when glucose was used, the initiation of recombinant interferon-${\alpha}$ expression was delayed compared with that when glycerol was used. Furthermore, when the addition of 0.5% glucose was carried out once or twice after 0.5% L-arabinose induction during DO-stat fed-batch culture, the distributions of soluble and insoluble recombinant interferon-${\alpha}$ were modulated. When glucose was not added after the induction of L-arabinose, all of the expressed recombinant interferon-${\alpha}$ formed an inclusion body during the later half of culturing. However, when glucose was added after induction, the expressed recombinant interferon-${\alpha}$ did not all form an inclusion body, and about half of the total recombinant interferon-${\alpha}$ was expressed in a soluble form. It was deduced that the addition of glucose after the induction of L-arabinose might lower the cAMP level, and thus, CAP (catabolite activator protein) might not be activated. The transcription rate of recombinant interferon-${\alpha}$ in the araBAD promoter system might be delayed by the partial repression. This inhibition of the transcription rate probably resulted in more soluble interferon-${\alpha}$ expression caused by the reduction of the protein synthesis rate.
목 적: 인터페론은 소아 만성 B형 간염의 치료에 널리 쓰이고 있으나 50% 이상의 환자에서 인터페론 치료에 반응이 없어 추가적인 다른 치료가 필요하다. 라미부딘은 B형 간염 바이러스 복제의 억제제로 B형 간염 치료제로 널리 쓰이고 있으나, 인터페론 치료에 반응이 없었던 B형 간염 환자에 대한 라미부딘의 치료 효과에 대한 연구가 많지 않다. 방 법: 2000년 1월부터 2007년 12월까지 부산대학교병원 소아청소년과에서 만성 B형 간염으로 진단되어 인터페론(interferon ${\alpha}$-2b, 10 $MU/m^2$ 또는 pegylated interferon $1.5{\mu}g/kg$)으로 6개월 간 치료를 받은 33명 중 치료에 반응이 없어 치료 종결 후 6~12개월 뒤부터 라미부딘(3 mg/kg/일, 최고 100 mg/일)으로 치료를 한 8명(남 6명, 여 2명)을 대상으로 라미부딘의 치료 효과를 분석하였다. 임상적 소견에 대해 의무기록지를 후향적으로 검토하였다. 결 과: 인터페론 치료 시작 시 나이는 4.9${\pm}$3.1세, 라미부딘 치료 시작 시 나이는 6.1${\pm}$3.2세였다. 인터페론 치료 전 혈청 ALT는 148.1${\pm}$105.8 IU/L였고, HBV-DNA PCR log값은 6.95${\pm}$0.70 copies/mL였다. 인터페론 치료 후 ALT는 143.1${\pm}$90.4 IU/L였고, DNA PCR log값은 6.46${\pm}$2.08 copies/mL로 치료 전과 차이가 없었고(p> 0.05), 2명에서 HBeAg 음전이 있었다. 모든 환자에서 라미부딘 치료 후 7.4${\pm}$2.1개월에 ALT가 정상화되고, 이미 HBeAg이 음전된 2명을 제외한 6명에서 7.9${\pm}$2.1개월에 HBeAg 혈청전환이 있었다. HBV DNA는 2.4${\pm}$2.8개월에 7명(87.5%)에서 음성화되었다. 2명은 라미부딘치료 종결 후 3년 이상 재발이 없으며, 5명은 완전 반응상태로 24.4${\pm}$9.1개월간 복용 중이다. 1명은 12개월간 라미부딘을 복용하여 혈청 ALT가 정상화되고 HBeAg 혈청전환이 있었으나 바이러스 돌파현상이 발생하여 치료를 중단하였다. 결 론: 연구 대상 환자 수가 적었지만 인터페론 치료에 반응이 없었던 만성 B형 간염 환자에서 라미부딘의 치료는 매우 효과적이었다.
This report describes a high-level expression of human alpha-2a interferon ($IFN{\alpha}-2a$) in Escherichia coli and its pilot scale purification by using a monoclonal antibody-independent chromatographic procedure that is based on anion-exchange, cation-exchange, hydrophobic interaction, and gel filtration. The recombinant E. coli produced much more $IFN{\alpha}-2a$ in a soluble form, when cultivated at low temperatures than at high-temperature fermentation. However, if the bacterial growth was taken into consideration, fermentation at $30^{\circ}C$ seemed optimal for the interferon production. By using our new protocol, we recovered approximately 160 mg of $IFN{\alpha}-2a$ with a specific activity of $3.59{\times}10^8$ IU/mg from 201 of the broth. The gel permeation chromatographic and SDS-PAGE indicated that the interferon preparation was purified to homogeneity and was of the correctly folded fast-migrating monomer.
Interferons regulate a number of biological functions including control of cell proliferation, generation of antiviral activities and immumodulation in human cells. Studies by several investigators have identified a number of cellular signaling cascades that are activated during engagement of interferon receptors. The activation of multiple signaling cascades by the interferon receptors appears to be critical for the generation of interferon mediated biological functions and immune surveillance. The present review summarizes the existing knowledge on the multiple signaling cascades activated by Type I interferons. Recent developments in this research area are emphasized and the implications of these new discoveries on our understanding of interferon actions are discussed.
Macrtophages play an important role in defense against virus infection by intrinsic resistance and by extrinsic resistance. Since interferon-induced enzymes which are 2'-5' oligoadenylate synthetase and p1/eIF-2 protein kinase have been shown to be involved in the inhibition of viral replication, I examined the mechanism by which poly I:C, an interferon inducer, exerts its antiviral effects in inflammatory macrophages infected with herpes simplex virus type 1 (HSV-1). The data presented here demonstrate that poly I:C-induced antiviral activity is partially due to the activation of 2'-5' pligoadenylate synthetase. The activation of 2'-5' oligoadenlate A synthetase by poly I:C is also at least mediated via the production of interferon-.betha.. Taken together, these data indicate that interferon-.betha. produced in response to poly I:C acts in an autocrine manner to activate the 2'-5' oligoadenylate synthetase and to induce resistance to HSV-1.
Seo, Jin-Won;Yang, Eun-Jeong;Kim, Se Hoon;Choi, In-Hong
BMB Reports
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제48권12호
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pp.696-701
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2015
Toll-like receptor 3 (TLR3) recognizes viral double-stranded RNA. It stimulates pro-inflammatory cytokine and interferon production. Here we reported the expression of a novel isoform of TLR3 in human astrocyte cell lines whose message is generated by alternative splicing. The isoform represents the N-terminus of the protein. It lacks many of the leucine-rich repeat domains, the transmembrane domain, and the intracellular Toll/interleukin-1 receptor domain of TLR3. Type I interferons (interferon-α and interferon-β) induced the expression of this isoform. Exogenous overexpression of this isoform inhibited interferon regulatory factor 3, signal transducers and activators of transcription 1, and Inhibitor of kappa B α signaling following stimulation. This isoform of TLR3 also inhibited the production of chemokine interferon-γ-inducible protein 10. Our study clearly demonstrated that the expression of this isoform of TLR3 was a negative regulator of signaling pathways and that it was inducible by type I interferons. We also found that this isoform could modulate inflammation in the brain.
Hepatitis C virus (HCV) is known as the causative agent of blood transmitted hepatitis. Two viral proteins, E2 and NS5A, are known to exert interferon resistance of HCV via PKR pathway. Here, we report a third protein, the RNA-dependent RNA polymerase (NS5B) of HCV, induced interferon resistance inhibiting p56 pathway. p56 was shown to interact with p48 subunit of eukaryotic initiation factor 3 (eIF3). This interaction inhibited formation of ternary complex in translation initiation. Using dual reporter assay system, we observed that the translation decreased when interferon alpha was added to the culture. But, in the presence of HCV NS5B, the translation partly recovered. NS5B and p48 subunit of eIF3 were shown to interact. This interaction seems to inhibit the interaction between p48 and p56. This is the first report that a virus exerts interferon resistance via p56 pathway.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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