• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권1호
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• pp.18-24
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• 2001

누에 핵다각체병 바이러스의 gp64 프로모터를 이용한 transient 발현 벡터를 제작하기 위해서 gp64 유전자의 구조를 분석하였다. Southern blotting 분석을 통해 genome DNA에서 gp64 유전자를 탐색하기 gp64 구조유전자를 포함하는 2,277 nucleotide의 염기를 분석하였으며 gp64의 early, late 프로모터 발현을 조절하는 인자들을 확인하였다. gp64프로모터를 이용한 transient 발현 벡터를 제작하고 외래유전자로써 lacZ 유전자를 Bm5 세포주에서 transient 발현시켰다. 세포주 내에 도입된 플라스미드 DNA의 안정성을 확인하였으며, gp64 프로모터의 외래유전자 발현성 여부를 조사하기 위하여 gp64 프로모터 하에 laxZ 유전자를 가지는 재조합 바이러스를 제작하고 $\beta$-galactosidase in 냐셔 staining을 수행한 결과 전체적인 발현량은 매우 약한 것으로 판단되었다. BmNPV-K1의 gp64 프로모터를 이용한 벡터는 더욱 민감한 표지 유전자를 발현시켜 재조합 바이러스의 분리에 이용하거나 숙주세포에 독성을 보이는 유전자 산물의 소량 발현에 더욱 유용할 것으로 판단된다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제33권1호
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• pp.21-26
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• 1991

Bm 배양세포주(BmN4)에서 BmNPV의 다각체 단백질 합성과 DNA복제에 대한 실험결과는 다음과 같다. 1. BmNPV는 insect Grace's medium에서 배양되고 있는 BmN4 세포에서 NOV나 DNA로 감염시킨 경우 모두 잘 증식되었으며, 도립현미경 관찰 결과 접종 후 48시간이 경과하면서 다각체가 형성되기 시작하였다. 2. 또한 전자현미경으로 핵내 형성된 다각체와 협성중인 nucleocapsid 다발을 관찰하였으며, 바이러스 입자는 SNPV로 존재하였다. 3. Western blot분속에 의한 다각체 단백질의 합성은 접종 후 18시간부터 관찰되었으며, 다각체 단백질의 분자량은 30kd이었다. 4. Wild type BmNPV DNA와 Bm 세포(BmN4)에서 NOV 및 DNA 감염에 의해 형성된 바이러스 DNA간의 제한효소 패턴은 차이가 없었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제39권1호
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• pp.30-35
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• 1997

A rapid and sensitive detection of BmNPV contamination in silkworm rearing room was carried by Plymerase chain reaction(PCR). Silkworm nuclear polyhedra were dissolved for the extraction of viral DNA within 30 minutes followed by the treatment of alkaline solution. The combination of primers of NP3 and NP2 was superior in PCR to the other 7 primers applied. Each primer was designed with 20 base in size and Newly designed NP3 of sense and the already reported NP2 for antisense were better in reaction than other primers. PCR products appeared 500bp in size. And annealing was confirmed proper at 55$^{\circ}C$ condition. Amplifiable template DNA amount was confirmed at least 100 ng to 0.1 ng and regarded as applicative for the assay of silkworm rearing environmental condition of sericultural farm. In case of the detection of BmNPV from the dust, sensitivity by PCR was as high as 1,000,000 times than that of microscopic observation.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제32권1호
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• pp.49-57
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• 1990

가잠 다각체병 바이러스의 감염경로를 연구하기 위해서 2령 기잠에 바이러스를 접종하고 6, 12, 24, 48시간의 감염조직을 전자현미경 관찰한 결과는 다음과 같다. 1. 다각체단백질이 중장소화액에 의해 용해되어져 바이러스입자가 유리되고 섬모융모표면에서 부터 흡착되는 것이 관찰되었다. 2. 다각체 접종 후 24시간에 이미 중장원통세포핵에 현저한 증식상을 보였으며 중장피막세포 간극에서 envelope을 획득한 바이러스입자가 관찰되었다. 3. 기저막 가까이 있는 원통세포의 세포질에서 envelope을 획득한 바이러스입자들이 다수 관찰되었으며, envelope을 가지고 있지 않은 바이러스는 관찰되지 않았다. 기저막을 통과한 바이러스입자는 체강쪽으로 이행되어져 혈구세포에 집적되고 있다. 4. 접종후 48시간에 중장피막 가까이에 분포하고 있는 혈구세포 및 기관피막세포핵에서 NPV의 전형적인 증식상이 관찰되었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제37권1호
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• pp.52-56
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• 1995

Baculovirus 발현계에서 BmNPV의 증식효율을 향상시키기 위하여, 누에 유충 체액의 BmN-4 세포주에서 BmNPV 증식에 미치는 영향을 조사하였다. 5령 3일째의 누에 유충으로 부터 체액을 추출하여 BmN-4 배양액에 첨가한 결과, 열처리하지 않은 누에 체액의 첨가는 세포의 응집과 소형화 현상으로 인해 세포의 증식을 저해한 반면, $65^{\circ}C$에서 30분간 열처리한 체액 10%와 FBS 3%를 세포배양액에 첨가한 것이 바이러스 감염에 의해 방출된 다각체의 수가 가장 많은 것으로 나타나 바이러스 증식에 가장 효과적이었다. 또한 plaque assay 결과, 체액의 첨가에 의한 바이러스 증식효율의 증가는 세포의 증식에 의한 것이라기보다 바이러스 감염성의 증가에 기인하는 것으로 보여진다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제40권2호
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• pp.105-110
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• 1998

The baculovirus egt gene encodes an ecdysteroid UDP-glucosyltransferase(EGT) which catalyzes the transfer of glucose from UDP-glucose to the insect moltion hormone ecdysteroid resulting in a functionally inactive ecdysteroid. In baculovirus-infected insect larvae, EGT has been shown block molting and pupation. In this study, we compared the development of 4th and 5th instar silkworm, Bombyx mori, larvae injected with either wild-type bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) or a mutant BmNPV(BmEGTZ) in which the egt gene was disrupted by the insertion of a lacZ gene cassette. Larvae injected with BmEGTZ died roughly 12 h more rapidly compared to indentical larvae infected with BmNPV. In addition, BmEGTZ- infected larvae prematurely stopped feeding and gain less weight compared to BmNPV-infected larvae. In order to investigate why BmEGTZ-infected larvae died more rapidly than BmNPV-infected larvae, the array of hemolymph proteins in BmEGTZ-or BmNPV-infected larvae were analyzed by SDS-PAGE. The hemolymph of BmEGTZ-infected larvae showed virus-specific proteins, including polyhedrin, about 12 h earlier than the hemolymph of BmNPV-infected larvae

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권2호
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• pp.161-166
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• 1998

AcNPV에 대해 감수성을 보이는 파밤나방 세포주인 Se301 세포주의 AcNPV를 이용한 발현 벡터계에서의 유용성을 알아보기 위하여 Se301세포주에서 AcNPV의 감염 특성을 Sf-21 세포주에서와 비교하였다. 그 결과, 바이러스의 감염상은 두 세포주에서 거의 유사하였으나 감염 7일 후에 세포로부터 방출된 다각체의 비율은 Se301 세포주에서 훨씬 높았다. 또한 전체 다각체 생성율은 Se301 세포주에서 약간 높았지만 그 차이는 매우 근소하여 대체적으로 두 세포주에서 거의 비슷하였으나 생성된 다각체의 크기는 Se301세포주에서 더욱 컸다. 한편, 세포주나 바이러스의 증식율과는 무관하게 AcNPV에 의한 다각체 단백질의 발현량이 Se301 세포주에서 약 2.4배 높게 나타남으로써 Se301 세포주가 AcNPV를 이용한 발현 벡터계에서 숙주 세포로서 매우 유용하게 이용될 수 있음을 보여 주었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제38권1호
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• pp.36-41
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• 1996

AcNPV 와 BmNPV의 배양세포주에서의 동시감염에 의해 선발된 재조합 바이러스 RecS-A6는 그 다각체 외부 형태가 모바이러스와 다를뿐만 아니라 배양 세포주에 따라서도 그 형태에 차이가 있었다. 이러한 다각체의 특징적인 형태가 나타나는 요인을 다각체 단백질 유전자를 중심으로 조사한 결과 RecS-A6는 AcNPV 와 BmNPV의 다각체 단백질 유전자를 모두 갖고 있는 것이 확인되었으며, 또한 RecS-A6의 다각체를 단백질 전기영동하여 분석한 결과 RecS-A6의 다각체를 단백질 전기영동하여 분석한 결과 AcNPV와 BmNPV의 다각체 단백질이 모두 다각체 형성에 이용되었음을 확인할 수 있었다.

• 대한바이러스학회지
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• 제29권2호
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• pp.137-144
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• 1999

Transformation efficiency, virus multiplication and foreign gene expression were characterized in the insect cells transformed with Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) immediate early 1 gene (IE1). Transformation efficiency of insect cells by AcNPV IE1 gene vector horboring foreign gene was approximately 8-fold higher in the Sf9 cells transformed previously with AcNPV IE1 gene than in the normal Sf9 cells. Virus multiplication and foreign gene expression of recombinant baculovirus in the Sf9 cells transformed with AcNPV IE1 gene were similar to those of the normal Sf9 cells. These results suggest that transformed cells displaying foreign gene product by using AcNPV IE1 gene promoter will be useful for the diverse applications of insect cells.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제38권1호
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• pp.42-47
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• 1996

AcNPV와 BmNPV를 배양세포주에서 동시감염시켜 선발한 숙주범위가 넓어진 재조합 바이러스인 RecB-727과 RecS-A6의 분자생물학적인 특성들을 조사하였다. 재조합 바이러스의 LT50 값을 조사한 결과, RecS-A6는 모바이러스인 BmNPV 보다 비교적 낮은 병원성을 보았으나 RecB-727은 거의 비슷한 수준의 높은 병원성을 나타내었다. 재조합 바이러스 DNA를 분리하여 모바이러스 DNA와 함께 제한효소 패턴을 비교한 결과 DNA 수준에서 재조합이 일어났음을 확인할 수 있었으며, 일부 유전자의 재조합을 예측할 수 있었다. 또한 p10 유전자에 대한 Southern blot 분석 결과 RecB-727의 p10 유전자는 AcNPV에서 유래되었으며, RecS-A6는 BmNPV의 p10 유전자를 갖고 있는 것으로 추정된다. 재조합 바이러스의 숙주범위 확장에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 DNA helicase 유전자 내의 HindIII-SacI 0.6kb 부위에 대하여 약 250 bp의 염기서열을 조사한 결과, 이 부위의 염기서열은 BmNPV helicase의 염기서열과 동일하였다.