• 한국수정란이식학회지
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• 제14권1호
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• pp.39-46
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• 1999

To establish the optimal culture systems for production of transferable embryos in Korean Cattle, pregnancy rates of IVF-derived blastocysts according to different culture media, culture method and culture duration were compared. Development of IVF-derived embryos to blastocysts was most effective in YS medium group co-cultre with cumulus cells. Blastocysts cultured for 6 to 8 d in vitro showed higher hatching rate and good quality. Pregnancy rates after transfer of IVF-derived blastocysts cultured for 7 or 8 d were high. Through our experiments, it is considered that improvement of culture media and culture method is necessary for mass production of blastocysts with excellent of good quality in Korean Cattle.

• 한국수정란이식학회지
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• 제22권3호
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• pp.155-160
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• 2007

본 연구는 돼지 체외수정란 생산효율을 향상시켜 돼지의 품종개량, 형질전환 돼지생산 등과 멸실위험에 처해 있는 유전자원의 보존을 위한 기술로 활용하기 위해 미성숙 난포란의 적정 체외성숙 시간을 알아보고, 배양액의 종류 및 체외 배양시의 산소 농도에 따른 체외수정란의 생산 효율을 확인한 결과는 다음과 같다. 1. 돼지 미성숙 난포란의 체외성숙 시간별 제2감수분열중기(M II)까지 성숙된 비율이 체외성숙 38, 40, 42시간째에 각각 61.1%, 42.9% 및 69.6%를 나타내어 그 비율이 70% 미만으로 낮은 반면, 체외성숙 44, 46, 48시간째에 각각 73.7%, 94.1% 및 100%의 체외성숙률을 나타내어 최소한 44시간 이상의 체외성숙이 필요한 것으로 조사되었다. 2. 체외배양액의 종류에 따른 배반포 발달률이 NCSU-23 18.8%, PZM-5 16.3%를 나타내어 유의적인 차이를 보이지 않았으며(p>0.05), 산소분압에 따른 배반포 발달률이 5% 산소분압에서 11.9%, 20%의 산소분압에서 15.8%를 나타내어 두 군간의 유의한 차이는 보이지 않았다(p>0.05). 3. 체외배양 7일째 발달된 배반포 수정란의 총세포수는 40개 내 외를 나타내었다. 이상의 결과, 돼지 미성숙 난포란의 체외성숙 시간은 44시간 정도가 적정한 것으로 확인되었으며, 서로 다른 배양액과 산소농도가 돼지 체외수정란의 배발달에 있어서 유의적인 차이를 나타내지는 못하였다.

• 한국가축번식학회지
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• 제22권4호
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• pp.425-435
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• 1998

본 연구는 핵이식 효율을 증진시키기 위하여 소의 핵이식에 있어서 MII 의 탈핵난자의 활성화 방법과 공핵란으로써 개별배양과 그룹배양된 수정란을 사용하여 할구분리시 발견할수 있는 할구의 크기별로 대ㆍ소로 구분하여 핵이식에 미치는 영향을 비교하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 핵이식에 있어 MII의 탈핵난자에 5$\mu$M ionomycin 에서 5분 처리후 2.0 mM DMAP 을 4시간동안 처리구, 탈핵 후 체외성축으로부터 39~43시간에 2.0 mM DMAP 올 4시간동안 처리구와 탈핵후 체외성숙으로부터 39~42시간에 실온에 3시간 두어 활성을 유도한 처리구에서 융합율은 각각 68, 74.7와 72.8%를 보여 유의적인 차이를 나타내지 않았으며, 배반포기배로의 발달율에 있어서도 10.0, 14.3와 9.0%로써 처리구간의 유의적인 차이는 보이지 않았다. 하지만 핵이식 후 7일째 배반포기 배로 발달한 수정란의 할구수에서는 각 처리구 별로 79.2개, 73.4개 그리고 53.2개로 체외성숙으로부터 39~42시간에 실용에 3시간 두어 활성화를 유도한 처리구가 다른 처리구에 비하여 유의적으로 낮게 나타났다 (P＜0.05). 2. 수정후 90시간 개별 배양 또는 그룹배양된 수정란의 평균할구수는 11.1 개로 같게 나타났으며 할구분리시 할구의 크기는 평균 46.8, 46.6$\mu\textrm{m}$로 나타났으며, 두 그룹 모두 46$\mu\textrm{m}$를 기준으로 large 와 small 로 나누었을 때 개별배양에서는 할구의 크기가 42.0, 50.9$\mu\textrm{m}$로 측정되었으며, 그룹배양에서는 41.6, 50.6$\mu\textrm{m}$로 측정되었다. 수정후 114시간 개별 및 그룹배양된 수정란의 평균할구수는 16.8개와 17.6개로 나타났으며, 할구분리시 할구의 크기는 평균 39.3, 38.7$\mu\textrm{m}$로 나타났다. 두 그룹 모두 38$\mu\textrm{m}$ 를 기준으로 Large 와 small로 나누었을 때 개별배양에서는 할구의 크기가 42.5, 35.2$\mu\textrm{m}$로 측정되었으며, 그룹배양에서는 42.1, 34.8$\mu\textrm{m}$ 로 측정되었다. 3. 핵이식 수정란의 세포융합율에 있어서 수정 후 90시간 개별배양된 수정란의 small 과 large 의 할구를 공핵체로 사용한 처리구에서 69.2 와 72.3%, 그룹배양된 수정란의 small 과 large의 할구를 공핵체로 사용한 처리구에서는 71.6와 76.3%의 융합율을 보여 유의적으로 차이를 나타내지 않았으며, 핵이식 수정란의 배반포기배로의 발달율에 있어서도 각 각 11.1, 10.2, 12.2 그리고 13.0%의 발달율을 보여 유의적인 차이를 보이지 않았다. 4. 수정 후 114 시간 개별배양된 수정란으로부터 분리된 small과 large의 할구를 공핵체로 사용한 처리구에서 핵이식 수정란의 세포융합율에 있어서 각각 71.0, 71.4, 69.9 및 77.1% 의 융합율올 보여 유의적인 차이를 나타내지 않았으며, 핵이식 수정란의 배반포기배로의 발달율에 있어서도 각각 11.4%, 8.0%, 17.2% 그리고 12.9% 의 발달율을 보여 유의적인 차이를 보이지 않았다. 이상의 결과로 보아 핵이식 수정란을 효율적으로 생산하기 위하여 수핵난자의 세포질에 ionomycin 과 DMAP 의 혼합처리로 탈핵난자의 활성화를 유도하는 것이 효율을 증진시킬 수 있었다고 본다. 또한 공핵수정란을 수정 후 90시간과 114시간 개별 배양하여 할구를 공핵체로 핵이식에 이용하였을 때도 그룹배양에 비하여 효율이 떨어지지 않음을 알 수 있었으며, 수정란의 할구 크기의 차이가 핵이식 수정란의 생산효율에 영향을 미치지 않음을 알 수 있었다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제18권2호
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• pp.157-161
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• 2003

본 연구는 소형 고양이의 불임 해결과 체외수정란을 생산하기 위한 방안으로서 난자의 형태, 번식주기, 배양시간 및 활성화 처리가 난포란의 체외수정 및 체외발생에 미치는 영향을 조사하였다. 1. 신선 및 salt에 보존한 난소로부터 회수한 난구세포부착 및 나화 난자를 각각 배양했을때 체외수정율 및 분할율은 65.7%와 17.1%, 28.6%와 8.6% 및 57.1%와 13.3%, 23.3%와 3.3%로서 난구세포 부착 신선난자가 나화 난자에 비해 높은 체외발생률을 나타냈다. 2. 휴지기, 발정기 및 황체기 단계로 구분하여 채취한 난포란을 성숙배양 후 수정시켰을 때 체외수정율은 각각 68.9%, 44.4%, 48.9%였으며, 분할율은 각각 17.8%, 8.9%, 12.8%로 나타났다 3. 24, 36 및 48시간 각각 배양한 난포란을 성숙 배양 후 수정시켰을 때 체외수정율은 각각 66.7%, 46.7%, 48.9%였으며, 분할율은 각각 17.8%, 11.1%, 8.5%로 나타났다. 4. 난자를 활성화처리 및 비활성화처리 후 각각 체외수정시켰을 때 체외수정율은 각각 57.4%와 31.4%였고, 체외분할율은 22.9%와 11.4%로서 활성화 처리를 한 난자가 높은 체외발생율을 나타냈다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제18권1호
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• pp.27-33
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• 2003

본 연구는 소형 개의 불임 해결과 체외수정란을 생산하기 위한 방안의 하나로써 난자의 형태, 번식주기, 배양시간 및 활성화 처리가 난포란의 체외성숙 및 체외발생에 미치는 영향을 조사하였다. 1. 신선, salt 및 4$^{\circ}C$에 보존한 난소로부터 채취한 난구세포부착 난자와 나화 난자로 각각 체외수정시켰을 때 16세포기로의 발생율은 14.3%, 5.0% 및 7.5%, 2.8%, 5.7% 및 0.0%로써 난구세포 부착난자군의 체외발생율이 나화 난자군에 비해 높게 나타났다. 2. 발정주기를 inactive, follicular, luteal 단계로 구분하여 채취한 난포란을 각각 체외배양시켰을 때 GV 및 MII로의 발생율은 11.3%와 9.4%, 50.7%와 26.7%, 16.9%와 13.8%였고, 16세포기로의 체외발생율은 0.0%, 10.7%, 1.5%였다. 3 신선한 난구세포 부착 난자를 각각 24, 32, 48시간 성숙배양 후 체외수정시켰을 때 분할율은 8.6%, 15.8%, 23.5%였으며, 16세포기로의 체외발생율은 각각 0.0%, 5.3%, 11.8%로써 48시간 배양군이 가장 높은 발생율을 나타냈다. 4. 활성화 처리 및 비활성화 처리 난자를 각각 체외수정시켰을 때 분할율은 각각 42.5%, 22.2%였고 16세포기로의 체외발생율은 각각 15.0%, 6.7%로써 활성화 처리 난자군이 비활성처리 난자군에 비해 높은 발생율을 나타냈다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제20권2호
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• pp.105-112
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• 2005

본 연구는 재래산양에서 복제 수정란의 생산효율을 향상시키기 위한 기초 자료를 제시하고자 체세포 핵이식을 실시하여 공핵세포의 종류, 핵이식란의 활성화 처리 방법 및 수핵난자의 조건이 체외발달율에 미치는 영향을 조사, 검토하여 핵이식란 생산을 위한 최적의 조건을 규명하고자 실시하였다. 공핵세포의 종류에 따른 핵이식란의 체외발달율은 융합이 이루어진 핵이식란의 활성화 처리 후 분할율은 귀 유래 섬유아세포를 공핵세포로 사용하였을 때가 $40.5\%$로서 태아 유래 섬유아세포를 공핵세포로 사용하였을 때의 $55.5\%$와 유의적인 차이가 없었다. 또한 상실배 또는 배반포기로의 발달율도 각각 $6.7\%$ 및 $16.0\%$로서 유의적인 차이가 없었다. 핵이식란의 활성화 방법에 따른 체외발달율은 ionomycin+6-DMAP 처리를 하였을 때 분할율은 $79.0\%$로서 전기자극을 주었을 때의 $9.5\%$보다는 유의적(P<0.05)으로 높았다. 상실배 또는 배반 포기로의 발달율도 ionomycin+6-DMAP 처리를 하였을 때는 $15.6\%$가 발달하였으나, 전기 자극을 주었을 때는 4-세포기 이후로의 발달이 전혀 이루어지지 않았다. 체세포 핵이식란은 단위발생란에 비하여 분할율$(66.1\%\;vs\;59.18\%)$ 및 상실배 또는 배반포배로의 발달율$(19.0\%\;vs\;0.0\%)$이 유의적 (P<0.05)으로 낮았다. 단위발생란의 분할율은 체내 성숙난자에서 $86.8\%$로서 난포란의 $69.0\%$보다는 유의적(P<0.05)으로 높았다 단위발생란의 상실배 또는 배반포기로의 발달율에 있어서도 체내 성숙난자$(50.0\%)$가 난포란$(23.6\%)$보다 유의적 (p.<0.05)으로 발달율이 높았다. 이상의 결과로 볼 때 재래산양의 체세포를 이용한 복제수정란의 생산효율을 향상시키기 위해서는 다수의 난자 확보를 위한 과배란처리 방법의 개선, 난포란의 이용효율 개선 및 활성화 처리방법 등이 확립되어야 하며, 후기배로의 발달율 향상을 위해서는 최적의 체외 배양조건 확립이 시급한 것으로 생각된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제22권4호
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• pp.419-424
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• 1998

토끼 수정란의 전핵에 MT-hGH 유전자를 주입하고 핵이식 기법으로 형질전환 복제수정란의 생산효율과 PCR 검색으로 복제수정란에서 유전자존재 여부를 조사한 바 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. MT-hGH 유전자를 주입하여 8- 및 16- 세포기로 자란 수정란을 공핵란으로 사용하여 핵이식을 실시하였던 바, 세포융합률은 각각 60.0%, 62.8% 로 비슷하였으나 정상수정란을 공급핵으로 사용한 80.4% 보다 유의적으로 낮은 융합률을 보였다. 그러나 이들 복제수정란의 체외발달률은 처리군간에 유의적인 차이는 인정되지 않았다. 2. 유전자 주입 후 8- 및 16- 세포기로 자란 수정란의 할구를 이용하여 핵이식으로 복제하고 체외에서 배반포까지 자란 수정란을 PCR -screening으로 유전자를 검출한 결과, 각각 23% 와 33% 의 유전자 양성 수정란을 감별하였다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제9권1호
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• pp.85-93
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• 1994

This study was carried out to investigate the effects of gonadotropins added during maturation of porcine oocytes on the in vitro maturation(IVM), in vitro fertilization(IVF) and developmental potential of embryos. The follicular oocytes were cultured in TCM-199 medium containing different combination of gonadotropins(5$\mu$g /ml FSR or 1OIU /ml PMSG and 1O$\mu$g /ml LH or 1OIU /ml hCG), 10% FCS and 10% PFF for 36~48h in a incubator with 5% $CO_2$ in Air at 39$^{\circ}C$ and then matured oocytes were again cultured to 120h after IVF for 6~7h with heparin(100$\mu$g /m')-treated sperm. When the oocytes were matured for 42brs in the medium containing FSH+LH, FSH+hCG, PMSG+LH or PMSG+hCG, the JVF rate of each treatment was 50.0%, 52.9%, 66.7% and 70.0%, respectively. The highest CEI (cumulus cell expansion index) was obtained from PMSG+hCG-added medium and the highest polyspermic penetration resulted from FSH+LH-added medium. The cleavage of IVF oocytes derived from hormone added IVM was significantly(P<0.05) promoted by PMSG+hCG and the cleavage rate after 36-h, 42-h and 48-h maturation aws 53.0%, 56.7% and 45.6%, respectively. The highest developmental potential resulted from the oocytes derived from PMSG+LH -added IVM.

• 한국수정란이식학회지
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• 제11권3호
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• pp.217-223
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• 1996

This study was conducted to investigate the effects of co-culture for the development rate to morula /blastocyst stages of early porcine embryos, derived from oocytes matured and fertilized in vitro, with porcine endometrial cell monolayers(PEM) in the two different media, respectively. The rates of embryos developed to 2-, 4-, 8~16-cell and morula /blastocyst stage were 49.6, 40.5, 28.2 and 15.3% in Ham's F-10 with PEM, and 55.3, 45.9, 32.7, and 17.6% in TCM-HEPES with PEM, respectively. The above development rates to morula /blastocyst stages were significantly higher than those of the embryos cultured in the Ham's F-10 and TGM-HEPES without PEM(P<0.05). The in vitro development rates to the morula /blastocyst stage of 1-cell embryos cultured in Ham's F-10 and TCM-HEPES without PEM were 0~1.2%. Especially, most of embryos were observed to arrest the development beyond 4-cell stages. As shown in the above results, the co-culture of in vitro produced porcine embryos with PEM in the two different media enhanced the development of fertilized eggs to morula /blastocyst stages in vitro. However, we didn't find out any differences for the in vitro development to morula /blastocyst stages between Ham's F-10 and TcM-HEPES media.

• 한국수정란이식학회지
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• 제14권3호
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• pp.163-169
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• 1999

This study was carried out to investigate the effect of co-culture system(bovine oviduct epithelial cells; BOEC) and defined culture system(modified TALP ; mTALP) on the development of IVM-IVF embryos, and survival of in vitro produced blastocysts after freezing and thawing. Occytes from the slaugheterhous ovaries were matured and fertilized using general protocol. The results obtained were as the following: 1. Survival rates of frozen-thawed blastocysts using 10% glycerol as cryoprotectant was higher in day 7 blastocysts than in Day 8 and 9 blastocysts from co-cultrue system, but survival rate of frozen-thawed blastocysts was higher in Day 10 blastocysts than in day 8 and 9 blastocysts from defined culture system. Regardless of their age, survival rate of frozen-thawed blastocysts was significantly higher (p<0.05) in co-culture system than in defined culture system. 2. The cell number of blastocysts was significanlty higher (p<0.05) in Day 7 blasotcysts than in Day 8 and 9 blastocysts from co-cultures, but the cell number of blsstocysts was significantly higher (p<0.05) in Day 10 blastocysts than in Day 8 and 9 blastocysts from defined culture system. Regardless of the culture system, blastocysts with higher cell number showed higher survival rates after freezing and thawing.