본 연구는 백김치로부터 분리된 Lactobacillus paracasei BK57의 항균물질 생산을 위한 최적의 배양 조건을 검색하고, BK57 유산균으로 프레쉬 치즈를 제조한 후 균주의 활성과 유산 및 박테리오신 생산량을 측정하여 Listeria monocytogenes KCTC 3569에 대한 항균 활성을 조사하였다. 최대의 균 증식과 항균 물질 생산량은 pH 6.0으로 조정한 MRS broth에서 $37^{\circ}C$, 24시간 동안 호기적인 조건으로 배양했을 때 나타났다. 하지만, 효모추출물(2.0%)을 첨가한 전유 내에서 생성된 항균물질의 양과 유산균의 증식률은 MRS broth에서 보다는 다소 낮았다. 우유 내에서 L. monocytogenes의 저해율은 BK57 균주의 생균과 배양 상등액에 의해 높게 나타났으나, 유산균이 생산한 박테리오신에 의한 저해율은 우유 보다는 BHI broth 내에서 더 높게 나타났다. BK57 균주로 발효시킨 프레쉬 치즈를 $4^{\circ}C$와 $15^{\circ}C$에서 6일간 저장하는 동안 유산균수, 유산 생성량 및 박테리오신 활성은 유의한 변화가 없었다. 제조 직 후 프레쉬 치즈에 인위적으로 접종한 L. monocytogenes ($10^5CFU/ml$)의 균수는 각각의 온도대에서 6일 이내에 최소 15% 이상 감소되는 효과가 나타났으므로 BK57 균주를 발효유제품 제조에 이용할 경우 리스테리아균을 제어할 수 있는 생물학적 보존제로서의 가치를 확인하였다.
Ola 잎에 글씨를 새긴 다음 그 홈을 Vateria acuminata Hyne의 뿌리로 만든 식물성 오일과 탄소 가루를 섞어 채운 올라 잎 기록물은 스리랑카에서 사용되는 기록 방법 중의 하나이다. 문헌상에 따르면 올라 잎 기록물은 1세기부터 18세기까지 사용되었다. Ola 잎 기록물이 400여 년 동안 보관되어 왔다는 최근의 발견과 좋은 보존 상태로 보아 이 식물성 오일이 올라 잎을 곰팡이와 곤충 같은 생물학적 요인과 환경 요인으로부터 보호해 주는 것으로 보인다. 이 식물성 오일의 항균 활성을 측정하기 위하여 해인사 장경판전에서 분리한 곰팡이와 올라 잎에서 분리한 균을 배양한 후 억제 효과를 확인하였다. 균 현탁액을 평판배지에 도말한 다음 식물성 오일을 흡수시킨 페이퍼 디스크를 평판배지에 올린다. 이 실험에서 식물성 오일은 육안 상 분명한 투명환을 형성하였으며 곰팡이나 세균과 같은 미생물의 성장을 저해하는 것을 확인하였다. 이 결과로 보아 Vateria acuminata Hyne의 식물성 오일은 항세균 및 항진균 활성을 가지고 있다는 것을 나타낸다.
전통 발효된장으로부터 α-galactosidase를 분비 생산하는 두 종류 Bacillus licheniformis 균주로 YB-1413과 YB-1414를 분리하여 당 이용능을 비롯한 생화학적 특성 및 16S rRNA 염기서열과 중합효소 연쇄반응에 의한 임의증폭 DNA 다형성의 유전학적 특성을 비교한 결과 두 균주는 매우 유사하였지만 동일 균주는 아닌 것으로 확인되었다. 탄소원으로 wheat bran을 사용하였을 때는 두 균주의 α-galactosidase 생산성이 증가하였으나, melibiose, raffinose 또는 sucrose는 효소 생산성이 급격하게 감소하였다. 질소원으로 yeast extract가 첨가된 배지에서 효소 생산성이 높았으며, YB-1413은 1.87 U/ml, YB-1414는 1.69 U/ml의 효소 생산성을 보였다. 이들 균주가 생산하는 α-galactosidases는 pH 6.0과 45℃에서 모두 최대활성을 보였으며, 낮은 농도의 ribose와 galalctose에 의해서도 효소활성이 급격하게 저해되었다. 한편 이들 효소는 대두와 콩과식품에 존재하는 항영양인자인 raffinose와 starchyose를 완전히 가수분해 하였는데, 이로 보아 분리균 YB-1413과 YB-1414는 콩 발효식품과 대두 사료의 영양가를 개선하는데 활용할 가치가 있다고 여겨진다.
진세노사이드(인삼 사포닌)는 인삼의 대표적 약리성분 중의 하나로 생물학적 활성을 가진 배당체 화합물이다. 이들 사포닌은 가수분해 되어 저분자화 되었을 때, 항주름 및 항산화, 항암 등에 높은 약리효능효과를 나타낸다. 본 연구에서는 인삼 esculin 배지를 활용하여 ${\beta}$-glucosidase 활성을 가진 균주를 분리하였고 인삼 사포닌 전환을 미생물을 이용하여 수행하였다. 본 균주들을 16S rRNA sequencing을 통하여 동정하여 본 결과 Stenotrophomonas rhizopilae strain GFC09로 확인되였다. 균주의 최적 활성 조건을 결정하기 위해 조효소 1 mM와 인삼사포닌 $Rb_1$과 함께 배양한 후 생물학적 전환을 TLC, HPLC를 사용하여 확인하였다. 조효소에 의한 인삼 사포닌 $Rb_1$의 전환 경로는 다음과 같다. LB: RbNeobio R&D center, Gyeonggi-do 16954, Korea${\rightarrow}$Rd${\rightarrow}$FNeobio R&D center, Gyeonggi-do 16954, Korea${\rightarrow}$compound K, TSB: $Rb_1{\rightarrow}Rd{\rightarrow}F_2$. 가수분해된 생성된 물질은 NMR로 구조 동정하였다. 전환 산물의 효능 분석결과, 콜라겐 생성을 농도 의존적으로 증가시키는 것이 관찰되었다. 이에 본 연구에서는 ginsenoside $F_2$와 compound K 함유 인삼 전환 산물의 주름 개선 소재로서 활용가능성을 확인하였다.
프로바이오틱스는 미생물 식품 보조제 또는 건강증진을 위해 전통적으로 유제품에 첨가되어온 세균의 구성요소이다. 본 연구에서는 프로바이오틱스로 이용되는 Bifidobacterium adolescentis SPM0212 균주의 간 보호효과를 평가하였으며, 이전 연구에서는 B형 간염 바이러스에 항 바이러스 활성을 나타내는 균주로 확인되었다. 본 연구는 Wistar albino 랫드를 이용하여 수행되었으며 프로바이오틱스를 연속해서 9일 동안 경구로 투여하고 7일째와 8일째에는 사염화탄소를 투여하여 급성 간 손상을 유도하였다. 간 손상 정도는 혈중 glutamate oxaloacetate transaminase (SGOT)와 glutamate pyruvate transaminase (SGPT)의 수치와 병리조직학적 시험을 통해 평가하였다. 그 결과, B. adolescentis SPM0212는 SGOT와 SGPT 수치의 증가를 유의적으로 억제하였으며, 사염화탄소가 체중과 장기무게에 미치는 부정적인 영향을 감소시켰다. 또한 병리조직학적 시험결과, 사염화탄소만 투여한 랫드의 간은 정상적인 간세포의 구조가 거의 소실된 반면에 사염화탄소와 B. adolescentis SPM0212를 투여한 랫드의 간은 아주 적은 손상과 정상적인 간세포의 구조를 가지고 있었다. 따라서 본 연구결과 B. adolescentis SPM0212 균주는 건강 유지를 위한 기능성 식품뿐만 아니라 제노바이오틱스나 B형 간염 바이러스로 부터 간을 보호하기위한 프로바이오틱스로 유용하게 사용될 수 있음을 시사한다.
본 연구는 home-made 요구르트에서 분리한 Lactobacillus casei SK-7과 시중에서 판매되고 있는 요구르트에서 분리한 Lactobacillus bulgaricus YK-11의 기능성을 비교 분석하기 위해 실시하였다. 먼저 분리세균인 SK-7과 YK-11의 생리화학적 특성조사를 진행하였다. 이들 균주는 16S rRNA 염기서열을 이용한 계통유전학적 분석방법으로 동정하여, 각각 L. casei SK-7와 L. bulgaricus YK-11로 명명하였다. 16S rRNA 염기서열을 바탕으로 SK-7과 YK-11의 유전적 계통수를 작성하였다. 72시간 동안 SK-7과 YK-11 배양에서 lactic acid와 acetic acid의 생산, 그리고 pH 변화를 조사하였다. 배양기간 동안 L. casei SK-7과 L. bulgaricus YK-11의 몇가지 기능성을 조사하였다. L. casei SK-7과 L. bulgaricus YK-11 배양상등액은 주어진 nitrite를 각각 93.9%와 88.2% 소거하였다. SK-7 and YK-11 배양상등액의 항산화능은 각각 62.6%와 54.9%였으며, ${\beta}$-galactosidase 활성은 14.9 units/mg과 13.1 units/mg로 측정되었다. 항미생물능력은 SK-7과 YK-11 배양의 20배 배양농축액으로 조사되었으며, SK-7은 이 조사에 사용된 모든 미생물에서 명백한 것으로 관찰되었으나, YK-11에서는 관찰되지 않았다. 부가적인 기능성 연구가 이루어져야 되겠지만, 본 연구에서는 home-made 요구르트에서 분리된 젖산균의 기능성은 시판요구르트에서의 기능성과 비교하여 우수한 것으로 조사되었다.
Actinomycetes 500계통 중 식물병원성 곰팡이(Alternaria alternata, Botryotinia fuckeliana, Colletotrichum acutatum, Colletotrichum gleosporioides, Corticium sasaki, Cylindrocarpon destructans, Fusarium oxysporium, Magnaporthe grisea, Phytophthora infestans, Phytium ultimum, Thanatephorus cucumeri)저해하는 균주를 선발하였다. CNU-A91231(Korea Agricultural Culture Collection #20938)이 식물병원성 곰팡이에 대한 억제 활성이 강한 것으로 나타났으며 16s rDNA sequence를 통해 Streptomyces griseofuscus로 동정 하였다. S. griseofuscus CNUA91231의 효율적인 배양을 위해 간단하고 실용적인 배지를 개발하였다. 이 균주의 최적 성장조건은 28, pH 6에서 aeration 조건이었다. Alanine, glutamine, proline, ammonium ion은 좋은 질소원이었다. 당밀에 Na, Cl, Ca, P, K, Mg를 첨가하였을 때는 S. griseofuscus.의 성장을 증가시키지 못하였다. 아미노산을 함유한 비료를 사용하였을 때 이 균주의 성장을 증가시켰다. 최적의 배지로서 당밀 + 1% glutamate 부산물 분말로 결정하였다. 최적 배지에서 S. griseofuscus의 배양은 이 균주의 antifungal 활성에 영향을 주지 않았다. 본 연구에서 연구된 bacterium과 배지가 작물재배에 생물학적 항 곰팡이 제재로 이용될 것으로 기대된다.
강한 항 염증 활성을 갖는 glycosyl aesculin이 Thermotoga neapolitana ${\beta}-glucosidase$의 당전이 활성을 통하여 aesculin을 수용체로 이용하여 합성되었다. 약 $2{\mu}g$의 효소를 이용하여 반응표면분석법을 통한 주요 반응 매개변수들의 최적화가 시도되었다. 각 반응 변수들의 통계분석 결과 2차 다항식모델이 적용된 유의값(p<0.05)에 잘 맞았다. Aesculin과 다른 매개변수사이의 상호관계를 의미하는 반응표면곡선 그래프는 glycosyl aesculin의 수율이 주로 aesculin의 농도와 반응시간에 영향을 받음을 나타내었다. Glycosyl aesculin의 생산을 위한 반응최적조건은 aesculin의 농도 9.5 g/l, 온도 $84^{\circ}C$, 반응시간 81분, 그리고 pH 8.2로 나타났으며, 이러한 조건하에서 효소반응시 61.7%의 전환율로 5.86 g/l 의 수율이 예상되었다. 실험을 통한 실질적인 수율은 6.02 g/l으로 나타났다. 실질적인 수율과 가까운 값을 예측 가능하다는 것을 통하여 반응표면분석법이 효소반응의 전환율을 최적화하는데 타당하다는 것이 입증되었다. 본 연구에서는 반응표면분석법을 활용하여 최적화 이전에 비하여 약 1.6배의 glycosyl aesculin을 얻을 수 있었다. 이러한 결과들은 반응표면분석법이 미생물유래 당화효소를 이용한 생물학적 활성을 갖는 배당체 합성의 생산 최적화에 효과적으로 활용할 수 있다는 것을 보여준다.
발효 김치의 보존성과 품질 향상을 위하여 천연의 항 미생물활성물질인 자일리톨(Xyl)과 자몽씨추출물(GSE) 첨가 효과를 조사하였다. 자일리톨 첨가량은 0, 1, 2%(w/w)와 자몽씨추출물 0.1%(w/w)로 하여 6가지 실험처리구(Control, A; 1% Xyl, B; 2% Xyl, C; 0.1% GSE, D; 0.1% GSE+1% Xyl, E; 0.1% GSE+2% Xyl)로 $10^{\circ}C$에서 25일동안 발효시키면서 관능적, 이화학적 및 미생물학적 특성을 보았다. 관능평가 결과 기호특성에서 조직감, 신맛, 전반적인 기호도에서 자몽씨추출물 0.1%에 2% 자일리톨을 혼합한 처리구 E가 높은 점수를 받았고, 강도특성에서 냄새와 신맛은 대조구가 높은 점수를 받았고, 조직감은 자몽씨추출물과 자일리톨 2%가 혼합된 처리구 E가 높은 점수를 받았다. pH는 점차로 낮아졌는데, 대조구가 가장 낮은 pH를 보였고, 처리구 E가 발효말기까지 높은 pH를 나타냈다. 전체 발효기간 동안 적정산도, 총균수와 젖산균수는 대조구에 비해서 자몽씨추출물 0.1%와 자일리톨 2%을 함유하는 처리구 E에서 현저히 적었다. 연구결과 자몽씨추출물 0.1%에 자일리톨 2%가 첨가된 처리구 E가 발효숙성을 조절하여 맛과 조직감을 향상시키고, 가식기간을 약 2배정도 연장시키는 것으로 나타났다.
계난백(鷄卵白) Lysozyme N-와 C 말단(末端) 항원결정기(抗原決定基)($P_{17}$: sequence $Lys^1-{cys-}^6-Asn^{27},\;{Trp^{12}}_2-Cys^{127}-Leu^{129}$)의 특이성(特異性)에 대(對)하여 연구(硏究)했다. $^{14}C-acetyl$ Lysozyme 과 정제(精製)한 guinea pig 항(抗)-$P_{17}$ 항체(抗體)와의 결합(結合)을 Scatchard plot 상(上)에서 나타낸 결과(結果) 그 실험치(實驗値)가 거의 r=1였다. 이것은 Lysozyme에 대(對)하여 각각(各各) 다른 친화성(親和性)을 가진 2개(個)의 항체군(抗體群)의 존재(存在)나 그렇잖으면 제(第)1의 항체결합부위(抗體結合部位)에 최초(最初)의 Lysozyme 분자(分子)가 결합(結合)함으로 인(因)하여 항체분자(抗體分子)의 제(第)2의 결합부위(結合部位)에 다른 Lysozyme 분자(分子)의 결합(結合)을 방해하는 즉 steric hindrance에 의한 가능성(可能性)을 시사(示唆)한다. 여러가지 peptides의 항원활성(抗原活性)을 $^{14}C-acetyl-P_{17}$과 항(抗)-$P_{17}$ 항체(抗體)와의 결합저해(結合沮害)시험에서 측정(測定)했다. 그 결과(結果) 단지 $P_{17}$과 $P_{17}t$(sequence $Lys^1-cys^5-Homoser^{12},\;Trp^{123}-cys^{127}-Leu^{128})$)만이 억제되었고 그 $K_1$치(値)가 각각(各各) $2.0{\times}10^4$과 $8.1{\times}10^3$이였다. 이들 결과(結果)를 종합(綜合)하면 $P_{17}$의 항(抗)-$P_{17}$ 항체(抗體)와의 직접적 결합부위(結合部位)는 $P_{17}$의 말단부위(末端部位)에 국재(局在)해 있는 것을 암시해 준다. 한편 $P_{17}$의 나머지 부분(部分)은 이 항원결정기(抗原決定基) 구조(構造)를 유지(維持)하는데 중요(重要)한 역할(役割)을 할 것으로 생각되며 또한 이 결정기내(決定基內)의 한 개의 disulphide 결합(結合)은 면역학적(免疫學的) 활성(活性)을 나타내는데 필수적(必須的)인 것으로 믿어진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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