Antimicrobial peptides are evolutionary ancient weapons for animal and plant species to depend themselves against infectious microbes. In the present study, we investigated if an antimicrobial peptide was produced from Coptidis Rhizoma. For the determination, protein substance from the medicinal plant was isolated by various preparations. Among the preparations, the protein portion dissolved in phosphate-buffered saline solution (CRP-DS) that contained the most amount of protein $(90\%)$ resulted in maximal inhibition of Candida albicans which causes local and systemic infections. Analyses by gel-electrophoresis and gel-permeation chromatography showed the CRP-DS formed a single band of approximately 11.8 KDa as molecular size. Antifungal activity of the CRP-DS was almost equivalent to antifungal activity by fluconazole, resulting in MIC (minimal inhibitory concentration) of approximately $50{\mu}g/ml$. The antifungal activity was a dose-dependent. The antifungal activity appeared to be inactivated by heat-treatment and ionic strength, respectively. In a murine model, the CRP-DS enhanced resistance of mice against disseminated candidiasis. The HPLC analysis demonstrated maximum $4\%$ of berberine as residual content in the CRP-DS preparation resulted in no influence on the antifungal activity. In addition, protein portion isolated from Phellodendri Cortex producing the alkaloid component like Coptidis Rhizoma had no such anticandidal effect. These results indicate that the protein substance from Coptidis Rhizoma was responsible for the antifungal activity.
본 연구에서는 뽕잎을 물과 에탄올로 추출하여 얻은 뽕잎추출물을 이용하여 특성을 분석하고 구강미생물에 대한 항균 및 항 진균효과를 검색하여 다음과 같은 실험결과를 얻었다. 뽕잎을 차로 마실 경우 물의 온도가 $81^{\circ}C$ 부근에서 뽕잎의 구성 성분이 물속에 용해되어 나오는 것으로 나타났다. 추출에 사용된 용매에 따라 추출된 성분 물질의 차이를 확인하기 위하여 적외선(IR) 분광분석을 실시하여 2000에서 $4500cm^{-1}$의 범위에서 에탄올과 물로 추출한 물질의 경우 흡수 피크(peak)의 강도에서는 차이를 보이기는 하지만 전체적인 추출물질의 성분에는 큰 차이가 발생하지 않는 것을 알 수 있었다. 용매에 따른 추출물질의 양은 물로 추출한 경우에 비하여 에탄올로 추출한 경우가 좀 더 많은 양의 물질이 추출되어진다는 것을 IR 특성을 통하여 확인할 수 있었다. 뽕잎의 물과 에탄올에 의한 추출물에서는 S. mutans JC-2에 대한 항균활성이 나타나지 않았으나 S. epidermis ATCC 12228와 S. aureus ATCC 29213에서 최소억제농도가 $3,200{\mu}g/ml$으로 미약하게 항균효과가 나타났다. 또한, C. albicans KCTC 1940은 $1,600{\mu}g/ml$로 항진균효과를 관찰할 수 있었다. 이와같이 뽕잎 추출물은 구강미생물에 대하여 미약하지만 항균활성을 가지고 있음을 확인 할 수 있었다.
천연의 붉은 색소인 prodigiosin은 Serratia marcescens에 의해서 생산되며 이는 pyrrolylpyrromethane 골격으로 구성되어 있다. 이 색소는 그 분자가 가진 특성 때문에 넓은 범위에서 활용되고 있다. 또한 항암제, 면역억제제, 항진균제, 살조제 등 다양한 분야의 효과가 보고되소 있다. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)는 세계적으로 가장 주요한 원내 감염균으로써, 미국에서 해마다 HIV로 사망하는 수보다 더 많은 사망률을 보이고 있다. 그러므로 MRSA에 대한 새로운 치료제의 개발이 매우 중요하며 급박한 문제이다. 본 연구에서는 중증오염도를 가진 하천수로부터 Serratia sp. PDGS 120915를 분리하였으며 항 MRSA 활성을 가진 prodigiosin에 대하여 연구하였다. 본 연구를 위하여 HPLC를 이용하여 물질을 정제하였으며, 분리된 물질의 항 MRSA 활성을 확인하였다. Prodigiosin의 MRSA에 대한 최소억제농도(Minimal inhibitory concentration; MIC)는 $32{\mu}g/ml$이었으며, 분할저해농도(Fractional inhibitory concentration; FIC)는 ampicillin과 penicillin에서 상승작용이 있는 것으로 나타났다.
A252 균주의 항균성물질의 생성 및 균주의 배양적 특성을 조사한 결과 균체의 생장은 TSB와 malt extract-yeast extract (ISP-2) 배양기가 좋았으며, 배양여액의 항균활성은 TSB와 nutrient broth에서 효과적이였다. TSB 배지에서 균사생장 및 배양여액의 항균활성은 $25^{\circ}C$와 pH 6.5에서 최적화 되었으며, 2$\%$ TSB 농도에서는 1$\%$에 비해 생장은 좋았으나 배양여액의 항균활성에는 차이가 없었다. A252 균주의 균사 생장은 접종 72시간 후에 최대치에 달하였으며 반면 배양액의 항균력은 접종 60시간 후인 idiophase에 가장 높은 수준을 보였지만 96시간 후에는 약간 감소하는 경향을 나타냈다. 배양여액의 항균활성은 $121^{\circ}C$ 고온에서도 안정하였으며, pH에 대한 안정성은 4.0 - 9.0의 범위였다. A252 균주의 생리적 특성 및 분생자경의 형태 등을 관찰한 결과 Streptomyces sp.로 동정되었다.
Serratia marcescens의 동정(同定)을 분리배지(分離培地)를 이용(利用)하여 간편(簡便)한 방법(方法)으로 시도하였던 바 prodigiosin 산생(産生)은 proline을 위시해서 각종(各種) amino acid, thiamine 및 nicotinic acid에 의해서 항진되지 않았으나 혈액평판배지(血液平板培地)에서 본(本) 균종(菌腫)은 시간(時間)의 경과(經過)에 따라 흑색조(黑色調)를 띤 집락(集落)을 형성(形成)하며 이는 일차적(一次的)인 분리기준(分離基準)으로 이용(利用)될 수 있을 것 같다. Tween 80 및 대두유(大豆油) 분해성(分解性은) 본(本) 균(菌)에서 양성(陽性)이며 동정(同定)에 이용(利用)될 수 있으나 특이반응(特異反應)이 아니다. 그러므로 마지막으로 oxidase 반응(反應), lactose 및 sucrose 발효시험이 본(本) 균종(菌腫)의 확정(確定)에 수반되어야 한다.
The purpose of this thesis is to dedicate to get the objectivity of herbal medicine treatments by choosing herbs likely to work as antifungal agents against Candida albicans which is the causes of Candida vaginitis, making experiments on them and getting the significant results. Each herb's efficacy on control the number of Candida vaginitis is noticed by using Disk Susceptibility test with six herbs medicine and Broth dilution assay of the culture. Cinamon Ramulus, Pulsatillae Radix, Dictamni Radicis Cortex, Paeoniae Radix, Arecae Semen, Artemisiae Capillaries Herba extracts experimented on the efficiency of antifungal activities against Candida albicans by disk susceptibility test. Pulsatillae Radix has the strongest efficiency. In Dictamni Radicis Cortex never appeared antifungal effect on treatment. MIC (minimal inhibition concentration) in vitro antifungal agents of Cinamon Ramulus, Pulsatillae Radix, Paeoniae Radix, Artemisiae Capillaries Herba extracts against Candida albicans was determined by broth dilution assay. MIC against Candida albicans is that Pulsatillae Radix is 2.5 mg/ml and Cinamon Ramulus is 5 mg/ml and Paeoniae Radix is 10 mg/ml and Artemisiae Capillaries Herba is 40 mg/ml.
6-(3,4-Dichlorophenyl)amino-7-chloro-5,8-quinolinedione (RCK50) was tested for antifungal activities in mice systemically infected with Candida albicans. The therapeutic potential of RCK50 was also assessed in comparison with ketoconazole. CK50 had $ED_{50}$ 0.22${\pm}$0.01mg/kg. Ketoconazole as a positive control had $ED_{50}$ 6.00${\pm}$1.70mg/kg. Intraperitoneally administered RCK50 at the $ED_{50}$ for 7 days and 14 days reduced Candida albicans colony count in the kidneys and liver. And administered RCK50 at the $ED_{50}$ for 14 days improved survival rates. The genotoxicities of RCK50 had been evaluated. RCK50 was negative in Ames test with Salmonella typhimurium and chromosomal aberration test in CHL cells. RCK50 did not show any clastogenic effect in mouse peripheral blood and was negative in mouse micronucleus assay. These results indicate that RCK50 has no genotoxic potential under these experimental conditions. Acute oral toxicity studies of RCK50 were carried out in ICR mice of both sexes. RCK50 did not show acute oral toxicities and $LD_{50}$ values were over 2,850mg/kg in ICR mice.
위생환경이 좋지 못하고 보건사업의 혜택이 원활치 못한 지역의 소아 및 국민학동에게서 분리한 장내 세균 중 이열성 장내 독소생성 대장균주의 분포를 배양된 부신암 세포를 이용하여 살펴보았다. 이 열성 장내독소의 존재아래 부신암 세포는 세포의 원형화 및 seroid 생성력의 항진을 보이기에 이 두 성질에 기처를 두어 독소생선균주를 감별하였다. 실험의 결과 조사대상자의 약 10%에 해당하는 균주들이 독소 생성 균주로 밝혀졌다. 분리한 균주의 화학요법제에 대한 감수성 내지 내성도를 측정하였는데 특히 주목할 것은 이열성 장내독소 균주들의 대부분이 gentamycin(10mg)과 nalidixic acid(5mg)에 감수성이 있는데 비해, colistin(10mg), novobiocin(30mg), sulfa drug(50mg)에는 내성을 나타냈으며, 장내 질환에 널리 쓰이는 chloramp-henicol(10mg)에 대해서는 균에 따라 감수성 또는 내성을 보인데 있다. 이상의 조사로 우리나라 정상아동이 상당의 이열성 장내독소 생성균주를 보유하고 있음을 알수 있다. 이를 균주중 몇개는 장내질환 치료제로 널리 사용하는 항생제에 대해 내성을 지니고 있음을 볼 수 있었다.
본 연구는 항진 항균 작용이 보고되어진 고춧가루 함량(0% ~ 1%)에 따른 음식물쓰레기와 하수슬러지 혼합 물질(1 : 5 V/V%)의 혐기성통합소화 효과를 평가하기 위하여 수행되었다. 본 연구에서 고춧가루 함량 변화가 혐기성미생물 중 가수분해균과 메탄생성균보다 산생성균에 영향을 더 큰 줄 수 있음을 보였으며, 고춧가루함량이 가장 낮은 CAP0 (Capsaicin 0)에서 실험적 누적 메탄수율(ECMY)과 실험적 바이오생산량(EBEP)이 각각 0.17 L $CH_4/g$$VS_{fed}$와 1,465 cal/g $VS_{fed}$로 최고값으로 측정되어졌다. 그리고 고춧가루 함량이 증가함에 따라 정상운전 위하여 혐기성 미생물의 순응을 위한 기간이 필요함을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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