백삼성분이 탐식세포를 통한 면역반응조절에 어떠한 영향을 미치는가를 알아보기 위해 total saponin이나 ginsenoside Rb$_2$성분이 마우스 복강 탐식 세포의 증식과 nitric oxide(NO)분비 및 NOS 유전자 발현에 미치는 영향을 조사해 보았다. Total saponin 또는 ginsenoside Rb$_2$성분을 탐식세포 배양액에 0-256$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ 농도로 첨가하여 배양한 후 $^3$H-thymidine incorporation법으로 분석을 실시한 결과 total saponin은 64$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ 농도에서 세포내 DNA 합성을 증가시켰으며, ginsenoside Rb$_2$ 성분의 경우 16$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ 또는 64$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ 농도에서 DNA 합성이 증가되었다. 256$\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 높은 농도에서 세포의 증식이 약간 저해되었지만 대조군에 비해 유의적인 감소는 보이지 않았다. NO 분비에 미치는 영향을 조사해 본 결과 20$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ 농도의 백삼성분을 투여했을 때 NO분비가 대조군에 비해 유의적으로 증가하였다. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)을 이용하여 백삼성분에 의한NOS 유전자 발현의 정도를 조사한 결과 20$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ 농도에서 nos gene발현이 대조군보다 증가되었다
Levamisloe(LMS)이 뱀장어의 면역반응에 미치는 영향을 측정하기 위해서 뱀장어의 혈액 및 신장으로부터 백혈구를 분리하여, 림프구의 증식능, MIF 생산능, 자연살해세포활성능, 탐식세포의 탐식능, superoxide anion, hydrogen peroxide 및 lysozyme 활성능 등을 측정하였다. LMS는 T-cell 마이토젠인 Con A 및 PHA 처리시에는 LMS 농도에 비례감소를 보인 반면에 B-cell 마이토젠인 LPS에는 LMS 처리와는 무관하게 큰 차이를 보이지 않았다. 한편 MIF 및 MAF의 생성에는 LMS 처리 농도에 비례 증가되었다. NK 세포의 활성은 LMS 첨가농도에 비례 증가하였는데, 이는 표적세포에 대한 결합율을 증가시킨 결과 NK 세포의 활성이 증가된 것으로 보인다. LMS는 백혈구의 탐식능, superoxide anion의 생성능, hydrogen peroxide 생성능 및 Iysozyme의 활성을 증가시켰다. 이러한 결과로부터 LMS가 어체의 면역작용에 관여하는 작용기전은 면역 작동세포수의 증가를 촉진시키기보다는 분화를 촉진시켜서 cytokine의 방출증가 및 세포의 기능활성을 증강시킴을 알수 있다.
연구배경: IFN-$\gamma$는 단핵식세포를 활성화시키며 여러 종류의 세포내 세균에 대한 숙주의 방어기전에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져있다. 그러나 사람에 있어서 IFN-$\gamma$의 항 결핵 효과와 작용기전에 대해서는 거의 알려진 바가 없다. 본 연구에서는 결핵의 발병기전에서 IFN-$\gamma$의 역할을 알아보기 위해 폐포대식세포의 결핵균 탐식과 TNF-$\alpha$ 생산에 IFN-$\gamma$가 미치는 영향을 알아보았다. 방 법: 활동성 폐질환이 없는 8명의 사람에게서 얻은 기관지 폐포세척액에서 폐포대식세포를 표면흡착법으로 분리하여 결핵균과 같이 배양하면서 ($1{\times}10^6$ cells/ml, $3{\times}10^7$ bacteria/ml) 배양액에 IFN-$\gamma$(300U/ml), LPS(0.5ug/ml), 자가혈청(10%)을 첨가하여 2시간 배양 후 항산성 염색(modified Kynion method)을 하여 결핵균을 탐식한 폐포대식세포를 관찰하였다. 그리고 폐포대식세포배양액에 IFN-$\gamma$(300U/ml), MTB($1{\times}106bacteria/ml$) and LPS(0.5ug/ml)를 각각 첨가하여 24시간 배양 후 상층액에서 TNF-$\alpha$의 농도를 ELISA method로 측정하였다. 그리고 IFN-$\gamma$(300U/ml), LPS(0.5ug/ml)로 24시간 자극한 폐포대식세포의 결핵균 탐식율도 관찰하였다. 결 과: IFN-$\gamma$는 폐포대식세포의 결핵균 탐식율을 증가시키지 않았으며(percentage of PAM-phagocytosed MTB: control: $22.1{\pm}4.9$, IFN-$\gamma$: $20.3{\pm}5.3$), 폐포대식세포를 24시간 자극하였을 때 폐포대식세포의 TNF-$\alpha$의 생산을 증가시키지 않았다 (control: $21{\pm}38pg/ml$, IFN-$\gamma$: $87{\pm}106pg/ml$). 그리고 IFN-$\gamma$로 24 시간 전처치한 폐포대식세포의 결핵균 탐식율 또한 증가하지 않았다(control: $24.5{\pm}9.5$, IFN-$\gamma$: $23.4{\pm}10.1$). 결 론: IFN-$\gamma$는 폐포대식세포의 결핵균 탐식과 TNF-$\alpha$ 생산에 영향을 미치지 않는다.
본 연구에서는 새싹보리 추출물과 솔잎 추출물이 치아우식원인균인 S. mutans에 미치는 항균 및 탐식작용 조절 효과를 알아보고자 하였다. 국내산 새싹보리가루와 솔잎가루의 에탄올 추출물을 이용하며 추출물의 농도에 따른 S. mutans에 대한 항균효과와 탐식작용조절 효과를 확인하였다. 그 결과 S. mutans 집락형성은 새싹보리 추출물에서는 유의적 차이가 나타내지 않았으나, 솔잎 추출물에서는 유의적으로 감소하였다. THP-1 세포의 S. mutans에 대한 탐식작용을 확인한 결과, 새싹보리 추출물에서는 유의적인 차이를 나타내지 않았으나, 솔잎 추출물에서는 면역세포의 탐식작용이 향상되었다. 따라서 솔잎 추출물은 치아우식예방을 위한 소재로 사용될 수 있음을 시사한다.
본 연구에서는 in vitro와 in vivo에서 sarcoma-180 cells과 마우스를 이용하여 김치의 세포독성 효과와 면역계, 특히 대식세포의 탐식능의 활성 증강에 미치는 효과를 중심으로 김치의 항암기작을 연구하였다. 김치가 발효되기 전인 0주(생김치)와 최적의 숙성도를 나타내는 3주 김치$(5^{\circ}C)$를 메탄올, 헥산추출물과 MSF(methanol soluble fraction)로 분리 조제하여 실험에 이용하였다. 김치추출물은 탐식능 증진효과를 나타냈으며, 0주 생김치 보다 3주 발효 김치에서 더욱더 활성이 높았다. 이러한 실험결과를 요약하면 다음과 같다. 1. Sarcoma-180 종양세포에 대한 시료의 직접적인 작용에서는 김치추출물에 의하여 총 세포수가 크게 줄어드는 것을 볼 수 있었다. 3주 발효 김치추출물은 같은 농도에서 0주(생김치) 시료 보다 세포독성작용이 더 높았다. 2. Phagocytic activity는 in vitro와 in vivo에서 대조군에 비해 김치추출물의 모든 시료에서 탐식율이 높게 나타났다. In vitro에서는 대조군이 41.3%에 비해, 3주 김치의 메탄올추출물은 57.3%, 헥산추출물에서는 49.2%를 나타냈고, in vivo에서는 대조군이 24.3%에 비해, 3주 김치의 메탄올추출물은 57.0%, MSF에서는 55.0%였다. 3. In vitro에서는 메탄올추출물에서, in vivo에서는 3주 발효 김치의 메탄올추출물과 MSF에서 대식세포 당 평균 2개 이상의 C. albicans를 탐식하고 있음을 알 수 있었으며 0주(생김치) 보다 3주 김치 추출물에서 더욱더 탐식능 증진효과를 나타냈다.
경골어류의 비장과 두신에 분포하는 대식세포의 탐식과정 및 탐식활력에 상응한 Melano - Macrophage Centers (MMCs)의 형태학적 변화가 갖는 병리학적 의의를 규명하기 위하여, 어체의 면역활성상태의 변화를 인위적으로 야기한 털라피아, Oreochromis niloticus 에 콜로이드성 탄말을 주입하여 비장 및 두신 MMCs의 병리조직학적 변화에 대한 추이를 경시적으로 추구하였다. 면역활성상태의 변화를 야기할 목적으로 Edwardsiella tarda 유래 formalin killed cell(FKC) 및 lipopolysaccharide (LPS)를 복강내 주사하거나, dexamethasone을 경구투여하였다. 각 처치군에서 모든 틸라피아의 비장 및 두신에 분포하는 대식세포의 탄말탐식유형이나, MMCs와 관련한 탄말탐식세포의 이동상은 유사하였으나, 경시적으로 본 대식세포의 탐식활력과 기존 MMCs 또는 새롭게 형성된 탄말함유세포의 응집유형에 있어서는 무처치군을 포함한 처치군간에 큰 차이를 나타내었다. 무처치군에서는 비장과 두신에 있어 다소 차이는 있으나, 두신의 경우, 탄말투여 12일이 지나서야 MMCs 내의 집적정도가 치밀하였다. 이에 반해 2 가지의 세균유래 항원을 처치한 군에서는 탄말투여 8 일째에 탄말이 기존 MMCs 내로 치밀하게 집적하거나, 탄말함유세포로만 구성된 치밀한 집괴형상을 완료한 반면, dexamethasone 을 처치한 군에서는 8일째 이후에도 탄말을 함유한 세포는 소수만이 관찰되었으며, MMCs 내로의 치밀한 집적이나 탄말함유세포의 집괴는 볼 수 없었다. 본 연구의 결과, 어체의 면역활성상태는 MMCs의 출현수, 크기, 치밀성 및 윤곽에 큰 영향을 미칠 수 있음을 강하게 시사하며, MMCs의 각종 형태학적 소견은 경골어류의 병리조직학적 소견해석에 있어서 도움을 줄 수 있는 중요한 형태학적 증거가 될 수 있는 것으로 사료된다.
전신마취제인 케타민은 흥분성 아미노산의 활성을 방해하는 N-methyl-D-aspartate (NMDA) 수용체의 비경쟁적인 길항제이다. 본 연구는 개 말초혈액 백혈구의 순간산소과소비현상(Oxidative burst activity; OBA)에 있어서 케타민의 효과를 검토하였다. 탐식세포의 OBA는 유세포 분석기로 분석하였다. 케타민을 말초혈액 다형핵백혈구(peripheral blood polymorphonuclear cells; PMN)와 monocyte-rich cells에 직접처리 하였을 때는 OBA가 감소하였으며, 또한 케타민을 처리한 말초혈액 단핵구세포(peripheral blood mononuclear cells; PBMC) 배양상층액에 의해서도 PMN과 monocyte-rich cells의 OBA가 감소하였다. 그러나 케타민을 처리한 PMN 배양상층액에 의해서는 탐식세포의 OBA에 있어서 아무런 변화가 없었다. 하지만 이러한 OBA의 감소는 latex beads를 넣어 탐식반응이 일어날 때만 측정되었다. 이상의 결과로부터 탐식반응이 일어나는 동안 케타민은 호중구와 단핵구와 같은 개 말초혈액 탐식구의 OBA에 있어 억제효과를 나타내었다.
고등균류 균사체에 대한 면역조절기능과 항알레르기성 물질을 탐색하기 위해서 우선 단백다당류를 추출 회수해서 몇 가지 관련된 실험을 수행하였다. 면역감수성이 우수한 BALB/C 마우스를 통해서 적혈구 응집과 용혈반응, 항체생산능을 확인하기 위해서 PFC와 RFC실험, 마크로파아지와 임파구 세포들의 탐식능력 실험을 수행한바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 탐식능의 결과는 상황버섯(Phellinus igniarius), 장수버섯(Fomitella fraxinea), 버들송이(Agrocybe cylindracea), 균사다당체 모두가 복강탐식세포, 말초임파구, 비장의 식세포에 대해서 유의성 있는 식작용을 확인했다 상황은 복강식세포, 버들송이는 비장식세포에 대해서 식작용을 활성화시키는 결과를 나타냈다. 2. PFC와 RFC의 실험결과에서도 대조군에 비해 시료를 투여한 실험군에서 면역세포가 상황 130%, 장수 90%, 버들송이 70% 정도로 증강된 활성을 보였다. 3. 용혈소가와 응집소가는 전반적으로 대조군에 비해 균사단백다당체가 $2{\sim}3$배의 높은 값을 보였다.
암의 성장과 신생혈관 억제인자로 알려진 thrombospondin-1의 생합성은 다양한 외부자극에 대해 전사단계에서 세포 특이적으로 조절된다. 이전의 연구에서 본 연구자들은 PMA가 정상 돼지 대동맥 내피세포(PAE)에서는 TSP-1의 발현을 감소시키는 반면 사람 간암 세포주인 Hep3B에서는 증가시키는 사실을 발견하였다. PMA 처치에 따른 정상 돼지 대동맥 내피세포에서의 TSP-1의 발현 감소현상은 tsp-1 유전자 조절부위의 염기서열 -767과 -723사이에 존재하는 염기서열이 억제 부위임을 밝혀 이러한 결과를 바탕으로 -767에서 -723 염기서열을 서로 부분 중복되도록 세 종류의 올리고 탐식자 (올리고 탐식자 a-1, -767∼-738; 올리고 탐식자 a-2, -759∼-730; 올리고 탐식자 a-3, -752∼723)를 제작하여 -767과 -723 부위의 특정 염기서열과 이에 결합하는 인자를 EMSA을 수행하여 분석하였다. 실험 결과, PMA 처치에 따른 정상 돼지 대동맥 내피세포에서의 TSP-1 감소는 -752에서 -730 사이의 염기서열이 저해 조절인자와 결합함과 더불어 -767에서 -760과 -752에서 -730 사이의 염기서열들에 촉진 조절인자들이 결합하지 못함으로서 기인된다는 실험적 사실을 관찰하였고. 특히, PMA 처치는 정상 돼지 대동맥 내피세포에서 저해 조절인자의 -752에서 -730 부위에 대한 친화력을 향상시켰으며 이러한 친화력은 c-Jun 항체에 의해 영향을 받지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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